B10细胞在益气升提法治疗EAMG大鼠中的作用

目的观察在实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)中,用益气升提法对其治疗的效果及分析B10细胞的作用和免疫机制。方法将48只Lewis大鼠随机分成6组:阳性药物对照组、益气升提低剂量组、益气升提中剂量组、益气升提高剂量组、佐剂对照组和模型对照组。用Rα97-116免疫大鼠建立EAMG模型。在实验中对大鼠体重,临床表现,低频重复电刺激(RNS)衰减率进行观察。检测血清中乙酰胆碱受体抗体(AchR-Ab)、白介素10(IL-10)的含量,其方法是酶联免疫吸附试验(ELISA);检测组织中CD19的表达,其方法用蛋白印迹法(western-blot),以及用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-10和CD19基因的表达。结果给药后,大鼠体重回升,临床症状好转,RNS衰减率显著降低(P <0.05,P <0.01),血清中AchR-Ab含量显著下降(P <0.05,P <0.01),IL-10含量显著上升(P <0.05,P <0.01),组织中CD19蛋白表达下降(P <0.05,P <0.01)。CD19和IL-10基因表达下降(P <0.01,P <0.001)。结论 EAMG大鼠经过益气升提法治疗后,临床症状及体重下降趋势有明显改善作用,其机制可能是升高IL-10含量,下调IL-10和CD19基因表达以及下调CD19蛋白表达,降低血清中AchR-Ab含量,从而减少神经肌肉接头处AchR损害。

黄芪升麻柴胡治疗实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的量效关系及免疫学机制研究

目的:探讨益气升提法治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠中黄芪的最佳剂量,以及免疫机制。方法:采用Rα97-116免疫Lewis大鼠构建EAMG,随机分为佐剂对照组、模型对照组、益气升提黄芪低剂量组、益气升提黄芪中剂量组、益气升提黄芪高剂量组。观察大鼠抓力、体质量、低频重复电刺激(RNS)衰减率,检测血清AChR-Ab、IFN-γ、TGF-β、IL-6、IL-17含量及外周血淋巴细胞CD4^+ CD25^+ Fox P3^+ Treg比例,将EAMG大鼠临床表现与实验室检测指标综合汇总,进行综合评分,评价各组治疗效果。结果:治疗后,低中高三剂量益气升提组大鼠EAMG综合评分分别为82,58,88分(满分100分),各组大鼠体质量回升,抓力回升,RNS衰减率显著降低(P<0. 05,P<0. 01,P<0. 001),血清AChR-Ab、IFN-γ、IL-6、IL-17含量显著下降,TGF-β含量显著升高(P<0. 05,P<0. 01,P<0. 001),外周血淋巴细胞CD4^+ CD25^+ Fox P3^+ Treg比例显著升高(P <0. 05)。结论:益气升提法对EAMG大鼠具有明确治疗效果,黄芪高剂量组疗效最优,不同剂量黄芪配伍升麻柴胡对MG细胞因子网络的影响各不相同。益气升提法治疗EAMG的机制可能是通过升高TGF-β含量,降低IFN-γ、IL-6、IL-17含量,提高CD4^+ CD25^+ Fox P3^+ Treg比例,降低血清AchR-Ab含量,从而减少神经肌肉接头处AchR损害。

加味补阳还五汤对防治动脉粥样硬化的Toll样受体7及其下游信号转导通路的影响

目的:探究加味补阳还五汤对于载脂蛋白E基因敲除小鼠的Toll样受体7(TLR7)及其下游信号转导通路的影响,从而探讨加味补阳还五汤对动脉粥样硬化的防治机制。方法:将40只雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组、补阳还五汤组、加味补阳还五汤组,每组10只,10只C57BL/6J小鼠作为空白组。空白组正常饮食饮水,其余组给予高脂饲料喂养8周。空白组和模型组每日用0.9%氯化钠溶液灌胃,阿托伐他汀组、补阳还五汤组及加味补阳还五汤组每日以相应药物灌胃。第9周后采用生化检测方法检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)。采用苏木素-伊红(HE)染色方法观察,并测量斑块所占管腔面积之比。以实时定量荧光PCR检测TLR7及MyD88、TRAF-6、NF-κB、IRF7 mRNA表达;蛋白质印迹法测定其蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组TC、TG、LDL-C水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,阿托伐他汀组、补阳还五汤组、加味补阳还五汤组TC、TG、LDL-C水平显著降低,同时HDL-C水平升高(P<0.01);病理学观察,与空白组比较,模型组主动脉内膜增厚、隆起、内皮细胞部分脱落,有大量斑块形成,中膜平滑肌细胞增生;与模型组比较,阿托伐他汀组、补阳还五汤组、加味补阳还五汤组均能有效地改善主动脉细胞的炎性浸润程度和斑块管腔占比(P<0.01)。与空白组比较,模型组TLR7、MyD88、TRAF-6、NF-κB mRNA与蛋白的表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,阿托伐他汀组、补阳还五汤组、加味补阳还五汤组TLR7、MyD88、TRAF-6、NF-κB mRNA与蛋白的表达显著降低(P<0.05,P<0.01),但3组之间的m R NA与蛋白表达差异无统计学意义。结论:加味补阳还五汤对于动脉粥样硬化的发生发展有防治作用,其机制可能与抑制TLR7及其下游信号转导通路有一定相关性。