儿童期体重指数及出生体重与未来妊娠期高血压及子痫前期-子痫因果关系的两样本孟德尔随机化研究

目的:应用两样本孟德尔随机化(MR)方法探讨儿童期体重指数及出生体重与未来妊娠期高血压及子痫前期-子痫之间的因果联系。方法:以单核苷酸多态性(SNP)为工具变量,从全基因组关联分析数据中筛出与儿童期体重指数及出生体重相关的SNP,用MR Egger回归法、逆方差加权法(IVW)和加权中位数法3种两样本MR方法分析儿童期体重指数及出生体重与未来妊娠期高血压及子痫前期-子痫之间的因果关联。结果:随着儿童体重指数增加,未来妊娠期高血压(IVW的随机效应模型:OR=1.417,95%CI:1.144~1.755,P=0.001;加权中位数法:OR=1.277,95%CI:1.028~1.587,P=0.027)和子痫前期-子痫(IVW:OR=1.399,95%CI:1.130~1.733,P=0.002)发病风险均增加。出生体重与未来妊娠期高血压及子痫前期-子痫之间的因果关联无统计学意义(P均>0.05)。敏感性分析支持上述因果关联的稳健性。结论:儿童期体重指数与未来妊娠期高血压及子痫前期-子痫之间存在正向因果关联。出生体重与未来妊娠期高血压及子痫前期-子痫之间的因果关联无统计学意义。

胎盘ULK1表达与自噬及子痫前期的相关性研究

目的比较子痫前期与正常产妇胎盘组织中Unc-51样激酶1(ULK1)表达和自噬水平,分析胎盘ULK1表达与自噬水平及子痫前期病情的相关性。方法选择2021年3月至2023年5月于福建省立医院分娩的25例子痫前期患者作为子痫前期组,同期住院且年龄、产次与分娩方式相配对的25例正常产妇作为对照组。免疫组织化学检测两组产妇胎盘组织中自噬标志蛋白微管相关蛋白1A/1B-轻链3B(LC3B)、苄氯素1(Beclin1)、螯合体1(SQSTM1/p62)和ULK1蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR检测胎盘组织ULK1的mRNA表达,电化学发光法检测子痫前期患者外周血可溶性类fms酪氨酸激酶-1(sFlt-1)和胎盘生长因子(PlGF),采用Pearson法分析ULK1表达与sFlt-1/PlGF比值的相关性。结果免疫组织化学检测结果显示,对照组与子痫前期组胎盘均可见LC3B、Beclin1和p62表达,经半定量分析结果显示,子痫前期组产妇胎盘组织的LC3B和Beclin1表达相对量分别为695.32±77.82、534.19±77.60,明显高于对照组的630.11±64.14和438.66±91.71,p62表达相对量为529.66±85.62,明显低于对照组的638.37±127.62,差异均有统计学意义(P<0.05);经实时荧光定量PCR检测结果显示,子痫前期组产妇胎盘组织ULK1的mRNA表达水平1.01±0.13,明显高于对照组的0.86±0.08,差异有统计学意义(P<0.01);子痫前期组外周血PlGF和sFlt-1水平分别为(114.12±21.71)pg/mL和(8274.126±3453.49)pg/mL,sFlt-1/PlGF比值平均为81.94±57.84,经Pearson相关性分析表明,子痫前期组胎盘组织ULK1的mRNA表达水平与外周血sFlt-1/PlGF比值呈正相关(r=0.701,P<0.05)。结论子痫前期患者胎盘组织ULK1的表达水平明显上升,与自噬水平一致,并与子痫前期严重程度密切相关,有望作为子痫前期防治的新靶点。

麝香保心丸对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的探讨麝香保心丸对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞增殖凋亡及炎症因子表达的影响。方法体外胶原酶消化法培养人脐静脉内皮细胞,5-溴脱氧尿嘧啶核苷渗入法测定细胞增殖活性,dUTP缺口末端标记法测定内皮细胞的凋亡,逆转录-聚合酶链反应法测定炎症因子单核细胞趋化蛋白1、白细胞介素6、核因子-κB-P65 mRNA表达水平,W estern b lotting测定内皮细胞核因子-κB-P65的蛋白水平。结果 (1)与对照组相比,过氧化氢组内皮细胞活性明显降低(P<0.05),麝香保心丸药物血清呈浓度依赖性抑制过氧化氢诱导内皮细胞损伤(P<0.05),与对照血清组相比,药物血清1 g组内皮细胞活性显著升高(P<0.05);(2)过氧化氢组内皮细胞大量凋亡,1 g麝香保心丸血清组只有少量细胞凋亡;(3)与对照组相比,过氧化氢组单核细胞趋化蛋白1、白细胞介素6、核因子-κB-P65 mRNA表达水平明显增高(P<0.05),麝香保心丸药物血清组呈浓度依赖性抑制上述指标的表达,1 g麝香保心丸血清组有明显降低,而对照血清组单核细胞趋化蛋白1、白细胞介素6、核因子-κB-P65 mRNA表达无明显差别(P>0.05);(4)与对照组相比,过氧化氢组核因子-κB-P65蛋白表达水平明显增高,麝香保心丸(血清)呈浓度依赖性抑制其的表达,1 g麝香保心丸血清组核因子-κB-P65表达水平明显降低(P<0.05)。结论麝香保心丸保护血管内皮细胞可能与抑制过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞炎症因子有关。

SHR,WKY大鼠心,肾及胸主动脉ACE,ACE2表达的差异与高血压的关系

目的观察SHR,WKY大鼠心,肾,胸主动脉及体外培养的VSMCs中的ACE,ACE2表达的差异,探讨ACE与ACE2在自发性高血压大鼠高血压形成的机制。方法选取6个月的雄性自发性高血压大鼠SHR(Spontanous Hypertensive Rat,SHR)及与之配对的正常大鼠WKY。尾袖法测定大鼠血压,断头取血,称量全心与左心重量,计算心体比与左室重指数。免疫组化法检测肾脏ACE,ACE2的表达。放免法测定血浆中AII水平。RT-PCR法比较SHR与WKY大鼠心,肾,胸主动及体外培养VSMC细胞ACE、ACE2 mRNA的表达水平。结果(1)6月龄SHR大鼠血压显著高于WKY(196.42±18.90,116.35±14.48,P<0.05),而WKY大鼠心体比及左室指数明显低于SHR(2.84±0.28,3.79±0.41,P<0.05;2.17±0.18,2.95±0.28,P<0.05),SHR大鼠血浆中AII水平明显增高(1675.35±305.16,694.38±112.56,P<0.05)。(2)肾脏ACE2免疫染色SHR明显低WKY(0.054±0.013,0.205±0.043,P<0.05)。与WKY相比,SHR心,肾,胸主动脉ACE2 mRNA表达水平分别减少49.84%4、0.67%3、6.17%,,而ACEmRNA表达水平分别增加33.66%、29.83%、42.16%。在体外培养的胸主动脉平滑肌细胞(thorax aorta vascularsmooth mulscle cell,TAVSMC)SHR大鼠ACE mRNA表达水平明显高于WKY,ACE2 mRNA的表达水平显著降低。结论(1)ACE与ACE2表达失调可能是高血压形成的重要原因。(2)ACE与ACE2表达差异可能大鼠遗传背景有关。

RXRα激动剂贝萨罗汀通过调控TGF-β1/Smad2通路抑制ApoE^−/−小鼠动脉粥样硬化的形成

目的:观察类视黄醇X受体α(RXRα)激动剂贝萨罗汀(Bex)对载脂蛋白E缺陷(ApoE^−/−)小鼠动脉粥样硬化及转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响,并探讨Bex抑制动脉粥样硬化的机制。方法:选取10只C57BL/6小鼠为正常对照组,选取30只ApoE^−/−小鼠随机分为3组:ApoE^−/−组、ApoE^−/−+Bex5(5 mg·kg^−1·d^−1 Bex)组及ApoE^−/−+Bex10(10 mg·kg^−1·d^−1 Bex)组。Bex采用灌胃法给药,每天1次,连续8周。氧化酶法检测血清甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平;选择遮蔽法测定血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;Western blot法测TGF-β1和p-Smad2/Smad2水平;HE染色观察胸主动脉内膜硬化斑块形成情况。组织贴块法培养VSMCs,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测VSMCs增殖活性。结果:ApoE^−/−组小鼠血清TG、TC和LDL-C水平,以及胸主动脉TGF-β1和p-Smad2水平显著高于C57BL/6组(P<0.01);Bex呈剂量依赖性增加ApoE^−/−小鼠胸主动脉组织p-Smad2蛋白水平,抑制内膜斑块形成及中膜增生,显著减小斑块面积(P<0.01)。ApoE^−/−组、ApoE^−/−+Bex5组和ApoE^−/−+Bex10组之间血清TG、TC、HDL-C和LDL-C水平,以及胸主动脉TGF-β1和Smad2水平均无显著差别(P>0.05)。体外实验显示,TGF-β1(0.1~10μg/L)促进VSMCs增殖,但Bex呈浓度依赖性抑制TGF-β1(5μg/L)诱导的VSMCs增殖。Bex(10−7 mol/L)可增强TGF-β1(5μg/L)诱导的p-Smad2水平(P<0.01),却抑制TGF-β1(5μg/L)诱导的p-Smad2细胞核转位。结论:RXRα激动剂Bex抑制ApoE^−/−小鼠动脉粥样硬化的形成,其机制可能与调控TGF-β1/p-Smad2通路从而抑制VSMCs增殖有关。

自发性高血压大鼠血管平滑肌及心肌内成纤维细胞生长特性的研究

目的探讨自发性高血压大鼠（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ，ＳＨＲ）主动脉平滑肌细胞（ａｏｒｔａｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，ＡＳＭＣ）与心肌内成纤维细胞（ｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＣＦＢ）在体外培养生长的特性。方法１６周龄自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和正常大鼠（ＷＫＹ）测血压后处死，取心脏与胸主动脉，组织块法分别培养ＣＦＢ与ＡＳＭＣ）。分别观察：（１）ＣＦＢ３Ｈ－ｐｒｏｌｉｎｅ掺入与倍增时间（ＤＴ），ＡＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ掺入与倍增时间（ＤＴ），比较ＳＨＲ，ＷＫＹ的平滑肌细胞和心肌内成纤维细胞的增殖能力。（２）ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ在无血清或２％小牛血清（ＦＣＳ）条件下对两种大鼠ＡＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ，ＣＦＢ３Ｈ－ｐｒｏｌｉｎｅ掺入率及细胞数的影响，用３Ｈ－ＴｄＲ，３Ｈ－ｐｒｏｌｉｎｅ分别反应ＡＳＭＣ和ＣＦＢ增殖能力。结果（１）ＳＨＲ的ＡＳＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ掺入率ＣＦＢ３Ｈ－ｐｒｏｌｉｎｅ掺入率显著高于ＷＫＹ，ＡＳＭＣ倍增时间明显短于ＷＫＹ（分别为４７３±０２５，３００±１４０，Ｐ＜００１），而ＣＦＢ两组大鼠间倍增时间无差别（２６１±１６，２６６±１９，?

自发性高血压大鼠血管结构与功能的观察

观察１６周龄ＳＨＲ大鼠与同龄ＷＫＹ大鼠之间血管结构与功能的差异及其在高血压形成中的作用。用尾袖法测量大鼠动脉血压，动脉环实验测定主动脉与肠系膜动脉血管平滑肌的反应性，用肉眼数点计算法测定主动脉中膜腔壁厚度／管腔面积（Ｗ／Ｌ），图像分析仪摄像求积法测定肠系膜动脉Ｗ／Ｌ。结果：１６周龄ＳＨＲ大鼠血压明显高于ＷＫＹ大鼠（２８．２４±１．１２ｋＰａ与１７．１５±０．７５ｋＰａ，Ｐ＜０．０５）。ＳＨＲ大鼠主动脉和肠系膜动脉的Ｗ／Ｌ明显大于ＷＫＹ大鼠（０．３３±０．０３与０．２４±０．０５，Ｐ＜０．０５；及０．７５±０．０９与０．２６±０．０２，Ｐ＜０．０５）。硝普钠引起的ＳＨＲ大鼠血管舒张率明显低于ＷＫＹ，而去甲肾上腺素引起的ＳＨＲ大鼠血管收缩率明显高于ＷＫＹ。结果表明：ＳＨＲ大鼠阻力血管结构的改变可能是高血压形成的重要因素，ＳＨＲ大鼠血管功能改变与高血压形成密切相关。

自发性高血压大鼠心肌胶原与血管紧张素Ⅱ的关系

目的 观察成年 (16周龄 )自发性高血压大鼠 (spontaneouslyhypertensiverat,SHR)与同龄对照组 (WKY)大鼠之间细胞外基质成分的差异及血管紧张素Ⅱ (AngiotensinⅡ ,AngⅡ )在SHR大鼠左室肥厚形成过程的作用。方法 用尾袖法间接测定大鼠血压 ;检测左心室组织及血浆中的血管紧张素转化酶 (angiotensinconvertingenzyme ,ACE)活性 (紫外分光光度法 ) ;放免法测定左室心肌AngⅡ含量。免疫组化测定左室心肌胶原含量 ,用3H -Proline掺入量测定体外培养心肌成纤维细胞 (cardiacfibroblast,CFB)胶原的合成率。结果 (1) 16周龄SHR大鼠血压明显高于对照组 (WKY)大鼠 ,分别为 (2 7.6 3± 2 .6 7)kPa和 (16 39± 0 54)kPa ,P <0 .0 5;(2 )SHR大鼠左室心肌AngⅡ含量明显高于WKY组 ,分别为 (2 6 6± 75)pg/ 10 0mg和 (134± 4 1)pg/ 10 0mg ,P <0 .0 5;(3)左室重量 (Leftventricalarmass,LVM)SHR明显高于WKY组 ,分别为 (10 14.3± 6 2 .1)mg和 (895.7± 86 .4 )mg ,P <0 .0 5;(4 )心体比 (Letventricrlarmass/bodyeight,LVM/BW )SHR明显高于WKY组 ,分别为 (3.4 4± 0 .15)mg/g和 (2 .17± 0 .11)mg/g ,P <0 .0 5;(5)体外细胞培养的心肌成纤维细胞3H -Proline掺入量随着AngⅡ浓度升高而增加 。

不同周龄的原发性高血压大鼠的血压和血管的反应性变化

原发性高血压大鼠血管反应性随着年龄增长而降低，是其血压升高的重要因素，本文探讨原发性高血压大鼠（ＳＨＲ） 随着年龄的增长血压及血管的反应性变化。方法：１－ 由本所提供１５ 只普通级原发性高血压大鼠６ 周龄开始测量血压，同年龄，同性别的ＷＫＹ 大鼠作对照，血压测量使用上海高血压研究所制造的ＭＲＢ－ ＩＩＩＡ 电脑大鼠血压心率仪，尾袖法间接测量大鼠动脉血压与心率。２－ 动脉环实验，参考Ｍｕｌｖａｎｇ ＭＪ 所描述的方法，２４ 周龄后将动物断头处死，取胸主动脉与肠系膜动脉行动脉环离体实验，加不同浓度去甲肾上腺素与硝普钠观察其收缩与舒张的曲线变化，加不同的前负荷１－０ｇ 、１－５ｇ 、２－５ｇ 、３－５ｇ 观察其收缩及舒张的反应性。结果：原发性高血压大鼠血压：６ 周龄１６６－８３ ±１１－３９ ，１６ 周龄１９１ ±５－５７ ，２０ 周龄２０８－４６ ±８－１ ，２４ 周龄２１５ ±５－０（ｍ ｍ Ｈｇ） ，６ 周龄后２４ 周龄之间血压有显著的升高（Ｐ＜ ０－０５） ，ＷＫＹ 大鼠血压则无明显变化，６ 周龄１２０－７３ ±９－８ ，（ｍ ｍ Ｈｇ）２４ 周龄１２０－３２ ±５－９３（ ｍ ｍＨｇ） 。ＳＨＲ 大鼠血管收缩随负荷增加而增强，ＷＫＹ 大鼠则随负荷增?

阿托伐他汀通过RXRα介导的抗氧化应激效应抑制高脂喂养糖尿病ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的形成

目的:观察阿托伐他汀(Atorv)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病高脂喂养载脂蛋白E敲除(apolipoprotein E knockout,ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响,探讨阿托伐他汀在糖尿病合并高脂饮食条件下对抗动脉粥样硬化的机制。方法:C57小鼠8只作为对照,34只高脂喂养的ApoE-/-小鼠随机分为3组:ApoE-/-组、STZ-ApoE-/-组和STZ-ApoE-/-+Atorv组。STZ腹腔注射建立糖尿病动物模型,测定小鼠空腹血糖、血脂水平,HE染色图像分析测定胸主动脉斑块面积;免疫杂交检测主动脉及细胞内NADPH氧化酶亚基gp91phox蛋白水平;Fenton反应Griess显色法测定血清及胸主动脉匀浆上清液活性氧(ROS)水平。I型胶原酶消化法培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),流式细胞术检测内皮细胞内ROS的水平,光泽精分析法测定NADPH氧化酶活性。采用干扰RNA和质粒转染的方法评价类视黄醇X受体α(RXRα)在Atorv抑制氧化应激中的作用。结果:(1)与C57组相比,ApoE-/-组小鼠胸主动脉斑块面积显著增加[(215.88±34.19)μm2vs 0μm2,P<0.01],2组间空腹血糖水平无显著差异,血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清及胸主动脉ROS、胸主动脉gp91phox表达水平显著缩小(P<0.05);(2)与ApoE-/-组相比,STZ-ApoE-/-组胸主动脉斑块面积进一步增加[(314.13±35.72)μm2vs(215.88±34.19)μm2,P<0.05],血糖水平升高,血清TC、LDL-C、血清及胸主动脉ROS、胸主动脉gp91phox水平进一步增加(P<0.05);(3)与STZ-ApoE-/-组相比,STZ-ApoE-/-+Atorv组胸主动脉粥样斑块面积显著降低[(217.47±24.56)μm2vs(314.13±35.72)μm2,P<0.05],血糖、血清TG、HDL、TC、和LDL-C无显著变化,血清及胸主动脉ROS、胸主动脉gp91phox水平亦显著降低(P<0.05);(4)高糖(25 mmol/L)干预后,HUVECs内ROS含量、gp91phox蛋白水平及NADPH氧化酶活性明显增加(P<0.05),阿托伐他汀(10-8~10-6mol/L)显著降低高糖环境下HUVECs胞内ROS含量、gp91phox表达及NADPH氧化酶活性,且具有浓度依赖性;(5)将RXRαsiRNA转染至HUVECs之后,阿托伐他汀(10-6mol/L)对高糖环境下ROS生成及NADPH氧化酶活性的抑制效应显著减弱,RXRα质粒转染使RXRα过表达后,阿托伐他汀(10-6mol/L)抑制ROS生成及NADPH氧化酶活性的作用明显增强(P<0.05)。结论:阿托伐他汀通过抑制高糖环境下机体的氧化应激反应对抗动脉粥样硬化;核受体RXRα介导阿托伐他汀的抗氧化应激效应。

苯那普利、缬沙坦对自发性高血压大鼠肾脏血管紧张素转换酶2表达的影响

目的观察苯那普利与缬沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和肾脏血管紧张素转换酶2(ACE2)表达水平的影响,探讨ACE2在高血压发病机制和药物治疗中的意义。方法12周龄雄性SHR28只,分为空白对照组(Sc)、苯那普利组(10mg/kg.d)(Sb)、小剂量缬沙坦组(10mg/kg.d)(Sl)、大剂量缬沙坦组(30mg/kg.d)(Sh),每组7只,7只雄性WKY大鼠为正常对照。药物治疗3月后,用放射免疫法测定血浆AngⅡ含量,RT-PCR法测定肾脏中ACE和ACE2mRNA的表达水平,免疫组化法比较肾脏中ACE2蛋白的表达。结果与WKY大鼠相比,SHR肾脏中ACE2mRNA及其蛋白的表达均明显降低,而ACEmRNA的表达和血浆AngⅡ水平则明显升高(P<0.05)。缬沙坦治疗后SHR血压显著下降而血浆AngⅡ水平则进一步升高,肾脏中ACE2的表达水平明显升高,且呈剂量依赖性(P<0.05)。苯那普利治疗对SHR血浆AngⅡ水平及肾脏ACE2的表达则无明显影响。结论SHR体内ACE和ACE2的表达失衡可能在高血压的发病机制中有重要意义。血管紧张素受体拮抗剂(ARB)可能通过升高SHR血浆AngⅡ的水平而增加肾脏中ACE2的表达,ACE2表达的增加可能是ARB抗高血压治疗的一个新药理机制。

阿托伐他汀对碘普罗胺引起的糖尿病大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:观察糖尿病大鼠造影剂急性肾损伤(CI-AKI)发病过程中肾小管上皮细胞凋亡变化,并探讨阿托伐他汀对碘普罗胺引起的糖尿病大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:腹腔单剂量注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,饲养8周后糖尿病大鼠随机分为6组:空白对照组(N组)、糖尿病对照组(DM组)、糖尿病+造影剂组(DM+CM组)、糖尿病+造影剂+5 mg·kg-1·d-1阿托伐他汀组(ATO1组)、糖尿病+造影剂+10 mg·kg-1·d-1阿托伐他汀组(ATO2组)和糖尿病+造影剂+30 mg·kg-1·d-1阿托伐他汀组(ATO3组)。注入碘普罗胺注射液24 h后收集尿标本,检测尿肌酐(UCr)以及24 h尿微量白蛋白(24 h-UAlb),记录24 h尿量并计算尿微量白蛋白排泄率(24 h-UAER)。注射碘普罗胺后48 h收集血标本,检测血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN),并计算内生肌酐清除率(CCr)。处死大鼠,摘取肾脏左肾行组织病理学分析,TUNEL检测凋亡情况及免疫组织化学法检测肾髓质Bax和Bcl-2蛋白的表达,并留取右肾,采用免疫印迹技术法检测肾髓质的Bcl-2及Bax蛋白表达情况。结果:与N和DM组比较,DM+CM组注入造影剂后SCr、BUN和24 h-UAER水平明显升高(P<0.05),Ccr水平明显下降,肾小管上皮细胞的凋亡明显增加,肾髓质Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降;与DM+CM组比较,ATO1、ATO2和ATO3组注入造影剂后SCr、BUN和24 h-UAER水平均有下降,CCr升高,肾小管上皮细胞的凋亡明显减少,肾髓质Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达升高,且ATO3组的变化更为明显。结论:碘普罗胺可诱导糖尿病大鼠肾小管上皮细胞的凋亡;阿托伐他汀能改善碘普罗胺引起的糖尿病大鼠肾功能损伤,此保护作用可能与之抑制碘普罗胺诱导的肾小管上皮细胞凋亡有关,且这种保护作用有剂量依赖性。

氟伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响及其机制

目的探讨氟伐他汀(Flu)对血小板源生长因子(PDGF-BB)和内皮素-1(ET-1)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移的影响及其机制。方法VSMCs源于8周龄自发性高血压大鼠(SHR)的胸主动脉,组织块外生法体外培养VSMCs,采用改良的Boyden微孔膜双槽法测定细胞迁移,荧光染料Fura-2/AM法测定细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)。结果(1)PDGF-BB和ET-1可诱导VSMCs迁移,作用峰值浓度分别为10μg/L和10-7mol/L。Flu(10-9-10-5mol/L)呈浓度依赖性抑制上述物质诱导的细胞迁移,10-5mol/L Flu对PDGF-BB和ET-1诱导的细胞迁移的抑制率达86.67%以上。(2)PDGF-BB和ET-1促进[Ca2+]i升高(P<0.05),峰值浓度分别为PDGF-BB10μg/L和ET-110-8mol/L。(3)Flu明显抑制PDGF-BB和ET-1诱发的[Ca2+]i升高,峰抑制率分别为86.76%和65.32%。结论Flu可抑制PDGF-BB和ET-1诱导的VSMCs迁移,Flu抑制[Ca2+]i的升高可能是它抑制VSMCs迁移的机制之一。

阿托伐他汀通过抑制PKC的激活对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激反应

目的:探讨阿托伐他汀对高糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)产生氧化应激的影响及其作用机制。方法:体外培养HUVECs,以25 mmol/L葡萄糖干预,模拟糖尿病患者体内环境,通过流式细胞术和共聚焦显微镜检测细胞内的活性氧(ROS)水平,采用Lucigenin分析方法测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性,分别应用实时荧光定量PCR和免疫印迹杂交的方法检测NADPH氧化酶亚基Nox4和Nox2/gp91phox的表达水平,用免疫印迹杂交方法检测蛋白激酶C(PKC)蛋白的磷酸化水平。结果:(1)在高糖环境(终浓度为25 mmol/L)下,HUVECs内ROS生成显著增加,NADPH氧化酶的活性显著增强,NADPH氧化酶Nox4和Nox2/gp91phox亚基的mRNA和蛋白表达水平显著上调;(2)阿托伐他汀可显著抑制高糖诱导的ROS生成、NADPH氧化酶活性的增强及NADPH氧化酶Nox4和Nox2/gp91phox亚基表达水平的增加幅度,且具有浓度依赖性;(3)PKC抑制剂(PKC inhibitor peptide,20μmol/L)可显著抑制高糖环境下ROS的生成、NADPH氧化酶活性的增强及NAD-PH氧化酶Nox4和Nox2/gp91phox亚基表达水平的增加幅度;(4)阿托伐他汀可抑制高糖诱导的PKC蛋白的磷酸化。结论:PKC的活化参与了高糖诱导的HUVECs产生的氧化应激反应。阿托伐他汀通过抑制PKC蛋白的活化对抗高糖诱导的内皮细胞产生的氧化应激反应。

RXR激动剂通过抑制PKC激活对抗高糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:探讨视黄醇类X受体(RXR)激动剂对高糖诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMCs)增殖的影响及其作用机制。方法:体外组织块干涸法培养RASMCs,以25 mmol/L葡萄糖干预,模拟糖尿病患者体内环境,通过WST-1法检测细胞增殖活性,BrdU插入法测定细胞DNA合成,流式细胞术检测细胞周期进程。用免疫印迹杂交方法检测细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白依赖激酶抑制物p27Kip1的蛋白表达及蛋白激酶C(PKC)的磷酸化水平。结果:(1)在高糖环境(葡萄糖终浓度为25 mmol/L)下,RASMCs的增殖活性、DNA合成速率及其在细胞周期S期的分布比例均显著增加;(2)高糖显著增加RASMCs内CDK2蛋白的表达,但明显降低p27Kip1的蛋白表达水平;(3)RXR天然配体9-顺式维甲酸(9-cis-RA)可显著抑制高糖诱导的RASMCs增殖活性增强、DNA合成加速及RASMCs在细胞周期S期分布比例的增加幅度,且具有浓度依赖性;10-7mol/L浓度的SR11237(RXR特异性配体)与等浓度的9-cis-RA具有相似的抑制效应;(4)9-cis-RA和SR11237均可显著抑制高糖诱导的CDK2蛋白表达水平的增加幅度,同时上调高糖环境下p27Kip1蛋白的表达;(5)PKC抑制剂(PKC inhibitor peptide,20μmol/L)显著抑制高糖环境下RASMCs的增殖活性和CDK2蛋白的表达,但明显增加高糖条件下p27Kip1蛋白的表达;(6)9-cis-RA和SR11237可抑制高糖诱导的PKC蛋白磷酸化。结论:PKC的活化参与了高糖诱导下RASMCs的增殖过程。RXR激动剂通过抑制PKC活化对抗高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖。

苯那普利、缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素转换酶2表达的影响

目的观察糖尿病大鼠肾脏血管紧张素转换酶2(ACE2)的表达及苯那普利、缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏ACE2表达水平的影响,初步探讨ACE2在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法3月龄的SD雄性大鼠,腹腔内注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,随机分为3组,每组7只,分别为糖尿病模型组、苯那普利治疗组[10mg/(kg.d)]、缬沙坦治疗组[10mg/(kg.d)],SD雄鼠7只作为正常对照组。给药3月后,处死动物、留取标本,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定肾脏中ACE和ACE2 mRNA的表达水平,免疫组化法比较肾脏中ACE2蛋白的表达水平。结果与正常对照组相比,糖尿病模型组大鼠ACE、ACE2 mRNA表达分别下降30.7%、50.1%(P<0.05)。与糖尿病模型组比较,苯那普利组ACE mRNA的表达明显增加(P<0.01),ACE2 mRNA的表达无明显差异;缬沙坦组ACE mRNA的表达治疗后没有明显变化,而ACE2 mRNA和蛋白的表达均有明显增加,分别增加68.7%和69.8%(P<0.01)。结论1)肾脏局部ACE2表达水平的降低可能是糖尿病大鼠肾损害的发病机制之一;2)ARB可能是通过增加肾脏局部ACE2的表达而发挥肾脏保护作用。

自发性高血压大鼠肾脏血管紧张素转换酶2 mRNA转录及其蛋白表达

目的观察不同月龄自发性高血压大鼠(SHR)肾脏血管紧张素转换酶2(ACE2) mRNA转录及其蛋白表达,初步探讨ACE2在高血压发生、发展过程中的可能作用。方法雄性SHR1月龄组(S1)、2月龄组(S2)、3月龄组(S3)、6月龄组(S6)和9月龄组(S9)共5组,每组各6只,各组均有相应月龄匹配的Wistar-Kyoto(WKY)大鼠作对照。采用RBP-Ⅰ型大鼠血压心率测定仪测量大鼠尾动脉收缩压(SBP);逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测肾脏ACE2 mRNA的转录水平;免疫组化染色结合计算机图像分析方法测定肾脏ACE2蛋白的表达水平。结果1)SHR的SBP随着月龄的增加而上升,6月龄后趋于稳定。2)SHR和WKY肾脏ACE2蛋白和 mRNA水平均随着月份的增加而增加,3月龄时达高峰,6月龄后趋于稳定;且SHR肾脏ACE2蛋白和 mRNA水平均低于同龄的WKY。S1肾脏髓质内侧部ACE2免疫染色阳性面积百分比较皮质和髓质外侧部高,与1月后的分布相反。结论1)SHR肾脏ACE2 mRNA和蛋白的表达水平比WKY大鼠低。2)大鼠肾脏ACE2 mRNA和蛋白的表达具有时间和部位分布上的差异。

天保宁对阿霉素致大鼠心肌损伤心肌肌球蛋白重链变化的影响

目的 :观察天保宁对阿霉素所致大鼠心肌损伤时心肌肌球蛋白重链的变化及心肌结构的改变。方法 :采用雄性SD大鼠 30只 ,随机分为 3组 :(1)正常对照组 :ip等体积生理盐水 ;(2 )阿霉素组 (Doxorbincin ,Adrinmycin ,ADR) :于实验开始后第 2、4天ipADR 1mg kg ;第 6、8天ipADR2mg/kg ;第 10、12天ipADR 3mg kg ;第 14、16天ipADR 4mg/kg ,16d累计用药剂量达 2 0mg kg。 (3)天保宁组 (ADR +天保宁 ) :ADR的剂量用法同ADR单用组 ,天保宁 (浙江康恩贝制药公司 ) 4 5 0mg/kg隔日灌服共 8d停药 2 4h后 ,称体重、心肌重量、左心室重量及心肌蛋白的提取、肌球蛋白重链(MHC)分析 ,电镜观察心肌细胞超微结构的变化。结果 :天保宁组大鼠的体重、心体比及左室心体比 (LVM BW )均较ADR组有显著改善 (vsP <0 0 1)。电镜下可见 ,ADR组心肌细胞严重损伤 ,提示有心衰发生 ,天保宁组大致正常。同时 ,天保宁组中α MHC向 β MHC转变减轻 ,α / β MHC较ADR组低 (P <0 0 5 )。结论 :天保宁可改善ADR对心肌损伤时的毒性反应 ,特别是减轻ADR对心肌肌球蛋白重链中α MHC向β MHC转变 ,具有抗重塑和抗心衰的作用。

缬沙坦治疗对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响

目的 观察缬沙坦对自发性高血压大鼠 (SHR)心肌纤维化的影响。方法 3 0只 12周龄雄性SHR大鼠 ,随机分成3组 :(1)大剂量缬沙坦组 (n =10缬沙坦 3 0mg/kg·d) ;(2 )小剂量缬沙坦组 (n =10缬沙坦 10mg/kg·d) ;(3 )SHR空白对照组 (n =10 ) ;(4)同龄雄性正常血压WKY大鼠对照组 (n =10 )。给药 4周 ;天狼星红染色法使胶原特殊染色 ,计算机图象分析测量心肌切片的胶原容积分数和心肌小动脉周围胶原面积与小动脉面积比表示心肌纤维化程度。结果 与SHR组相比大小剂量缬沙坦组 ,均能有效降低SHR血压 (P <0 0 5)。并能改善SHR大鼠左心室肥厚 (P <0 0 5)并使心室内、外膜及心肌小动脉周围的胶原减少 ,其中大剂量组各指标均较SHR有显著差异 (P <0 0 5)。