γ-synuclein对结肠癌细胞SW1116体外及体内增殖潜能的影响

目的:研究γ-synuclein对人结肠癌细胞系体外及体内增殖潜能的影响。方法:利用真核表达载体p IRES2-EGFP和RNA干扰载体p GCsi-U6/neo/GFP构建针对γ-synuclein的重组质粒,并转染至人结肠癌细胞株SW1116,经G418筛选出稳定转染细胞株。应用CCK8法检测细胞增殖活性;软琼脂克隆法检测细胞克隆形成能力;裸鼠皮下成瘤实验检测细胞在裸鼠体内的成瘤能力。结果:经测序以及RT-PCR和Western blot验证,重组质粒成功构建,并能够过表达或抑制γ-synuclein基因和蛋白。结果显示,γ-synuclein受抑制后,SW1116细胞的增殖数目从48h至120h持续显著减少(P<0.05),克隆形成率亦显著降低(P<0.05)。SW1116细胞的增殖和克隆形成能力与其γ-synuclein的表达水平呈正相关。过表达γ-synuclein能够部分增强SW1116细胞的增殖和克隆形成能力,但差异无统计学意义(P>0.05)。体内实验也有类似结果,过表达γ-synuclein能够稍微加快SW1116细胞瘤体生长速度,但直至第27天,其生长速度才显著加快(P<0.05)。γ-synuclein受抑制后,SW1116细胞裸鼠皮下成瘤速度从第6天至第30天显著减慢(P<0.05)。结论:γ-synuclein与结肠癌细胞体外及体内的增殖潜能密切相关。

突触核蛋白在结直肠癌中的表达模式及其临床意义

目的探讨结直肠癌组织中突触核蛋白(Synuclein)的表达模式,并分析其与临床病理特征的关系。方法半定量RT-PCR检测20例结直肠癌及其癌旁组织中α-synuclein、β-synuclein和γ-synuclein基因的mRNA水平,免疫组化SP法检测51例结直肠癌及其癌旁组织中α-synuclein、β-synuclein和γ-synuclein蛋白的表达。结果结直肠癌组织中α-synucle-in、β-synuclein和γ-synuclein mRNA的的相对表达量分别为0.62±0.32、0.61±0.32和0.72±0.37,显著高于癌旁组织的0.41±0.27、0.40±0.25和0.45±0.25(P=0.034,P=0.026,P=0.007)。γ-synuclein蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率为47.1%,显著高于癌旁组织的23.5%(P=0.022),而α-synuclein、β-synuclein蛋白在结直肠癌和癌旁组织中的表达差异无统计学意义。在α-synuclein、β-synuclein和γ-synuclein表达模式的8种组合中,任一种蛋白表达、α-synuclein或γ-synuclein、β-synuclein或γ-synuclein、α-synuclein和γ-synuclein在结直肠癌组织中的表达率明显高于癌旁组织(P<0.05)。α-synuclein、β-synuclein蛋白的表达与临床病理特征无关,γ-synuclein蛋白的表达与分期和淋巴结转移有关(P=0.047,P=0.048)。淋巴结转移及分期较晚者任一蛋白的阳性表达率明显高于无淋巴结转移及分期较早者(P=0.030,P=0.040)。结论 Synuclein在结直肠癌组织中的表达较癌旁组织有增高的趋势,其中γ-synuclein对于评估结直肠癌病程的发展和转归具有潜在价值。

提高信息素养 实施有效教学 ——农村学生信息素养的提升与有效教学

当今时代是一个信息化的时代,信息技术应用能力已经成为现代人必须具备的一项基本能力。而能力的培养大都是从娃娃抓起 的,小学阶段是学生各项基本能力培养的关键阶段,信息技术学科是一门以教授信息技术知识、提升学生信息设备应用能力为主要教学目 标的学科。因此,在这一阶段的课程教学过程中注重对学生信息素养的培养是我们每一位小学信息技术教师都不可推卸的责任。

γ-synuclein对结肠癌细胞系体外生物学行为影响的观察

目的:构建针对人γ-synuclein基因的shRNA真核表达载体,观察γ-synuclein基因对人结肠癌细胞系体外生物学行为的影响。方法:根据人γ-synuclein序列设计并构建γ-synuclein基因的shRNA真核表达载体,以脂质体转染的方法将γ-synuclein干扰质粒转染至人结肠癌细胞株HCT116,经G418筛选出稳定转染的细胞株。应用CCK8法检测γ-synuclein干扰对HCT116细胞增殖的影响,软琼脂克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力,细胞划痕实验检测细胞体外迁移能力,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。结果:经测序证明γ-synuclein的shRNA序列已成功插入pGCsi-U6/neo/GFP质粒中,构建的干扰质粒能够显著抑制γ-synuclein mRNA及蛋白的表达。γ-synuclein受抑制后,HCT116细胞增殖数目从48h后开始减少,持续72h,与空质粒组及未转染组相比,差异均有统计学意义,P<0.05。siRNA组细胞克隆形成率为(9.6±2.9)%,显著低于未转染组的(29.4±4.5)%和空质粒组的(32.1±5.8)%,差异均具有统计学意义,P<0.05。在细胞划痕实验中,γ-synuclein被抑制后细胞划痕损伤愈合的速度明显减慢。在侵袭实验中,穿过Matrigel胶及Transwell小室膜的siRNA组侵袭细胞数为20.1±5.26,显著低于未转染组的100和空质粒组的105.4±12.5,差异均有统计学意义,P<0.05。结论:干扰γ-synuclein的表达可显著抑制结肠癌细胞体外增殖、克隆形成和迁移侵袭能力。