PhiC31整合酶电穿孔鸡成纤维细胞诱发位点特异性基因盒交换

旨在验证直接电穿孔重组蛋白PhiC31能否在鸡DF-1细胞中诱导PhiC31介导的基因盒交换。本研究通过原核表达和经亲和层析纯化获得SUMO-His-PhiC31融合蛋白,利用SUMO酶切除SUMO-His标签,获得天然的PhiC31蛋白。这两种蛋白先与pBCPB+质粒在试管内共孵育进行分子重组反应。之后,先将带有attP TT-DsRed2-attP CT片段的“着陆点”(landing pad,LP)质粒通过电穿孔导入DF-1细胞,然后进行第二次电穿孔,将带有attB TT-EGFP-HiBiT-attB CT的donor质粒连同PhiC31蛋白导入上述DF-1细胞,验证DsRed2-EGFP基因盒交换事件发生。结果显示,成功构建了原核表达载体pET-28a-SUMO-PhiC31,经IPTG诱导,该重组质粒在大肠杆菌中以可溶性方式表达SUMO-His-PhiC31融合蛋白,经亲和层析纯化,SUMO-His-PhiC31蛋白的产量达12 mg·L-1;该融合蛋白和切除SUMO-His标签的天然PhiC31蛋白均成功触发了pBCPB+质粒attP和attB位点之间的重组反应,重组效率基本一致(50%vs.52%);以脂质体转染法将PhiC31真核表达质粒pCMVInt与LP质粒和donor质粒共转染DF-1细胞,荧光显微镜观察证实了DsRed2-EGFP置换现象;以电穿孔方式将LP质粒、donor质粒和PhiC31蛋白先后导入DF-1细胞,获得了相同结果,表明PhiC31蛋白引发了attP TT与attB TT、attP CT与attB CT之间的重组反应。通过原核表达获得的PhiC31蛋白具有生物活性,有望成为一种重要试剂而用于Easi-CRISPR-TARGATT介导的转基因鸡研究。

2例犬胸部食道梗阻的诊治

犬胸部食道梗阻大多因吞咽了边缘锐利的骨头、金属、玩具等异物而引起,以多涎、呕吐和频繁的吞咽动作,以及呼吸困难为特征。完全阻塞的病例,液体和固体食物吞咽后立即返流,不完全阻塞的病例,流质食物可通过梗塞部位。体积较大的异物压迫气管会造成呼吸困难。尖锐的异物可以造成食道穿孔,导致胸膜炎发生,患犬表现为厌食、发热和胸腔积液,甚至出现感染性休克。本文报道了2例犬胸部食道完全梗阻的诊断和治疗过程。结果表明,X线检查对识别异物和确定阻塞部位有特殊作用;对患病动物及早实施开胸术和食道切开术取出异物,配合术后抗感染治疗和静脉营养支持,预后良好。

1例犬创伤性膈疝的诊断与治疗

犬膈疝是因交通工具撞击或高处坠落等创伤导致横膈膜破裂,腹腔脏器通过破例孔进入胸腔的一种疾病。进入胸腔的脏器压迫肺和心脏,患病动物出现呼吸困难、不耐受运动、心动过速、黏膜的发绀、甚至休克等症状。本文报道了1例犬创伤性膈疝伴发肋骨骨折的诊断和治疗过程。结果表明,X线检查和钡餐造影对膈疝诊断有重要作用;及早实施腹腔切开术和疝修补术,配合术后抗感染治疗,取得了良好疗效。

改良背主动脉注射法对鸡胚发育与转基因表达效率的影响

背主动脉注射是生产转基因鸡的经典方法,该方法不需换壳培养,但壳内注射技术难度大,并且无法实时观察后期胚胎发育情况。本实验对背主动脉注射法进行了改进,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)腺相关病毒(Adeno-associated Virus,AAV)壳外注射至150枚HH 14~16期(Hamburger-Hamilton Stage 14~16)鸡胚背主动脉中,再进行换壳培养,继续孵化至出壳,观察和分析改良背主动脉注射法与传统背主动脉注射法和胚盘下腔注射法对发育8、14、18、21 d鸡胚存活率、孵化率以及EGFP阳性检出率的影响。结果表明:改良背主动脉注射组鸡胚存活率均高于传统背主动脉注射组与胚盘下腔注射组(P<0.05或P<0.01);改良背主动脉注射组的鸡胚孵化率(37%)高于传统背主动脉注射组(16%)与胚盘下腔注射组(28%)(P<0.01);荧光蛋白手电筒检测显示,改良背主动脉注射组鸡胚EGFP阳性率(17%)明显高于传统背主动脉注射组(13%)与胚盘下腔注射组(12%)(P<0.01)。综上,背主动脉壳外注射结合换壳培养提高了转基因鸡胚胎孵化率和EGFP阳性检出率,对提高转基因鸡效率具有重要价值。

心相印WAKEUP提神湿巾上市

春困秋乏夏打盹，睡不醒的冬三月，昏昏欲睡、浑浑噩噩、无精打采……现在“特困”君越来越多。针对此现象，恒安湿巾发展部将冰爽劲凉系列湿巾升级为更强大、更牛的WAKEUP提神系列湿巾，产品即将酷炫上市。