黔产莪术和郁金种子质量控制研究

目的探讨黔产莪术和郁金种子质量控制所需的适宜检验方法及关键技术参数。方法借鉴《农作物种子检验规程》相关方法,摸索黔产莪术和郁金种子质量适宜的检验方法,并检测种子的质量。结果黔产莪术和郁金种子净度为(92.47±1.22)%;百粒重(1495.10±143.41)g;水分测定采用低温烘干法,烘干时间为2h;选择纱布作为发芽床、温度25℃条件适宜种子发芽;TTC和红墨水法均可检测黔产莪术和郁金种子的活力。结论本实验方法可为检测黔产莪术和郁金种子质量提供检验方法;实验结果可为黔产莪术和郁金种子质量控制提供关键技术参数。

黔产莪术显微、理化特性对比研究

目的:通过对黔产莪术的显微、理化特性进行对比研究,判定黔产莪术是否符合中国药典要求,从而判定其能否作为莪术原料药材使用。方法:参照《中华人民共和国药典》2010版一部附录有关显微、薄层鉴定及吸光度、水分、灰分、浸出物、有效成分含量等检测方法进行测定。结果:黔产莪术符合广西莪术显微结构特点,吸光度高于0.45,水分少于14.0%,总灰分低于7.0%,酸不溶性灰分低于2.0%,醇溶性浸出物高于7.0%,水溶性浸出物量较醇溶性浸出物高,挥发油含量高于1.5%,姜黄素含量高于0.15 mg·g-1。结论:黔产莪术显微、理化特性符合药典规定。

黔产莪术中挥发油和姜黄素最佳提取工艺研究

目的:优选黔产莪术中挥发油和姜黄素的最佳提取工艺。方法:以莪术中提取挥发油的体积和姜黄素的含量为指标,根据单因素实验结果,采用L9(34)正交表设计提取工艺。结果:挥发油提取影响最大的因素是提取时间,最佳提取工艺是药材粉碎粒径(0.2±0.1)cm,加5倍量水浸泡6 h,提取8 h,100g药材的挥发油收率是1.2 m L。对姜黄素含量影响较大的提取因素是乙醇的体积分数,最佳提取工艺是提取挥发油后的药渣加5倍量体积分数950 m L/L的乙醇,提取2次,每次2 h。结论:建立了合理可行的黔产莪术挥发油和姜黄素的提取工艺。

黔产莪术及郁金种子最佳保存方法筛选研究

[目的]从4种民间习用保存黔产莪术和郁金种子的方法中筛选最佳保存方法。[方法]分别采用水泥地阴干、棕丝透气网袋悬空阴干、地窖保存、细沙混合保存等4种保存黔产莪术和郁金种子民间习惯用法,以试验地发芽率作为判定最佳方法指标。[结果]棕丝透气网袋悬空阴干种子发芽率为77.60%,细沙包埋种子发芽率为74.77%,水泥地阴干种子发芽率为45.99%,地窖保存种子发芽率为51.00%。[结论]4种保存黔产莪术和郁金种子的方法中,以棕丝透气网袋悬空阴干种子为优,细沙混合保存亦可供选择,而水泥地阴干和地窖保存种子发芽率低,不建议采用。

黔产莪术和种子中提取挥发油的具体成分异同比较

目的研究黔产莪术和莪术种子中挥发油质控成分的检定方法与含量范围。方法建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定黔产莪术与莪术种子中吉马酮和呋喃二烯含量方法:色谱柱为C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0~20 min,60%A^95%A;20~35 min,95%A),流速为1 ml/min,检测波长为216 nm,柱温35℃,进样量10μl。结果吉马酮和呋喃二烯的检测浓度分别在4.18~83.6μg/m L(r=0.9999),10.21~204.2μg/ml(r=1.0000)范围呈现良好的线性关系;吉马酮和呋喃二烯的平均回收率(n=6)分别103.2%(RSD=1.44%,102.2%(RSD=1.28%),重复性实验(n=6)RSD分别为0.90%,2.10%。结论黔产莪术与莪术种子中提取的挥发油的质量,可以用挥发油中所含吉马酮和呋喃二烯含量进行控制。控制范围是:黔产莪术挥发油中吉马酮,呋喃二烯含量依次是85.87%~100.10%,59.07%~78.92%;黔产莪术种子挥发油中吉马酮,呋喃二烯含量依次是65.69%~80.47%,59.94%~68.41%。

黔产莪术油对直肠癌SW1463细胞株分泌Toll样受体及相关免疫因子的影响

目的：通过研究黔产莪术油对直肠癌SW1463细胞中死亡因子受体（Fas）的蛋白表达及分泌的免疫因子Toll样受体2（TLR2）,Toll样受体4（TLR4）,白细胞介素-10（IL-10）,癌基因C-Raf转化生长因子-β1（TGF-β1）的影响,探讨黔产莪术油对肿瘤细胞的免疫效应。方法：将水蒸气蒸馏提取的黔产莪术油,配置成空白组,黔产莪术油80,120,160,200 mg·L-1组,作用于直肠癌细胞SW1463细胞24 h后,采用免疫酶联免疫吸附测定（enzyme Linked immunosorbent assay,ELISA）检测不同质量浓度黔产莪术油对IL-10水平的影响,采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Fas,TLR2,TLR4,C-Raf,TGF-β1蛋白表达对直肠癌细胞SW1463的增殖抑制作用。结果：ELISA检测发现,与空白组比较,莪术油组IL-10水平随着药物浓度的升高表达降低（F=23.11,P〈0.01）。Western blot结果显示,与空白组比较,莪术油组随着药物浓度的升高,TLR2,TLR4,C-Raf蛋白表达显著降低（P〈0.01）;Fas,TGF-β1蛋白表达明显降低（P〈0.05）。结论：黔产莪术油抑制SW1463细胞的作用免疫作用机制可能与下调Fas/Fas L通路有关,使得Toll样受体TLR2,TLR4蛋白表达下调,导致相关因子TGF-β1的表达下调,从而使得细胞凋亡,起到免疫增强作用。

黔产莪术油对人直肠癌细胞血管生成因子表达的影响

目的:通过黔产莪术油对人直肠癌SW1463细胞血管内皮生长因子(VEGF)和趋化因子(chemokine,CXC)蛋白表达的影响,探讨莪术挥发油对肿瘤血管生成的作用机制。方法:将经水蒸气蒸馏提取的黔产莪术挥发油,配制成80,120,160,200 mg·L-1不同质量浓度,干预直肠癌SW1463细胞24 h后,倒置显微镜下观察不同浓度莪术油对直肠癌SW1463细胞的形态学影响;采用免疫细胞化学和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测直肠癌SW1463细胞中VEGF,白细胞介素-8(IL-8)和CXC趋化因子受体2(CXCR2),CXC趋化因子受体3(CXCR3)蛋白的表达。结果:经莪术油处理直肠癌SW1463细胞24 h后,与空白组比较,莪术挥发油组细胞中VEGF,IL-8,CXCR2蛋白表达量明显下调(P<0.05,P<0.01),莪术油能抑制肿瘤细胞中VEGF,IL-8,CXCR2蛋白的表达;莪术挥发油组细胞中CXCR3蛋白表达量明显上调(P<0.05,P<0.01),莪术油能促进肿瘤细胞CXCR3蛋白的表达。结论:黔产莪术油可能通过下调促血管生成相关因子的表达,上调抑制性血管生成相关趋化因子的表达,从而抑制肿瘤血管生成,起到抑制肿瘤细胞的增殖作用。

莪术油对人直肠癌细胞株SW1463细胞增殖及免疫因子的影响

目的:研究莪术油对直肠癌细胞(SW1463)增殖作用及免疫因子的影响,检测白细胞介素-2(IL-2),转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达及对死亡因子配体(Fas L),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的影响。方法:水蒸气蒸馏法提取黔产莪术挥发油,配制质量浓度40,80,120,160,200,240,280 mg·L-1,干预SW1463细胞24,48,72 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测药物对SW1463细胞的增殖抑制率,倒置显微镜观察药物作用细胞的形态变化,并采用姬姆萨(Giemsal)染色观察不同浓度的莪术油对SW1463细胞凋亡形态学的影响;酶联免疫吸附(ELISA)法检测IL-2,TGF-β1的表达,免疫印迹(Western blot)法检测细胞内Fas L,Capase-3,MMP-9蛋白表达。结果:莪术油对SW1463细胞有一定的增殖抑制作用,并呈现时间-剂量依赖性,半数抑制率(IC50)为128.49 mg·L-1;Giemsal染色细胞可见典型的凋亡形态学特征;与正常组比较IL-2和TGF-β1的含量随着莪术油浓度的增加表达减少(P<0.05,P<0.01);Western blot表明,莪术油处理SW1463细胞24 h后,Caspase-3,Fas L的蛋白表达上调,MMP-9的蛋白表达下调。结论:黔产莪术油能明显抑制SW1463细胞,而Caspase-3与MMP-9的表达呈现负相关性,其机制可能与Fas L上调诱导的细胞相关免疫因子有关。