第十四届湘雅国际糖尿病免疫学论坛会议纪要

由国家代谢性疾病临床医学研究中心、《糖尿病天地》杂志社共同主办的“第十四届湘雅国际糖尿病免疫学论坛”(以下简称“论坛”)于2019年4月19~21日在长沙举行。国家代谢性疾病临床医学研究中心主任周智广教授、中南大学代谢综合征研究中心主任刘峰教授担任论坛共同主席。出席本届论坛共有来自中国及美国、英国、意大利和中国香港等国家和地区的专家学者1200余人,并有5000余人在线观看论坛实况的在线直播。

1型糖尿病患者NLRC4基因外显子罕见变异的鉴定及其对基因功能的影响

目的:对1型糖尿病(T1DM)患者含NLR家族CARD域蛋白4(NLRC4)基因外显子及外显子内含子交界区的罕见变异进行鉴定,并探讨其对基因功能的影响。方法:选取2017年8月到2020年9月中南大学湘雅二医院代谢内分泌科508例T1DM患者作为病例组,男264例,女244例,年龄[M(Q1,Q3)]为27(11,43)岁。同时选取同期体检科527名健康对照者,男290名,女237名,年龄[M(Q1,Q3)]为47(36,60)岁。对T1DM患者和健康对照者的NLRC4基因的外显子区域进行捕获测序,并进行一代测序验证。构建NLRC4基因野生型和突变型质粒,转染293T细胞,采用免疫印迹试验(WB)检测NLRC4蛋白表达量以及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶前体(procaspase-1)切割产物含量。在转染野生型或突变型NLRC4质粒的293T细胞中加入放线菌酮(CHX),检测NLRC4蛋白降解情况。使用免疫荧光检测NLRC4蛋白质的定位。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清白细胞介素(IL)-1β浓度。结果:测序结果显示,4例患者及2名健康对照者NLRC4基因的3号外显子存在杂合变异c.208C>T;2例患者4号外显子存在杂合变异c.1564T>C,1例患者4号外显子存在c.1219G>C;这3种变异可能为T1DM的致病性变异。NLRC4野生型和c.208>T、c.1564T>C、c.1219G>C突变型质粒转染的293T细胞中,NLRC4蛋白表达水平、降解速率、定位以及procaspase-1的切割产物含量无明显改变;但转染c.1219G>C、c.208C>T突变型质粒的293T细胞分泌的IL-1β浓度[M(Q1,Q3)]分别为15.25(12.98,17.52)、15.44(13.81,17.07)ng/L,均低于野生型质粒的18.70(16.59,20.81)ng/L(P=0.020、0.010)。结论:NLRC4基因外显子罕见变异c.208C>T、c.1564T>C和c.1219G>C可能不改变蛋白质的表达水平、蛋白质的降解及定位,但c.208C>T和c.1219G>C错义突变可能抑制了炎症因子IL-1β的产生,从而对基因功能产生影响。

黑色素瘤缺乏因子2基因rs2276405和rs2793845单核苷酸多态性与1型糖尿病的关联研究

本研究旨在分析中国汉族人群炎症小体相关基因AIM2多态性与经典1型糖尿病(T1DM)的关联。采用质谱法对510例中国汉族经典T1DM患者和531名健康对照的AIM2基因的两个单核苷酸多态性位点rs2276405和rs2793845进行基因分型。卡方检验和Logistic回归比较T1DM患者与对照等位基因和基因型的频率以及不同遗传模型下与T1DM的关联。Kruskal-Wallis H检验分析AIM2基因多态性与各项临床特征的关系。结果发现AIM2基因的rs2276405位点与T1DM显著关联。在显性遗传模型和加性遗传模型下,rs2276405多态性均与T1DM关联。AIM2基因的多态性与临床特征均不相关。这些结果提示我们AIM2基因的rs2276405位点与中国汉族人群的经典T1DM显著关联,其次要等位基因为保护性等位基因。

NLRP2基因多态性与中国汉族人群1型糖尿病的关联研究

目的探讨在中国汉族人群中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白2(NLRP2)基因的单核苷酸多态性(SNP)与经典1型糖尿病(T1DM)的相关性。方法选取就诊于中南大学湘雅二医院代谢内分泌科的510例经典T1DM患者及本地区531名无血缘关系的健康志愿者为研究对象。利用质谱法对其NLRP2基因的rs1043673位点进行基因分型。两组间一般资料的比较采用Mann-Whitney U检验和χ2检验,T1DM患者组与对照组之间基因型及等位基因频率分布的比较采用χ2检验和logistic回归分析。NLRP2多态性与各项临床特征的分析采用Kruskal-Wallis H检验。结果NLRP2基因rs1043673位点的等位基因及基因型在两组之间的分布无明显差异。在T1DM患者中,rs1043673多态性与空腹C肽(P=0.029)、餐后2 h C肽(P=0.017)以及GADA的抗体滴度(P=0.043)均有关。结论NLRP2基因的rs1043673多态性与中国汉族T1DM患者的临床特征有关。