黄芪多糖对犬骨髓基质干细胞增殖及超微结构的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)对诱导培养的犬骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖、分化成骨作用及超微结构的影响。方法用瑞氏-姬姆萨染色、改良Gomori钙-钴法、茜素红染色法检测BMSCs分化成骨的能力。用四唑盐(MTT)比色和酶动力学方法测定不同浓度和时间的APS对诱导培养的BMSCs增殖影响以及超微结构的改变。结果诱导条件下BMSCs具有成骨细胞活性,瑞氏-姬姆萨染色呈深蓝色,改良Gomori钙-钴法将细胞及矿化结节染成黑色,茜素红染色法见细胞及矿化结节成红色。第1、3天时,低浓度(0.005mg/mL)APS可促进诱导培养的BMSCs增殖;而第5天时,高浓度(50mg/mL)APS则明显抑制诱导培养的BMSCs增殖。第5天,透射电镜下,0.005mg/mLAPS组细胞线粒体、粗面内质网增多,细胞外基质分泌增加;50mg/mLAPS组细胞发生退变,粗面内质网和线粒体明显减少,且二者明显肿胀、变性、膜结构破坏。结论短期低浓度APS能促进诱导培养的BMSCs的代谢和蛋白质的合成,有利于细胞的增殖和向成骨分化。

骨髓基质干细胞与黄芪-壳聚糖/聚乳酸支架对犬牙周骨缺损再生的影响

目的:探讨以犬骨髓基质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)为种子细胞、黄芪-壳聚糖/聚乳酸(astragalus polysaccharides-chitosan/polylactic acid,AP-C/PLA)为支架移植对水平型牙周骨缺损再生的影响。方法:分离并诱导培养自体犬BMSCs细胞,与AP-C/PLA、壳聚糖/聚乳酸(chitosan/polylac-ticacid,C/PLA)支架构建组织工程复合物随机植入10只犬双侧下颌第3,4前磨牙水平型牙周骨缺损处,共40个实验牙位,每组10个牙位,共设4组:空白对照组;AP-C/PLA+培养基对照组;C/PLA+BMSCS材料对照组;AP-C/PLA+BMSCS实验组。8周后分别收集牙周标本作组织检查和组织学测量。另取2只犬植入AP-C/PLA+BMSCS,4周后作组织学检查。结果:体外诱导培养的BMSCs表达Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶活性(alka linephos phatase,ALP);4周实验组缺损部位均有不规则的新骨形成;第8周时,新骨逐渐成熟,各组均有不同程度的牙周再生:实验组牙槽骨修复高度和修复率[(2.90±0.41)mm,57.46%]明显高于空白对照组[(0.83±0.30)mm,15.68%]、培养基对照组[(1.46±0.55)mm,30.13%]、材料对照组[(2.67±0.26)mm,51.87%](P<0.01,P<0.01,P<0.05)。结论:黄芪多糖具有促进牙周缺损部位骨形成作用,以BMSCs为种子细胞、黄芪-壳聚糖/聚乳酸为支架的组织工程复合物修复水平型牙周骨缺损可获得部分的牙周组织再生。

黄芪多糖/壳聚糖/聚乳酸为支架的组织工程骨修复牙周组织缺损的实验研究

目的探讨以黄芪多糖/壳聚糖/聚乳酸(astragalus polysaccharides/chitosan/polylactic acid,AP/C/PLA)为支架的组织工程技术修复水平型牙周组织缺损的可行性。方法成年健康雄性杂种犬10只,体重13±2kg,以犬骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)为种子细胞,分别与AP/C/PLA及C/PLA支架构建组织工程复合物。10只实验犬于双侧下颌第3、4前磨牙颊侧制备水平型牙周缺损模型。将牙周缺损模型随机分为4组(n=10):A组,缺损直接龈瓣冠向复位缝合,作为空白对照;B组,缺损处植入AP/C/PLA和条件培养基,龈瓣冠向复位缝合,作为培养基对照;C组,缺损处复合植入C/PLA和MSCs,龈瓣冠向复位缝合,作为材料对照;D组,缺损处复合植入AP/C/PLA和MSCs,龈瓣冠向复位缝合,作为实验组。术后8周,分别收集牙周标本行大体观察、X线片及组织学观测。结果体外诱导培养的MSCs表达I型胶原及碱性磷酸酶,具有成骨细胞活性。各组动物对手术耐受性好,术后观察期内未见支架材料暴露,伤口愈合良好。X线片检查可见,A组牙槽骨密度及高度无明显增加;B组骨密度有一定程度增加,根分叉处增高的牙槽骨量少,邻间牙槽骨无明显增加;C组骨密度增加,根分叉处牙槽骨基本恢复原有高度,邻间牙槽骨增加不明显;D组骨密度明显增加,根分叉处和邻间牙槽骨基本恢复原有高度。组织学观察显示,与A组相比,D组形成更多的新生牙槽骨、牙周膜和牙骨质,且新生牙槽骨矿化程度高,骨板排列趋向规则,出现整齐同心圆状的哈佛系统,基本具备骨组织的正常结构;牙槽骨与牙周膜的连接面呈锯齿状,沿根面还可见薄层的牙骨质沉积;新生牙周膜纤维呈束状,排列较密集且呈方向性,类似Sharpey's纤维。A、B、C、D组新生牙槽骨高度分别为0.83±0.30、1.46±0.55、2.67±0.26及2.90±0.41mm;新生牙骨质高度分别为0.78±0.45、1.30±0.60、2.29±0.18及2.57±0.22mm;新生结缔组织附着高度分别为0.80±0.22、1.33±0.34、2.23±0.42及2.64±0.27mm;各指标D组与A、B、C组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论以AP/C/PLA为支架材料构建的组织工程骨修复水平型牙周骨缺损可以获得部分牙周组织再生。

黄芪-壳聚糖/聚乳酸多孔支架对犬骨髓基质细胞生物学行为的影响

目的:观察黄芪壳聚糖/聚乳酸、壳聚糖/聚乳酸多孔支架复合材料对犬骨髓基质细胞(BMSCs)的黏附、生长及分化的影响,寻找较合适的牙周骨组织工程复合物支架材料。方法:将诱导分化的犬BMSCs分别与黄芪壳聚糖/聚乳酸、壳聚糖/聚乳酸支架体外培养。第5天取材,测定2种材料的吸附率,用扫描电镜观察超微结构,以免疫组织化学检测I型胶原,放射免疫法检测骨钙素的分泌情况。结果:BMSCs与2组材料均能形成良好贴附,黄芪壳聚糖/聚乳酸复合材料上贴附的细胞吸附率、Ⅰ型胶原及骨钙素的分泌量高于壳聚糖/聚乳酸组。结论:黄芪壳聚糖/聚乳酸能促进BMSCs生长、分化及基质分泌,是一应用前景良好的组织工程骨构建复合材料。

口腔粘膜下纤维性变组织中内皮素1的免疫组织化学和定量研究

目的 :探讨ET 1在口腔粘膜下纤维性变 (OSF)发病机制中的作用。方法 :采用免疫组化染色SABC法和图像分析技术 ,对OSF早、中、晚期各 10例、口腔扁平苔藓 (OLP) 10例以及正常人 10例的颊粘膜组织中ET 1表达进行定量分析。结果 :①OSF组织中ET 1免疫阳性物质超量表达 ,正常及OLP组织中ET 1表达微弱 ;②OSF早、中、晚期组织中ET 1含量显著高于正常 (P <0 0 1) ,且早、中期显著高于晚期 (P <0 0 1) ;③OSF早、中期组织ET 1含量显著高于OLP(P <0 0 1) ,晚期间质ET 1含量显著高于OLP(P <0 0 5 ) ,上皮ET 1含量两者差异不显著 (P >0 0 5 ) ;④口腔粘膜中上皮和间质的ET 1含量呈显著正相关 (P <0 0 5 )。结论 :ET 1在OSF的表达具有特异性 ,且可能影响OSF病变的发生发展。

改良猪颌骨模型在牙周翻瓣术实验教学中的应用研究

目的探讨改良猪颌骨模型在牙周病学手术实验课中的应用。方法将2003级七年制口腔医学专业一班随机分为对照组和实验组:实验组采用改良的猪颌骨模型进行牙周翻瓣术,对照组则采用常规猪颌骨模型,比较两组手术操作时间及手术完成效果得分,术后完成问卷调查。结果实验组手术所用时间显著低于对照组、手术完成效果优于于对照组(P<0.05,P<0.02)。问卷调查显示,改良猪颌骨模型具有口腔模拟性强、稳固性好、操作方便、随意调节颌骨角度及高度、视野显示清晰等优点。结论改良的猪颌骨模型值得进一步推广应用。

口腔黏膜下纤维化患者牙周状况分析

目的:研究口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis,OSF)患者的临床牙周状况,为OSF患者及嚼食槟榔者的口腔疾病预防及治疗提供依据。方法:OSF组选择临床和病理确诊为OSF的患者50名,对照组选择与OSF组年龄匹配、吸烟情况及生活环境相当且不嚼食槟榔的健康志愿者50名。采集并分析其菌斑指数、探诊深度、临床附着丧失、牙龈指数、探诊出血牙数5个临床牙周指标。结果:OSF组和对照组菌斑指数分别为2.14±0.64和1.7±0.89,两组差异有统计学意义(P<0.01);OSF组和对照组牙周探诊深度分别为(5.57±2.39)mm和(1.98±0.70)mm,两组差异有统计学意义(P<0.01);临床附着丧失、牙龈指数、探诊出血牙数在两组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:OSF患者牙齿易于菌斑堆积,加重牙周炎症。

口腔粘膜下纤维化、白斑及鳞癌上皮细胞内皮素1表达的定量分析

目的 :探讨内皮素 (ET 1)在口腔癌变发病机制中的作用和意义。方法 :采用免疫组化染色SABC法和图象分析技术 ,对人口腔粘膜下纤维化 (OSF) 10例、白斑 (OLK) 9例、鳞状细胞癌 (SCC) 14例及正常口腔粘膜(NOR) 10例的上皮细胞ET 1表达进行定量分析。结果 :①ET 1在OSF、OLK、SCC组织中的表达增强 ,阳性颗粒主要位于上皮棘细胞、基底细胞的胞浆胞膜上。ET 1表达阳性率和含量显著高于正常对照 (P <0 .0 1)。②OLK、SCC上皮细胞ET 1含量呈显著增加趋势 (P <0 .0 5 )。③OSF上皮细胞ET 1含量显著高于OLK(P <0 .0 5 ) ,与SCC相比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :ET 1含量在口腔癌前病变至癌变过程中可能存在一种量变关系 ,OSF中ET 1过量表达可能提示其上皮细胞的癌变潜能 ,ET 1与OSF、OLK。

七年制牙周病学应用PBL教学法的实验研究

为了探索七年制牙周病学实验课教学模式,将七年制口腔医学专业一班随机分为对照组和实验组:对照组采用传统教学法教学,实验组则采用基于问题的学习的病案讨论教学法。结果表明,实验组期末总成绩、病例分析题成绩均显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。实验组问卷调查显示,在牙周病学实验课中应用问题为基础的病案讨论教学法,有利于激发学习兴趣,巩固理论知识,提高了自主学习能力、表达与沟通能力、心理承受能力,培养了创新思维。PBL教学法对培养学生的综合性和系统性临床思维行之有效。

黄芪-聚乳酸/壳聚糖复合材料的体外细胞相容性实验研究

目的:探讨黄芪-壳聚糖/聚乳酸(AP-C/PLA)、壳聚糖/聚乳酸(C/PLA)多孔支架材料的细胞相容性,为牙周骨组织工程生物材料的选择提供依据。方法:将诱导的犬骨髓基质细胞(BMSCs)分别与AP-C/PLA、C/PLA支架联合体外培养。5d取材,进行形态学观察,测定两种材料的吸附率,放免法检测骨钙素的分泌情况。结果:BMSCs在两组材料上能贴附、生长, AP-C/PLA上贴附的细胞数量、细胞吸附率、骨钙素高于C/PLA。结论:AP-C/PLA、C/PLA具有良好的细胞相容性,AP-C/PLA较好,且可能成为前景良好的牙周骨组织工程生物材料。

牙周组织工程实验性牙周缺损模型的研究进展

牙周组织工程研究的前提是建立可重复评价牙周再生的实验性牙周缺损模型。本文主要对外科手术造成的急性缺损进行综述,分别就近年与牙周组织工程研究有关的水平骨上袋模型、骨内袋模型、根分叉病变模型、牙周开窗模型予以阐述,为探讨各种干预因素对牙周再生的影响奠定临床前期实验基础。

浅谈牙周病与口腔黏膜病教学的特色与优势

《牙周病学》和《口腔黏膜病学》是口腔科学的两大重要分支,笔者秉承"湘雅"严谨的临床教学模式,结合学科特点与优势,将学导式教学和PBL教学法贯穿于理论与实验教学的始终,提倡"素质教育",取得了良好教学效果。

“学生主体性引导”教学法在口腔科学临床见习中的实验性研究

为充分开发学生的主动性、创造性,激发学生的学习兴趣,培养学生探究式思维方法,湘雅医院口腔内科教研室将97级临床医学专业、麻醉专业共110人随机分成两组进行口腔科学临床见习教学,实验组采用"学生主体性引导"教学法,对照组采用"讲授式"教学法.实验组问卷调查结果表明,"学生主体性引导"教学法的总体满意度为:很满意和满意者占82%,一般者占12%,不满意者占1%,认为讲授式好者为5%;"学生主体性引导"教学法实施过程中学生自我感觉:感到轻松者占21%,感到费力者占76%,非常吃力者占3%,无法进行者为0.两组考试成绩比较(实验组86.18±3.98,对照组83.10±6.29),差别具有显著性意义(P<0.005).结果显示,"学生主体性引导"教学法激发了学生自主学习的潜能,增强了学习兴趣,也培养了学生分析问题、解决问题的能力,较好地缓解了教学时数少与教学内容多的矛盾,基本达到了传授知识又培养学生主动获取知识、能力的目的.

以创新思维为主体的引导牙周组织再生术实验课

在七年制的牙周病学教学中．通过对“引导牙周组织再生术”的实验教学方法进行改革，尝试“学导式教学法”．采用课后考试和问卷调查的形式获得信息。结果表明：该教学方法优于传统的教学方法，前者能更好的以学生为中心．提高学生的学习兴趣、主动学习、创新思维和分析问题的能力，对于达到七年制医学教育目的．培养学生的综合素质，深化教学改革，全面提高实验教学质量具有重要意义。

超声波洁治术的临床实习教学改革

为提高临床实习中超声波洁治术的教学效果 ,我们对传统的教学方法进行改进 ,应用问卷和成绩评估的方法调查了 94级口腔医学系两组共 30名学生。结果显示 :问卷调查中 ,学生认为改进法显著优于传统法 (P<0 .0 0 5 ) ;教师评估成绩中 ,两组无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,但改进组评为优的学生比例 (6 6 .6 7% )高于传统组(5 0 % )。提示改进法在提高学生的学习主动性 ,全面理解和掌握知识的能力、临床思维和临床工作能力方面优于传统法。

中西医结合治疗口腔黏膜下纤维化的疗效

目的:观察并比较丹参与泼尼松龙两者合用及单独使用泼尼松龙治疗口腔黏膜下纤维化的临床疗效。方法:选取口腔黏膜下纤维化初诊患者中、晚期各60例,各随机分为两组,分别采用丹参联合泼尼松龙(第1组)及单独使用泼尼松龙(第2组)治疗3个月,比较用药前、后患者病损面积、张口度和疼痛指数的变化,比较两治疗方案的临床疗效。结果:治疗3个月后,第1组口腔黏膜下纤维化中期和晚期患者的灰白色病损面积分别由(10.37±3.40)cm2和(19.60±3.27)cm2减少为(5.90±4.10)cm2和(16.33±4.02)cm2,中晚各期治疗前后比较,差异有统计学意义(P<0.05);张口度分别由(3.41±0.77)cm和(1.98±0.39)cm增加为(3.87±0.67)cm和(2.26±0.46)cm,中晚各期治疗前后比较,差异有统计学意义(P<0.05)。第2组治疗后中期患者的灰白色病损面积由(10.87±3.18)cm2减少为(6.70±3.75)cm2,张口度由(3.57±0.75)cm增加为(3.97±0.69)cm,治疗前后比较,差异均有统计学意义(P<0.05);而晚期治疗前后比较,其灰白色病损面积和张口度差异均无统计学意义(P>0.05)。两种方法治疗中期口腔黏膜下纤维化有效率分别为86.66%和73.33%,2组比较差异无统计学意义(P>0.05);而2种方法治疗口腔黏膜下纤维化晚期的有效率分别为70%和16.67%,2组比较有统计学差异(P<0.05)。丹参与泼尼松龙联合用药治疗口腔黏膜下纤维化,还可减少泼尼松龙引起的不良反应。结论:丹参联合泼尼松龙治疗口腔黏膜下纤维化具有明显优势。