稀土元素铈对提高细胞培养喜树碱产量的研究

在喜树悬浮培养细胞中,三价稀土铈(Ce3+)的诱导刺激能显著促进喜树碱的生物合成。在细胞培养的第10天加入0.1mM的Ce3+,可使喜树碱产量达到最大值13.02mg/L,是没有受到刺激的6.39倍。与此相应的是,Ce3+刺激能显著提高培养细胞苯丙氨酸裂解酶的活性,增加细胞内丙二醛的含量。

拟南芥自然居群的形态变异

对湖北省境内4个地点共9个拟南芥自然居群的形态变异作了观察和统计.该种的株高、莲座叶数目和形状、莲座大小、花果数目等性状具有显著的变异,除了莲座叶形状等性状外,多数表现出居群间的变异.采用34个形态性状对这些居群作出了聚类分析,发现大部分的相邻居群之间有一定的形态相似性,但有一个地点的相邻居群之间存在极大的形态差异;对居群间的相似性系数和空间距离进行回归分析,表明二者之间不存在显著相关性.在自然居群中获得了超小型、长根型、长叶型、大莲座型、基部多分枝型和主茎多分枝型共6种形态变异型植株,对这些变异植株进行的栽培实验显示长叶型和大莲座型的子代都具有与亲本相似而明显区别于对照植株的特征.

重组限制性内切酶Pst Ⅰ发酵条件优化

由于限制性内切酶在重组表达时具有切割宿主DNA的细胞毒性,生产难度大,其供应一直被国外企业垄断。实验室前期通过广谱甲基化保护,初步实现了部分限制性内切酶的国产化,但工艺仍停留在低密度摇瓶培养水平,产量无法满足市场需求。研究以限制性内切酶Pst Ⅰ为对象,通过单因素试验筛选了诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度、补充碳源、pH值与诱导时机等多个发酵条件。结果表明,在37℃下,开始发酵后6 h,添加终浓度1.4 mmol/L IPTG进行诱导发酵8 h,以甘油为补充碳源,控制发酵体系pH为8.0时Pst Ⅰ的表达量最高,Pst Ⅰ蛋白产量为0.0129 g/L,为未优化的2.15倍,同时酶产率为1.926×10^(6)U/L,为未优化的3.74倍。

常见呼吸道感染用药对RT-RPA方法检测SARS-CoV-2的影响

实验考察新型冠状病毒肺炎患者在治疗之前和治疗期间服用的常见呼吸道感染用药是否会对RT-RPA检测结果产生影响,以及常用呼吸道感染用药在最大血清浓度下对RT-RPA检测方法的影响。通过载体构建制备SARS-CoV-2病毒RNA模板,进而筛选相关药物及药物溶液制备,最后建立了SARS-CoV-2的RT-RPA检测体系,并评估了常见呼吸道感染用药(布地奈德鼻腔喷雾剂、磷酸奥司他韦胶囊、利巴韦林颗粒、阿奇霉素分散片、盐酸左氧氟沙星胶囊和醋酸地塞米松片)对RT-RPA方法检测SARS-CoV-2的影响。实验结果表明,6种常见呼吸道感染用药中,布地奈德、磷酸奥司他韦、盐酸左氧氟沙星和醋酸地塞米松4种药物对RT-RPA存在轻微影响或无影响,在临床中用于单独用药或组合治疗的阿奇霉素和利巴韦林,则分别会对RT-RPA反应产生抑制和促进作用。由此得出,在使用RT-RPA方法检测SARS-CoV-2时需要考虑患者的用药史。

一种来源于大菱鲆的热敏型尿嘧啶DNA糖苷酶的克隆表达及酶学性质鉴定

目的尿嘧啶DNA糖苷酶UDGase是一种广泛应用于qPCR、二代测序等领域的工具酶,由于其应用特性,只有热敏性UDGase才具有较大开发利用潜力。目前全球热敏性UDGase工具酶仅有2个物种来源,均有专利保护且价格昂贵,亟待开发新来源且具有优良热敏特性的UDGase。方法根据前人研究及序列分析推测大菱鲆(Scophthalmus maximus)具有热敏性UDGase。经验证,大菱鲆肝脏匀浆呈现UDGase活性。从大菱鲆肝脏匀浆克隆得到大菱鲆UDGase基因SmUDGase,并使用大肠杆菌工程菌株实现重组表达,分离纯化后进行活力表征检测。结果序列比对结果表明,SmUDGase基因克隆成功。重组表达并经亲和层析、离子交换层析分离纯化,获得纯酶纯度约95%,产率1.51mg/L,比活力2295.08U/mg。SmUDGase具有热敏性,在40℃时酶活即开始迅速降低。其他酶学性质,如pH适应范围、金属离子依赖性和对抑制剂的敏感性均与当前商业化UDGase一致。结论成功克隆并鉴定来自大菱鲆的新来源SmUDGase,该酶具有热敏感性,酶学特性接近目前商业化UDGase。并探索该酶的重组表达和纯化工艺,所得纯酶基本达到商业化生产水平,为该类型生物工具酶的开发提供了理论参考和技术储备。