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大鼠脑卒中相关基因的抑制性差减杂交文库构建
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作者 赵斌 王先梅 +5 位作者 张健 张芊 徐欢胜 许有元 祝之明 惠汝太 《高血压杂志》 CSCD 2001年第1期53-57,共5页
建立寒冷加高盐刺激大鼠脑卒中的大脑组织差异cD NA文库。方法 正常Wistar大鼠随机分为寒冷加高盐刺激的实验组和不予任何处理的对照组。取实验组发生脑卒中和对照组的大脑组织。提取两组组织的mRNA ,按照抑制性差减杂交试剂盒说明进... 建立寒冷加高盐刺激大鼠脑卒中的大脑组织差异cD NA文库。方法 正常Wistar大鼠随机分为寒冷加高盐刺激的实验组和不予任何处理的对照组。取实验组发生脑卒中和对照组的大脑组织。提取两组组织的mRNA ,按照抑制性差减杂交试剂盒说明进行实验。在三个水平设定了检验差减效率的实验。首先是使用试剂盒提供的骨骼肌mRNA加入外源性PhiX174(HaeⅢ )作为阳性实验组与我们的实验样品进行平行差减 ,用来证明系统正常。其次是采用PCR扩增看家基因GPDH的方法观察本次实验的差减效果。最后在两库随机各挑取 2 88个克隆测序 ,比较相同序列的重复情况。结果 差减各过程符合理论质量要求 ,分别得到一个脑卒中特异表达基因的片段库和一个正常特异表达基因片段库。卒中库的理论容量是 7.1× 10 4 ,正常库的理论容量是 5 .5× 10 5。差减效率分析表明结果良好。结论 成功地建立了一个脑卒中特异表达基因的片段库和一个正常特异表达基因片段库。 展开更多
关键词 脑卒中 大脑 寒冷 高盐 CDNA 抑制性差减杂交
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成人动脉和心脏cDNA文库的构建及新全长cDNAs的克隆 被引量:17
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作者 魏英杰 丁金凤 +8 位作者 赵勇 王新日 刘玉清 许有元 熊辉 周严 惠汝太 高润霖 强伯勤 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 1999年第6期369-371,共3页
目的 :构建成人动脉和心脏互补脱氧核糖核酸 (c DNA)文库 ,克隆多个新的全长互补脱氧核糖核酸 (c DNAs)。  方法 :应用成人动脉和心脏组织 ,采用 Stratagene的建库试剂盒构建 c DNA文库。将随机克隆 5 '端表达序列标签序列与 Gen ... 目的 :构建成人动脉和心脏互补脱氧核糖核酸 (c DNA)文库 ,克隆多个新的全长互补脱氧核糖核酸 (c DNAs)。  方法 :应用成人动脉和心脏组织 ,采用 Stratagene的建库试剂盒构建 c DNA文库。将随机克隆 5 '端表达序列标签序列与 Gen Bank/ EMBL/ DDBJ数据库进行同源性比较 ,新的全长 c DNAs采用步移法完成全序列测定获得。  结果 :所建动脉 c DNA文库包含 2 .4× 10 6个独立重组克隆 ,插入片段平均长度为 2 .0 kb;心脏 c DNA文库包含 1.0× 10 6个独立重组克隆 ,平均长度为 1.8kb。首批得到了 8条新的全长 c DNAs,已在 Gen Bank登记注册。  结论 :构建符合要求的 c DNA文库是克隆新的全长 c DNAs的一条快速有效的途径。 展开更多
关键词 动脉 心脏 基因文库 CDNA CDNAS 克隆
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血管成形术后血管平滑肌细胞增殖相关ESTs的筛选和克隆
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作者 魏英杰 丁金风 +2 位作者 许有元 钱杰 高润霖 《高血压杂志》 CSCD 1999年第4期352-356,共5页
目的:应用再狭窄动物模型,研究血管成形术后血管平滑肌细胞增殖的分子机制。方法:对家兔实施血管成形术后,分别在术后3、7 和14 天提取实施手术组和对照组的血管总RNA, 应用差异显示技术观察血管成形术后基因表达的改变。... 目的:应用再狭窄动物模型,研究血管成形术后血管平滑肌细胞增殖的分子机制。方法:对家兔实施血管成形术后,分别在术后3、7 和14 天提取实施手术组和对照组的血管总RNA, 应用差异显示技术观察血管成形术后基因表达的改变。结果:我们分别在三个时间点上发现了7 个仅在实施血管成形术的血管表达而在正常对照血管无表达的表达序列标签(Expressed Sequence Tags, ESTs)。尽管这7 个ESTs经序列测定和GenBank 查询均为新的ESTs,但经杂交证实仅有一个EST在损伤血管高表达,而在对照血管表达极低,它可能与血管成形术后血管平滑肌细胞的增殖有关。结论:本研究应用差异显示技术观察了血管成形术后基因表达的改变。利用这一技术可以帮助我们了解疾病动物模型基因表达的变化,这也可能是发现疾病相关基因的一条有效途径。 展开更多
关键词 血管成形术 冠心病 再狭窄 差异显示
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初步筛选心血管相关基因——表达序列片段测定法
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作者 刘玉倩 孟宪敏 +3 位作者 许有元 魏英杰 刘冬青 丁金凤 《高血压杂志》 CSCD 1998年第2期77-79,共3页
目的从正常人胎儿心脏cDNA文库中,用DNA自动测序的方法筛选心血管相关基因。方法(1)人胚胎心cDNA文库的构建;(2)挑取有目的基因片段插入的噬菌斑,选用正向T3和反向T7引物做PCR扩增;(3)直接使用其PCR... 目的从正常人胎儿心脏cDNA文库中,用DNA自动测序的方法筛选心血管相关基因。方法(1)人胚胎心cDNA文库的构建;(2)挑取有目的基因片段插入的噬菌斑,选用正向T3和反向T7引物做PCR扩增;(3)直接使用其PCR产物做DNA测序模板,用荧光标记的T3B引物做再次PCR扩增;(4)用DNA测序仪(pharmacia)测定基因表达序列片段(ESTs);(5)将所获得的ESTs输入Genebank数据库做同源序列分析。结果(1)所构建的人胎儿心脏cDNA文库的库容量为1×109克隆,平均目的基因片段1.2~1.5kb,PCR产物阳性克隆检出率高达70%以上,用6%尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳5h,可测cDNA序列片段210~550bp,平均300bp;(2)在所测3132个克隆的ESTs中,新ESTs为47.4%,已知序列片段为44.1%。结论利用人胎儿心脏cDNA文库测定ESTs是筛选心血管基因的有效方法;构建高质量的cDNA文库是成功测定ESTs的保证。 展开更多
关键词 高血压 MRNA 人胎心cDNA DNA序列 心血管疾病
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654—Ⅱ复方丹参注射液治疗小儿急性肾小球肾炎
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作者 许有元 《青海医药杂志》 1994年第B11期4-4,共1页
654—Ⅱ复方丹参注射液治疗小儿急性肾小球肾炎海北州第二人民医院儿科许有元我们采用654—Ⅱ复方丹参注射液与维生素C对照治疗20例小儿急性肾炎(AGN),现将疗效分析如下。临床资料本组40例均符合(中华儿科杂字198... 654—Ⅱ复方丹参注射液治疗小儿急性肾小球肾炎海北州第二人民医院儿科许有元我们采用654—Ⅱ复方丹参注射液与维生素C对照治疗20例小儿急性肾炎(AGN),现将疗效分析如下。临床资料本组40例均符合(中华儿科杂字1981;19(4):241)诊断标准,... 展开更多
关键词 复方丹参注射液 治疗小儿 急性肾小球肾炎 对照治疗 急性肾炎 疗效分析 AGN
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略阳县何家岩区成年妇女中的HPV感染分布
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作者 许有元 江凤 +5 位作者 司履生 楚雍烈 孙向乐 刘孜 杨桂艳 熊庆红 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 1998年第1期97-140,共2页
关键词 子宫颈癌 HPV感染 略阳县 成年妇女 免疫病理学 已婚妇女 HPV16 调整感染率 共有引物 PCR技术
全文增补中
THE CONSTRUCTION OF LEUKARYOTIC EXPRESSION PLASMID PCDNA3/HPV16E6 AND EXPERIMENTAL OBSERVATION OF NAKED DNA INJECTED INTO ANIMAL
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作者 许有元 王一理 +1 位作者 司履生 孙向乐 《Journal of Pharmaceutical Analysis》 CAS 1998年第2期115-119,共5页
HPV16 infection is ciosely associated with cervicai carcinomas. A lot or investigation indicate that HPV16 E6/E7 proteins can act as tumor rejection antigens. So an HPV16E6 leukaryoticexpression plasmid pcDNA3/E6 was ... HPV16 infection is ciosely associated with cervicai carcinomas. A lot or investigation indicate that HPV16 E6/E7 proteins can act as tumor rejection antigens. So an HPV16E6 leukaryoticexpression plasmid pcDNA3/E6 was constructed and transfected Into Cos7 cells, which expressed E6protein in vitro. Animal experiments proved that intramuscular immunlzation with plasmid peDNA3/E6 could elicit specific immunoresponse against HPV16 E6 in mice. All these results suggest that E6DNA vaccine can serve as a candidate therapeutic vaccine for HPV16 associated diseases in humans. 展开更多
关键词 DNA vaccine IHPV16E6 cervical cancer
全文增补中
Differential screening captopril responsive genes in the heart of spontaneously hypertensive rats
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作者 祝之明 刘玉清 +3 位作者 许有元 孟宪敏 赵斌 祝善俊 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2000年第1期29-31,共3页
Objective: To determine whether administiation of captopril, an ACE inhibitor, can induce unique gene expression in hearts from spontaneously hypertensive rats (SHR). Methods: Differential screening was used to isolat... Objective: To determine whether administiation of captopril, an ACE inhibitor, can induce unique gene expression in hearts from spontaneously hypertensive rats (SHR). Methods: Differential screening was used to isolate captopril response genes through a human fetal cDNA library, and reverse northern blot technique was applied to analyze gene expression. Results: Administration of captopril in SHR significantly lowered blood pressure, heart rate (HR), and the ratio of heart to body weight was compared with untreated SHR. Three captopril responsive cDNA sequences (expreed sequence tags, ESTs) were identified. One ESTs were highly homologous to human mitochondria gene and other 2 were novel and unknown genes. Conclusion: The benefit of captopril may be mediated, at least in part, by having an effect on the expression of a specific gene involved in cardiac remodeling and function in essential hypertension. 展开更多
关键词 CAPTOPRIL HEART differential screening hypertension ANGIOTENSIN CONVERTING ENZYME inhibitor
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低渗口服补液盐配合654—Ⅱ穴封治疗婴儿秋季腹泻疗效观察
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作者 李启光 许有元 《青海医药杂志》 1994年第B11期41-41,共1页
低渗口服补液盐配合654—Ⅱ穴封治疗婴儿秋季腹泻疗效观察青海省海北藏族自治州第二人民医院儿科李启光,许有元我们采用低渗口服补液盐(ORS),口服,并用654—Ⅱ穴位封闭的方法,治疗婴儿秋季腹泻,取得满意疗效。现总结如... 低渗口服补液盐配合654—Ⅱ穴封治疗婴儿秋季腹泻疗效观察青海省海北藏族自治州第二人民医院儿科李启光,许有元我们采用低渗口服补液盐(ORS),口服,并用654—Ⅱ穴位封闭的方法,治疗婴儿秋季腹泻,取得满意疗效。现总结如下:资料和方法1选择:本文选择19... 展开更多
关键词 治疗 秋季腹泻 婴儿 配合 疗效观察 低渗 口服补液盐 并用
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pcDNA3/HPV16 E6真核表达质粒的构建及裸DNA注射动物实验观察 被引量:1
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作者 许有元 王一理 司履生 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期406-409,共4页
目的探讨HPV16E6基因DNA诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法利用基因工程技术构建了HPV16E6真核表达质粒pcDNA3/E6,脂质体法转染Cos7细胞,肌肉注射免疫BALB/c小鼠,免疫组化技术检测抗体产生及... 目的探讨HPV16E6基因DNA诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法利用基因工程技术构建了HPV16E6真核表达质粒pcDNA3/E6,脂质体法转染Cos7细胞,肌肉注射免疫BALB/c小鼠,免疫组化技术检测抗体产生及抗原表达。结果被转染的Cos7细胞表达HPV16E6蛋白免疫小鼠产生抗HPV16E6抗体。结论这一结果为HPV16相关宫颈癌治疗性DNA疫苗的研制提供了资料。 展开更多
关键词 DNA疫苗 乳头状瘤病毒 子宫肿瘤 真核细胞 质粒
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氯离子通道阻断剂对氧化剂诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用
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作者 祝之明 孟宪敏 +2 位作者 刘玉清 许有元 惠汝太 《中华肾脏病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第6期353-356,共4页
目的研究氯离子(Cl-)通道阻断剂在氧化剂诱导的肾小管上皮细胞损伤中的作用。方法以H2O2诱导肾小管上皮细胞株(LLC-PK1)损伤,观察Cl-通道阻断剂对受损细胞LDH释放量、ATP含量和DNA降解程度的影响。结果Cl-通道阻断剂可使受损细胞的... 目的研究氯离子(Cl-)通道阻断剂在氧化剂诱导的肾小管上皮细胞损伤中的作用。方法以H2O2诱导肾小管上皮细胞株(LLC-PK1)损伤,观察Cl-通道阻断剂对受损细胞LDH释放量、ATP含量和DNA降解程度的影响。结果Cl-通道阻断剂可使受损细胞的LDH释放量下降、ATP含量回升和DNA降解程度减轻。结论Cl-通道参与了氧化剂对细胞损伤的病理过程,Cl-通道阻断剂对肾小管上皮细胞具有保护作用。 展开更多
关键词 氯离子通道 阻断剂 肾小管上皮损伤 保护作用
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