重组猪胰蛋白酶及其R122位点突变体在毕赤酵母中的高效表达及其性质研究

目的：研究R122位点突变重组猪胰蛋白酶,与野生型酶相比较,该位点对重组猪胰蛋白酶（RPT）性质的影响。方法：以毕赤酵母GS115作为表达宿主,对RPT、突变体mRPT（R122H）和mRPT（R122H/R73G/R130T）进行表达及纯化。并对其性质和稳定进行对比研究。结果：重组胰蛋白酶及其突变体在毕赤酵母中均获得了高效表达。相对于RPT,突变体mRPT（R122H）和mRPT（R122H/R73G/R130T）在以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）为底物时,具有更强底物结合力,三者的米氏常数分别为18.8μmol/L、9.0μmol/L和11.0μmol/L;两突变体耐高温耐碱能力增强;在Ca2＋存在及去除的条件下,突变体具有更强的抗自降解能力。结论：可以利用毕赤酵母高效表达重组胰蛋白酶及其突变体。mRPT（R122H）和mRPT（R122H/R73G/R130T）相对于野生型RPT,对高p H条件和高温的耐受性增强,该稳定性的提高主要归因于R122位点的突变。