虚拟仿真和产教研融合建设“动物繁殖学教学实习课程”思政教学实践研究

“动物繁殖学教学实习”是动物科学的专业必修课,课程教学目的是使学生能够掌握一定的现代动物繁殖技术,培养服务于畜牧业生产及相关科学研究的创新型人才。广西大学动物繁殖学教学团队结合自身学科发展和课程特点深入挖掘思政元素,开展教育教学方法创新改革,将课程思政和育人元素融入教学,培养畜牧业高质量发展所需人才。本课程教学以立德树人为根本,建设虚拟仿真教学资源,进行课前、课中、课后的思政融合,虚拟仿真与传统课程融合,产学研融合的思政教学模式,建立课程思政的考评机制等实践策略,实施课程思政建设和改革,提升学生专业认同感,增强服务“三农”的责任和担当。

新农科背景下动物医学虚拟仿真实践教学平台助推双创教育的探索

随着科技的不断发展,虚拟仿真技术在各个领域的应用越来越广泛。动物医学专业作为培养高素质兽医人才的重要基地,如何利用虚拟仿真实践教学平台培养学生的创新和创业能力是当前亟待解决的问题。本文阐述了高校动物医学专业在双创型人才培养中遇到的问题,虚拟仿真“双创”实践教学资源平台建立背景和建设思路以及对平台建设的一些建议,旨在进一步提高高校虚拟仿真实践教学的质量和水平,培养一批创新意识和创业能力强的动物医学人才。

新农科背景下动物医学虚拟仿真实验教学平台建设与思考

1引言“新农科”建设以强农兴农为己任,积极培养创新型农业人才,是当前我国涉农本科专业改革的重要指南。习近平总书记给全国涉农高校的书记校长和专家代表回信则为新农科建设指明了前进方向,提供了根本遵循和行动指南。动物医学是我国农业科学的重要组成部分,也是医学的一个分支。在新农科背景下,动物医学专业在研究对象、研究领域、研究方法、培养体系和社会需求上不断丰富拓展,这要求培养的学生必须具备扎实的基础知识、广阔的视野和创新能力。

FSH+LH添加方式、半胱氨酸、EGF对猪IVM卵母细胞早期孤雌发育的影响

为探讨IVM液中FSH+LH添加方式、半胱氨酸和表皮生长因子(EGF)不同浓度对猪IVM卵母细胞早期孤雌发育的影响,将在不同成熟体系中IVM44 h后的卵母细胞经化学激活后放入NCSU-23中培养,分别于第2、7天统计分裂率和囊胚发育率。结果表明:①IVM液添加有FSH+LH且在培养22 h后更换添加有FSH+LH的IVM液继续培养22 h,其分裂率(83.76±9.95)%和囊胚发育率(23.49±7.74)%显著高于添加FSH+LH连续培养44 h、中间不换液的处理(P<0.05);②IVM液中添加1.2 mmol/L半胱氨酸的囊胚发育率(28.13±10.9)%显著高于添加0、0.3、0.6 mmol/L半胱氨酸的处理,差异显著(P<0.05);③IVM液中添加10 ng/mL EGF的囊胚发育率(23.49±7.74)%显著高于其他浓度处理(P<0.05)。可见:在该研究条件下,IVM液添加有FSH+LH且在培养22 h后更换添加有FSH+LH的IVM液继续培养22 h,并添加1.2 mmol/L半胱氨酸、10 ng/mL EGF,有利于促进猪IVM卵母细胞早期孤雌发育。

不同生理状态及激素量对小鼠超数排卵及后续胚胎发育的影响研究

探讨不同生理状态及激素量对小鼠超数排卵后取胚效果及后续胚胎发育的影响。结果发现,不同生理状态:①超排效果,发情间期(29.52枚/只)与发情期(29.12枚/只)超排结果差异不显著(P>0.05);②胚胎发育,发情间期组所得分裂率和囊胚率(81.99%,58.54%)略高于发情期(81.18%,57.83%),但差异不显著(P>0.05)。不同激素量:①超排效果,5 IU PMSG+5 IU HCG注射组略高于10 IU PMSG+10 IU HCG,但差异不显著(P>0.05);②胚胎发育效果,两种激素注射方式差异不显著(P>0.05),2试验组分裂率所得效果相近;5 IU PMSG+5 IU HCG注射组(68.08%)囊胚率高于10 IU PMSG+10 IU HCG注射组(53.33%)。结论:在发情间期,采用5 IU PMSG+5 IU HCG的激素量进行超排,所得超排及后续胚胎发育效果较好。

培养液体积对猪孤雌胚早期发育的影响

为了探讨培养液体积对猪早期孤雌胚发育的影响,旨在优化猪早期胚胎培养体系。试验一、二、三、四分别把30、20、15、10个枚孤雌激活胚放入60,45,30,15,10,5μL(10个胚胎)的培养滴,第48小时观察分裂率,第168小时观察囊胚形成率。结果表明:试验一:30~60μL组囊胚率略高于10~15μL组;试验二:60μL组的囊胚率略高;试验三:各组分裂率和囊胚率差异不显著(P>0.05),但45~60μL组分裂率和囊胚率比其他组略高;试验四:15μL组分裂率高于45μL组(P<0.05),15μL组囊胚率显著高于5μL组(P<0.05),其余各组差异不显著。由此表明:30枚猪孤雌胚时,胚胎数∶培养滴体积=1∶(1~2)较好;15~20枚猪孤雌胚时,胚胎数∶培养滴体积=1∶3较好;10枚猪孤雌胚时,胚胎数∶培养滴体积=1∶1.5较好。

不同月份猪卵母细胞体外成熟效果比较

【目的】分析卵母细胞发育与不同季节（月份）的相关性，为提高猪卵母细胞的体外成熟效率奠定基础。【方法】2012年2～6月从南宁市某屠宰场收集猪卵巢采集卵母细胞，经体外成熟（IVM）40-44h，然后随机挑出成熟后的卯母细胞进行地衣红染色，相差显微镜下观察、记录卵母细胞发育成熟的各个时期，并分析卵母细胞发育时期与不同月份温度、湿度的相关性。【结果】随着月份的增加，GV期和GVBD期卵母细胞所占比例整体上呈下降趋势，AT期所占比例呈上升趋势，除5月外，MII期所占比例整体上也呈上升趋势，6月MII期所占比例最高，为42．31％。2、3、4月的GVBD期所占比例显著高于6月所占比例（4．40％）（P〈0．05）。从卵母细胞发育时期与不同月份温度、湿度的相关性分析结果可知，GV期、GVBD期、MI期3个时期与温度变化呈负相关，与湿度变化呈正相关；而AT期、MII期与温度变化呈正相关，与湿度变化呈负相关。【结论】不同月份猪卵母细胞的ⅣM效果存在一定差异。在高湿低温月份，GV期和GVBD期的卵母细胞所占比例较大，MII期所占比例较小；而在低湿高温月份，Gv期和GVBD所占比例较小，MII期所占比例较大。

虚实结合的动物繁殖实践教学方法改革研究

动物繁殖技术操作实践是动物繁殖学课程教学的重要环节,对提高学生基础知识的理解和对繁殖技术的掌握具有重要意义。该文探讨了新时代教育背景下利用虚拟仿真实验教学和传统教学相结合的教学方式,开展动物繁殖教学实践教学模式的改革与探索。实施结果表明,虚实结合的教学模式可以激发学生学习的积极性,提高学习趣味性,利于学生创新能力及实践能力的培养,提升了教学效果。

结合科研实验平台开展本科实验项目的实践与思考——以“动物繁殖学”创新实验项目为例

“动物繁殖学”本科实验教学,由于教学内容、教学条件等方面的限制,不能满足人才培养的要求。以开展“水牛卵子体外受精及后续胚胎发育观测”创新项目为例,尝试结合科研实验平台,开展受实验场地和实验条件等因素限制而无法进行的本科教学活动。项目实施培养了学生的创新和实践能力,激发了学生的学习兴趣及科研探索精神,提升了教学质量,为今后结合科研平台资源开展本科实验教学的教学模式提供了实践经验和理论参考。

不同时间间隔进行激活处理对猪早期ICSI胚发育的影响

[目的]探讨不同激活方法对胞质内显微受精（ICSI）猪卵母细胞原核形成及其早期发育的影响。[方法]以体外成熟44~48 h的猪卵母细胞为试材,通过用ICSI法对其进行受精,然后用不同激活方法激活,研究了不同激活方法对ICSI卵母细胞原核形成和早期胚胎发育的影响。[结果]化学激活处理组的猪卵母细胞的原核形成率显著高于没有经过激活处理组,Ion（5 min）＋6-DMAP（4 h）组的原核形成率为38.08%,Ion（5 min）＋NCSU23（3 h）＋6-DMAP（4 h）组的原核形成率为47.78%。各处理组的分裂率差异不显著,但2个激活处理组的分裂率较高。不经激活处理组的囊胚率为3.82%,Ion（5 min）＋6-DMAP（4 h）组的囊胚率为15.49%,Ion（5 min）＋NCSU23（3 h）＋6-DMAP（4 h）组的囊胚率为10.70%。[结论]2种激活方法的原核形成率和囊胚率差异不显著,都可用于ICSI猪卵母细胞的激活。

食蟹猴耳部成纤维细胞体外培养体系的初步建立

建立食蟹猴耳部成纤维细胞的体外培养体系,为食蟹猴体细胞核移植、转基因技术及治疗性克隆做准备。通过组织块培养法进行原代培养,成功分离了食蟹猴耳部成纤维细胞;原代培养后用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA消化液消化细胞,用含10%FBS的DMEM对细胞进行培养,细胞在体外传至第25代;用含10%FBS和10%DMSO的DMEM为冷冻液对细胞进行冷冻保存,解冻传代后,细胞形态和生长速度没有明显变化;用细胞技术法绘制细胞的生长曲线显示,符合体外细胞生长规律;用吉姆萨染色法对不同代数细胞的染色体倍性进行分析,二倍体细胞所占比例为80%以上。

猪器官异种移植研究进展

随着临床医学的发展和免疫抑制剂的开发利用,同种器官移植已获得显著成效,但器官资源缺乏严重阻碍其广泛应用,因而异种器官移植受到高度重视,目前认为猪是较理想的异种器官来源。文章阐述了猪器官异种移植中的免疫障碍以及克服排斥策略、免疫耐受在异种移植中的应用、异种移植存在的生理活动障碍等问题,同时提出加强对转基因猪作为异种器官移植模型的研究,并尽快出台和完善异种器官移植相关伦理法规和指导原则等建议。

胰岛素和胚胎培养密度对猪孤雌胚早期体外发育的影响

为了探讨胰岛素和胚胎培养密度对猪孤雌胚早期体外发育的影响,进一步优化猪早期胚胎培养体系,分别进行了胚胎培养液（NCSU-23）中添加不同批号和浓度的胰岛素以及不同胚胎培养密度（培养滴体积）对猪孤雌胚早期胚胎体外发育的影响试验,并于第2、7天分别统计胚胎分裂率和囊胚发育率。结果表明：①在NCSU-23中添加5.0μg/mL批号为I-1882（Sigma公司）的胰岛素,其囊胚发育率最高,为（33.48±12.79）%;②在体外培养25枚猪孤雌胚时,按胚胎数（枚）l培养液体积（μl）为1∶2.0~1∶3.0的比例进行培养,其培养效果较好。

基于AMEL基因位点差异的水牛性别PCR鉴别方法

【目的】建立检测不同性别水牛染色体AMEL基因位点差异的PCR鉴别方法,为水牛早期胚胎性别鉴定及水牛分离精子重分析提供简便可靠的检验手段。【方法】采用PCR扩增不同性别水牛染色体中的AMEL基因,Clone Manager 9.0软件分析序列差异,BLASTn程序分析基因同源性,MEGA 6.06软件构建系统发育进化树。【结果】以水牛血液基因组DNA为模板、amel B1为引物,引物退火温度60℃,公水牛可扩增出两条清晰条带,长度分别为376（AMEL-X基因）和304 bp（AMEL-Y基因）;母水牛仅扩增出1条清晰条带,长度为376 bp（AMEL-X基因）。与AMEL-X基因相比,水牛AMEL-Y基因缺失155-226区域的72 bp,同时存在20个基因型多态位点。临床检测结果证实,基于AMEL基因的PCR鉴别结果与实际性别的吻合率达100%,amel B1引物的灵敏度为0.5 ng模板量。BLASTn比对分析结果显示,水牛AMEL-X和AMEL-Y基因与不同哺乳动物的对应序列存在高度保守性,其相似性均接近或高于90%,与牛存在最近的亲缘关系。【结论】AMEL基因在哺乳动物中高度保守,且在不同性别水牛中呈多态性特征,以其作为分子靶标建立的水牛性别PCR鉴定方法切实可行,为水牛早期胚胎性别鉴定及水牛分离精子重分析提供了一个更便捷、高效的检验手段。

水牛卵母细胞玻璃化冷冻后孤雌激活方法的优化

【目的】了解玻璃化冷冻—解冻及不同孤雌激活条件对水牛卵母细胞发育潜能的影响,为构建完善的水牛卵母细胞孤雌激活培养体系奠定基础。【方法】利用玻璃化冷冻法对水牛体外成熟卵母细胞进行冷冻保存1-2 d,解冻复苏后进行孤雌激活,以新鲜的体外成熟卵母细胞为对照,探讨离子霉素浓度、6-二甲氨基嘌呤（6-DMAP）浓度和处理时间对玻璃化冷冻复苏后水牛卵母细胞孤雌激活效果的影响。【结果】与新鲜的体外成熟卵母细胞相比,玻璃化冷冻—解冻复苏后水牛体外成熟卵母细胞孤雌激活的卵裂率、4-细胞率、8-细胞率和囊胚发育率均极显著降低（P〈0.01）。水牛体外成熟卵母细胞经玻璃化冷冻—解冻复苏后,以3.5μmol/L离子霉素激活5 min联合2 mmol/L 6-DMAP培养2 h的孤雌激活效果最佳,其卵裂率、4-细胞率、8-细胞率和囊胚发育率分别为60.6%、45.1%、33.7%和14.8%。【结论】水牛体外成熟卵母细胞经玻璃化冷冻—解冻复苏后,其激活阈值发生改变,因此不宜采用与新鲜体外成熟卵母细胞一致的激活程序进行孤雌激活。

EGF·Insulin和IGF-I对食蟹猴耳部成纤维细胞体外增殖的影响

探讨了培养基中不同浓度血清情况下，分别添加不同浓度的表皮生长因子（EGF）、胰岛素（Insulin）和胰岛素样生长因子-I（IGF-I）对食蟹猴耳部成纤维细胞体外增殖的影响，目的是寻找这3种物质促进体外培养成纤维细胞的最佳浓度，改善细胞体外培养系统，为以后体细胞及干细胞培养提供参考。将处于对数生长期的10～15代细胞进行常规消化混匀，计数，接种，培养24h后分别向孔中加入含5％和10％的两种血清浓度、添加不同浓度的EGF、Insulin和IGF-I的培养基，6d后分别向孔中加入MTT，然后用酶联免疫检测仪测定各孔在492nnl处的吸光度值（0D）。血清浓度为10％情况下，培养基中添加10ng／ml EGF、10μg／ml Isulin、100ng／ml IGF-I时，食蟹猴耳部成纤维细胞增殖能力最好。

大菱鲆主要器官的组织学观察

应用光学显微技术对大菱鲆(Scophthalmus maximus)心脏、胃、肠、肝脏、胰脏、脾脏、肾脏的结构进行了组织学观察。结果显示,大菱鲆的心脏分为心内膜、心肌层和心外膜,其中以心肌层为最厚。胃、肠的管壁由内向外分为:黏膜层、黏膜下层、肌层和浆膜。胃腺内偶见含有嗜酸性颗粒的细胞。肠皱襞较高,黏膜上皮为单层柱状上皮,杯状细胞散在于柱状上皮细胞之间。肝细胞体积较大,呈多边形,肝细胞以中央静脉为中心,排列成凹凸不平的肝细胞索,相邻的肝细胞索互相吻合连接成网状。胰脏大部分附着于肠壁上,少部分埋藏在肝脏内。脾脏实质分为白髓和红髓,中央动脉数量较多。肾脏无皮质髓质之分,由肾小体和肾小管构成。

水牛GV期和MⅡ卵母细胞中脂肪含量及分布模式研究

【目的】探讨水牛GV期未成熟卵和MⅡ期成熟卵母细胞中脂肪的含量及分布状态,为研究脂肪在水牛卵母细胞体外成熟过程中的作用及卵母细胞体外成熟体系的优化提供参考。【方法】从南宁市某屠宰场收集水牛卵巢并采集卵丘卵母细胞复合体,其中一部分复合体用于收集GV期未成熟卵母细胞,另一部分经体外成熟22～24 h后,获得MⅡ期成熟卵母细胞。之后把GV期和MⅡ期的卵母细胞放入含有10μg/m L Nile red的染色液中,室温黑暗环境中染色4～5 h后,在荧光显微镜下观察,拍照。根据所得照片观察卵母细胞中脂肪分布模式,同时借助Image J软件计算荧光强度,以荧光强度来计算卵母细胞中脂肪含量。【结果】MⅡ期卵子中脂肪含量显著低于GV期脂肪含量(66. 63±1. 197 vs. 70. 81±1. 328,P <0. 05)。GV期和MⅡ期卵母细胞中脂肪各类分布模式没有统计学上的差异(外围分布:3. 148±2. 298 vs. 5. 342±3. 858;半均匀分布:30. 85±4. 042 vs. 35. 70±4. 265;均匀分布:66. 00±3. 257 vs. 60. 60±3. 933,P> 0. 05)。【结论】从GV期未成熟卵母细胞到成熟MⅡ期卵母细胞成熟过程中,水牛卵子内脂肪含量显著降低,而卵母细胞成熟前后脂肪分布模式没有发生改变,多数以均匀分布模式为主。

精子浓度和授精前孵育时间、精卵共孵育时间对猪卵母细胞体外受精效果的影响

研究探讨精子的浓度和授精前孵育时间、精卵共孵育时间对猪卵母细胞体外受精及进一步早期发育的影响。试验结果表明,在本研究条件下进行猪卵母细胞体外受精时:(1)精子的适宜浓度为1×106个/ml;(2)精子洗涤后不需要孵育就可直接用于授精;(3)精卵共孵育3h效果较好。

不同激活方法对猪ICSI卵早期发育的影响

[目的]探讨不同激活方法对猪单精子显微受精(ICSI)胚发育的影响。[方法]冷冻精子解冻洗涤后直接应用于ICSI,ICSI后采用不同激活方法激活卵母细胞,检测其原核形成情况。[结果]结果表明,单纯电脉冲激活以及电脉冲与6-DMAP联合激活其受精率分别达53.3%和60.4%,对ICSI卵雌雄原核形成的影响差异不显著(P>0.05);ICSI后采用不同激活方法激活卵母细胞,检测猪ICSI卵胚胎早期发育情况,单纯电脉冲激活囊胚率达13.0%,显著高于对照(P<0.05)。[结论]单纯电脉冲激活能促进猪ICSI胚胎的早期发育。