小檗碱抗肿瘤作用研究进展

随着对小檗碱抗肿瘤作用研究的深入,发现小檗碱对多种肿瘤有抑制效应,本文就近年来小檗碱抗肿瘤的分子机制进展情况进行综述。

光动力学疗法对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨5-氨基乙酰丙酸-光动力学疗法(ALA-PDT)对体外培养的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖及其细胞周期的影响。方法以体外培养的人皮肤鳞状细胞癌A43l细胞株为研究对象,一组为对照组(不处理),另一组为ALAPDT组(0.4 mg/ml的ALA避光孵育3 h后行激光照射),银染细胞后镜下观察,并计算核仁组成区的相对面积;采用流式细胞术分析光动力学治疗后各细胞周期中细胞分布比例,并计算增殖指数。结果光动力学治疗后A43l细胞株细胞内核仁组成区的相对面积显著降低。流式细胞仪检测结果表明光动力学治疗组S期峰低于对照组,S期细胞比例显著降低为(9.2±2.1)%。对照组和光动力学治疗组的增殖指数分别为(47.0±3.4)%和(31.1±3.1)%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 5-氨基乙酰丙酸-光动力学疗法能够抑制A43l细胞株的过度增殖,改变其细胞周期分布。

基于Android的“创意科普”APP的开发与应用

近年来,随着Android智能手机的出现和普及,基于手机客服端的软件涵盖了人们日常生活中的方方面面。本文详细介绍了"创意科普"这款与我们生活息息相关的软件开发与实现的过程:首先阐述编写目的,项目背景;其次根据适应人群,需求分析设计五大功能。在需求分析部分中,主要对应用程序的整个模块进行划分和功能描述,其中详细设计部分则阐述了应用程序的各个核心模块的具体实现。

角蛋白18与剪切因子PSF相互作用介导PSF的膜易位并维持髓系白血病细胞的化疗敏感性

目的:鉴定多嘧啶结合蛋白相关的剪切因子(polypyrimidine tract-binding protein-associated splicing factor,PSF)在髓系白血病细胞内的伴侣蛋白,探讨PSF在敏感HL60细胞和耐药的HL60/DOX细胞中易位细胞膜的模式和机制。方法:通过脂质体瞬时转染PSF真核表达载体过表达PSF,进一步结合流式细胞术在转染后24 h、48 h、72 h检测PSF在细胞膜上的表达水平。构建链亲和素结合肽(streptavidin binding peptide,SBP)和PSF的融合表达载体,转染载体,过表达SBP-PSF融合蛋白。通过链亲和素磁珠共沉淀法和质谱分析,鉴定PSF在细胞内的伴侣蛋白。在慢病毒载体中插入角蛋白18(cytokeratin 18,K18)干扰序列,转染293T细胞制备病毒液。用慢病毒感染HL60和HL60/DOX细胞,获得稳定干扰K18的细胞株。结合流式细胞术检测干扰K18的HL60和HL60/DOX细胞中细胞膜上PSF的表达水平,由此证实CK18在HL60和HL60/DOX细胞中协同转运PSF易位细胞膜机制的异同。结果:瞬时过表达PSF后的24 h、48 h、72 h连续3 d检测细胞膜PSF表达水平,HL60敏感株细胞膜上PSF表达率分别为22.4%±3.5%、37.9%±6.0%、58.3%±8.8%;耐药株HL60/DOX细胞膜上PSF的表达率分别为4.7%±0.5%、3.9%±0.6%、2.9%±0.6%;各时间点下敏感株和耐药株的差异有统计学意义,P<0.01。免疫共沉淀和质谱证实K18为PSF在细胞内的伴侣蛋白。干扰K18的表达后,再次分析细胞膜PSF表达,发现PSF在敏感株细胞膜上的表达水平由原来的48.9%±5.4%降至6.2%±1.0%;在耐药株细胞膜上的表达水平由9.11%±1.2%降至2.21%±0.51%。结论:K18是PSF在细胞内的伴侣蛋白,在敏感细胞中,K18与PSF相互作用可帮助PSF向细胞膜转运;而在耐药株中,由于该功能障碍导致PSF在胞内发生积累从而介导耐药性。

S100钙离子结合蛋白A14在乳腺癌中的表达及调控机制

目的：探讨S100钙离子结合蛋白A14（ S100A14）在乳腺癌组织中的表达以及表皮生长因子（ EGF）与S100A14的反馈调节机制。方法实时定量PCR检测51例乳腺癌组织和正常乳腺组织中S100A14 mRNA的表达以及EGF刺激或细胞外信号调节激酶（ p-ERK）抑制剂后细胞中S100A14 mRNA的表达。 Western blot 检测21例乳腺癌组织和正常乳腺组织中 S100A14蛋白的表达以及p-ERK抑制剂处理后细胞中S100A14蛋白的表达。 siRNA敲降S100A14后，采用Western blot检测细胞中S100A14、p-ERK和总ERK的表达。结果 S100A14 mRNA和蛋白在21例乳腺癌组织中的表达均升高（均P＜0．05）。 S100A14 mRNA高表达组乳腺癌患者的复发率高于 S100A14低表达组（P＝0．038）。 MDA-MB-453细胞中，1 ng／ml EGF组和10 ng／ml EGF组S100A14 mRNA相对表达水平分别为1．50±0．11和1．40±0．03，与对照组（1．00±0．09）比较，差异均有统计学意义（均P＜0．05）。 MCF-7细胞中，1 ng／ml EGF组和10 ng／ml EGF组S100A14 mRNA相对表达水平分别为1．66±0．08和1．71±0．17，与对照组（1．00±0．03）比较，差异均有统计学意义（均P＜0．05）。 TD47细胞中，1 ng／ml EGF组和10 ng／ml EGF＋U0126组S100A14 mRNA相对表达水平分别为1．56±0．04和1．00±0．10，与对照组（1．00±0．04）比较，差异均有统计学意义（均 P＜0．05）。敲降 S100A14能降低细胞 p-ERK 水平。过表达S100A14能够促进S100A14分泌。结论 EGF通过p-ERK信号通路促进S100A14 mRNA和蛋白的表达，EGF与S100A14之间可能存在反馈循环。

血液肿瘤二代测序实验室检测规范化的建议

二代测序技术对血液肿瘤的诊疗具有重要意义,为了科学、合理地将二代测序技术应用于血液肿瘤的筛查、诊断、疗效监测、预后评估和复发预测,项目组依据国内外指南及共识,结合国内实际情况,在反复讨论与调研的基础上草拟了适用于血液肿瘤二代测序实验室检测的规范化建议。

有机阴离子转运多肽1B3基因遗传变异与TA方案新辅助化疗乳腺癌患者预后的关联研究

目的探讨有机阴离子转运多肽1B3(OATP1B3)基因单核苷酸多态性(SNP)与TA方案(蒽环类药物+紫杉类药物)新辅助化疗乳腺癌患者预后的关系。方法439例采用TA方案行新辅助化疗的女性乳腺癌患者,化疗前每人抽取静脉血2 ml,筛选标签SNP,采用Sequenom MassARRAY基因分型平台进行标签SNP分型,并分析标签SNP与乳腺癌患者预后的关系。采用多因素Cox回归分析计算进展或死亡风险比(HR)及其95%可信区间(CI)。结果筛选出7个标签SNP,分别是rs11045689、rs200104106、rs3764006、rs3834935、rs4149117、rs7305323和rs73241801。rs11045689与患者无进展生存、总生存有关(P值分别为0.008和0.015)。与携带rs11045689 GG基因型的患者相比,携带rs11045689 AA基因型患者的无进展生存和总生存较差,进展风险比(HR)及其95% CI为1.39(1.11~1.75),死亡HR及其95% CI为1.38(1.04~1.83)。与携带rs73241801 CC基因型的患者相比,携带rs73241801 TT基因型患者的总生存较好(P=0.041),死亡HR及其95%CI为0.65(0.44~0.94)。累积分析显示,携带风险等位基因的数量与患者的无进展生存、总生存均有关(P值分别为0.012和0.017)。与携带0~1个风险等位基因的患者相比,携带4个风险等位基因患者的无进展生存和总生存较差,进展HR及其95% CI为1.37(1.09~1.72),死亡HR及其95% CI为1.36(1.02~1.81)。结论SLCO1B3基因rs11045689和rs73241801与TA方案新辅助化疗乳腺癌患者的预后有关,可作为预测乳腺癌新辅助化疗患者预后的生物标志物。

基于IRES转录效率不同构建绿色荧光蛋白差异表达载体

目的根据IRES末端序列的不同,构建4个GFP表达强度不同的逆转录病毒载体,为后续流式检测或成像提供基础。方法利用脑心肌炎病毒IRES的转录效率依赖于其末端的基因序列,通过重叠PCR方法将IRES与EGFP融合成4个不同连接方式的片段,然后克隆至逆转录病毒载体pMSCV-NGFR中;PCR扩增NGFR片段,克隆至逆转录病毒载体pMSCV-IRES-EGFP前面;逆转录病毒载体pMSCV-NGFR-IRES-EGFP转染293T细胞,分析EGFP的表达比例和平均荧光强度(MFI),同时分析NGFR的表达。结果成功构建4个逆转录病毒载体pMSCV-NGFR-IRES-EGFP;在293T细胞转染4个逆转录病毒载体,24 h和48 h时EGFP的表达效率没有明显差异,但荧光强度却有明显不同,同时NGFR的表达没有明显不同,说明IRES与EGFP之间加入不同的核苷酸序列,会使EGFP的荧光强度呈现明显差异。结论 EGFP的表达强度受IRES与EGFP之间序列的影响,不同强度EGFP的逆转录病毒载体可以适用于不同的实验要求。

三磷酸腺苷结合盒转运体C2基因遗传变异与TA方案新辅助化疗乳腺癌患者骨髓抑制的关联研究

[目的]探讨三磷酸腺苷结合盒转运体C2(ATP binding cassette subfamily C member 2,ABCC2)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与TA方案(紫衫类药物+蒽环类药物)新辅助化疗乳腺癌患者骨髓抑制的相关性。[方法]556例采用TA方案新辅助化疗的女性乳腺癌患者,化疗前抽取2ml静脉血,筛选标签SNP,采用Sequenom MassARRAY基因分型平台进行标签SNP分型,并分析标签SNP与乳腺癌患者骨髓抑制的关系。采用多因素Logistic回归分析计算风险比及其95%可信区间。[结果]筛选出3个标签SNP rs717620、rs3740066、rs2273697。与携带rs717620CC基因型相比,携带rs717620 CT基因型患者骨髓抑制程度更重,OR及其95%CI为1.72(1.18~2.52)。与携带rs3740066 CC基因型相比,携带rs3740066 CT基因型患者骨髓抑制程度更重,OR及其95%CI为1.47(1.02~2.12)。累积分析显示,随着风险基因型个数的增加,乳腺癌新辅助化疗患者的骨髓抑制风险增加,OR及其95%CI为1.27(1.05~1.53);与0个风险基因型相比,携带2个风险基因型患者骨髓抑制程度更重,OR及其95%CI为1.30(1.07~1.57)。[结论]ABCC2基因rs717620和rs3740066与TA方案新辅助化疗乳腺癌患者的骨髓抑制相关,可作为预测乳腺癌新辅助化疗患者骨髓抑制的生物标志物。

羧肽酶E促进淋巴细胞跨血管内皮细胞迁移的研究

目的研究羧肽酶E如何促进淋巴细胞及其亚群跨血管内皮细胞进行迁移。方法利用CRISPR/Cas9技术对MS1细胞上的基因cpe进行敲除;淋巴细胞与血管内皮细胞黏附试验比较淋巴细胞对MS1细胞和敲除细胞Cpe^-/-MS1的黏附能力,RT-PCR及流式方法比较MS1细胞和敲除细胞Cpe^-/-MS1表面黏附分子的表达;Transwell试验比较淋巴细胞及其亚群穿过MS1细胞和敲除细胞Cpe^-/-MS1的能力。结果我们成功获得了敲除细胞系Cpe^-/-MS1;在TNF-α刺激下,淋巴细胞对MS1细胞的黏附能力显著高于敲除细胞Cpe^-/-MS1;在TNF-α刺激下,MS1细胞表面黏附分子的表达量显著高于敲除细胞Cpe^-/-MS1;在TNF-α刺激下,淋巴细胞及其亚群穿过MS1细胞的能力显著高于敲除细胞Cpe^-/-MS1。结论羧肽酶E影响淋巴细胞与血管内皮细胞的黏附及跨血管内皮细胞迁移,本研究对于深入理解淋巴细胞跨血管内皮细胞向外周淋巴结迁移具有重要指导意义。

猪链球菌2型98HAH33基因0955的功能研究

目的对猪链球菌2型98HAH33基因0955进行功能研究。方法比较野生株、突变株和回复株在不同时期的生长情况,细菌黏附和血中存活比较它们对宿主黏附和抗吞噬能力的差异,小鼠和仔猪模型比较它们在毒力方面的差异。结果突变株和回复株在对数生长期生长略慢于野生株,但在平台期生长情况一致;细菌黏附证明基因0955可能是猪链球菌2型98HAH33的一个新黏附因子;血中存活证明基因0955和抗吞噬无关;小鼠和仔猪实验证明基因0955可能是猪链球菌2型98HAH33的一个新毒力因子。结论猪链球菌2型98HAH33基因0955可能是新鉴定的黏附因子和毒力因子。