蒽醌修饰物KA-4s抑制SKOV3/DDP细胞增殖并诱导铁死亡

目的:探讨蒽醌修饰物KA-4s在体外对人顺铂耐药卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖的影响和诱导细胞铁死亡的机制。方法:将SKOV3/DDP细胞分为对照组和不同浓度(2μmol/L、5μmol/L和7μmol/L)的蒽醌修饰物KA-4s组。采用MTT法检测单药KA-4s和顺铂(DDP)对SKOV3/DDP细胞活力的影响,划痕实验检测细胞的迁移能力,线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker Green)检测线粒体形态改变,透射电镜观察线粒体超微结构。以铁死亡诱导剂RSL3为阳性对照组,用DCFA-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,比色法检测细胞内总铁蛋白含量,western blotting检测铁死亡相关蛋白GPX4、FSP1的表达情况。结果:KA-4s和顺铂作用48 h后,卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖均明显受到抑制,相比顺铂,KA-4s的抑制作用更强(P<0.001),并能抑制细胞迁移。经KA-4s处理后线粒体受损,线粒体结构改变,膜密度增大,嵴减少甚至消失。与空白对照组相比,阳性RSL3组和KA-4s组SKOV3/DDP细胞内ROS水平升高(均P<0.001),5μmol/L KA-4s组总铁离子含量显著升高(P<0.001),卵巢癌SKOV3/DDP细胞中GPX4、FSP1蛋白的表达均降低(P<0.01),但正常卵巢IOSE80细胞中GPX4表达均无改变。结论:KA-4s能抑制SKOV3/DDP细胞增殖、迁移并诱导细胞铁死亡。

刺激响应型MSNs负载蒽醌修饰物4S对三阴性乳腺癌的体外研究

目的:探讨刺激响应型介孔二氧化硅纳米粒(MSNs-SS-HA)作为药物递送系统是否能提高蒽醌修饰物4S对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞的靶向性、生物利用度,并降低对正常细胞的毒性。方法:后修饰法制备功能化的纳米粒MSNs-SS-HA,利用透射电镜、马尔文粒径仪、傅里叶红外光谱和元素分析等对纳米粒进行表征。体外透析实验检测MSNs@4S和MSNs-SSHA@4S在不同浓度的谷胱甘肽缓冲溶液中的释放行为。MTT试验测定游离4S和载药纳米粒对TNBC细胞MDA-MB231、乳腺癌细胞MCF-7和乳腺正常细胞MCF-10A的抑制活性。激光共聚焦显微镜观察蒽醌修饰物4S和载药纳米粒在不同细胞中的摄取情况。结果:成功制备功能化的载药纳米粒MSNs-SS-HA@4S,其载药量和包封率分别为(17.43±1.2)%和(90.56±1.1)%。载药纳米粒MSNs-SS-HA@4S具有还原响应特性,同时具有缓控释药作用。在相同浓度下,MSNs-SS-HA@4S对MDA-MB231细胞的毒性高于MCF-10A细胞,而对MCF-7细胞的抗肿瘤活性较弱(P<0.05)。体外细胞摄取实验表明,MSNs-SS-HA@4S能够靶向CD44受体高表达的TNBC细胞MDA-MB231,可能通过CD44受体介导的内吞作用进入细胞,揭示了MSNs-SS-HA@4S具有肿瘤靶向治疗潜能。结论:MSNs-SS-HA@4S提高了蒽醌修饰物4S增效减毒的功效,为TNBC的靶向治疗提供新思路。

蒽醌修饰物4X触发内质网应激诱导卵巢癌细胞死亡模式研究

目的:探究蒽醌修饰物4X诱导卵巢癌细胞SKOV3和顺铂(DDP)耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP的死亡模式和作用机制。方法:分别将SKOV3细胞和SKOV3/DDP细胞分为对照组和不同浓度(2μmol/L、4μmol/L和8μmol/L)蒽醌修饰物4X组。采用MTT法检测细胞增殖率,苏木精-伊红(HE)染色观察细胞形态,线粒体绿色荧光探针观察线粒体形态,透射电镜观察细胞超微结构,western blotting法检测内质网应激相关蛋白(GRP78、PERK)、凋亡蛋白(CHOP)和铁死亡关键蛋白(GPX4)的表达。加入凋亡抑制剂Z-VAD-FMK,与蒽醌修饰物4X共处理,用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:蒽醌修饰物4X作用48 h后,SKOV3和SKOV3/DDP细胞增殖均明显受到抑制(P<0.05)。经蒽醌修饰物4X处理后SKOV3和SKOV3/DDP细胞质出现明显空泡,且部分空泡累及细胞核,SKOV3和SKOV3/DDP均有明显的线粒体损伤;经蒽醌修饰物4X处理后细胞线粒体固缩,膜密度增高,嵴消失。与对照组相比,蒽醌修饰物4X组SKOV3和SKOV3/DDP细胞凋亡率升高(P<0.05),联用ZVAD-FMK可抑制蒽醌修饰物4X对细胞凋亡的促进作用(P<0.05)。蒽醌修饰物4X可不同程度地下调SKOV3和SKOV3/DDP细胞GRP78、PERK、ATF4和CHOP的表达,上调GPX4表达(均P<0.05)。结论:蒽醌修饰物4X可能在诱导内质网应激的同时诱导SKOV3和SKOV3/DDP细胞发生凋亡和铁死亡,从而发挥抗卵巢癌作用。

蒽醌修饰物KA-4c触发内质网应激靶向ATF6抗乳腺癌细胞作用机制

目的探讨蒽醌修饰物KA-4c抗乳腺癌细胞的作用机制,并采用药物亲和力反应靶标稳定性技术(drug affinity responsive target stability,DARTS)确定其作用靶点。方法MTT法检测细胞活力;HE染色、ER-Tracker Red、电镜研究KA-4c对乳腺癌细胞形态学等的影响;流式细胞术检测KA-4c是否诱导细胞凋亡,Western blot实验检测凋亡蛋白表达;DARTS、细胞热移位分析(cellular thermal shift assay,CETSA)技术确定KA-4c的作用靶点。结果KA-4c对三阴性乳腺癌MDA-MB231细胞的增殖抑制效果最为明显,并可导致内质网和线粒体空泡化而损伤细胞,凋亡率随KA-4c浓度增加而升高,凋亡相关蛋白CHOP、caspase-7随KA-4c浓度增加表达增强。DARTS结果显示,KA-4c可激活内质网蛋白加工信号通路,其中KA-4c与ATF6蛋白结合而耐受蛋白酶水解;CETSA实验结果表明,KA-4c可呈浓度依赖性增强ATF6蛋白的表达。结论KA-4c触发内质网应激诱导乳腺癌细胞凋亡,ATF6可能是KA-4c的作用靶点之一。

阿尔茨海默病模型小鼠脑乙酰胆碱转移酶(chAT)和乙酰胆碱酯酶(A-chE)活力的实验研究

目的:探讨中药茯苓及复方制剂对铝致老年痴呆症(AD)小鼠治疗效果的观察及对乙酰胆碱转移酶(chAT),乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响。方法:建立铝致AD小鼠动物模型,将50只小鼠分为正常组、模型组、治疗1组和治疗2组;除正常组外,造模组用D-半乳糖 + AlCl3混合水溶液腹腔注射(Al3+ + 浓度2 mg/ml的三氯化铝水溶液按5 mg/kg体重剂量给小鼠稀释后腹腔注射60天)。治疗1、2组在铝染毒2个月后同时给予中药复方制剂不同剂量灌胃,模型组和正常组用等量体积蒸馏水灌胃,直至实验结束。在实验前、后分别进行水迷宫游水试验,并测定血红蛋白;实验结束后取血,分离血清,测定血清生化指标;处死小鼠取脑,称脑重量,制成脑匀浆,离心取上清,分别测定脑中乙酰胆碱酯酶(AchE)、乙酰胆碱转移酶(chAT)、超氧阴离子自由基()清除率、谷胱甘肽等含量;另部分脑用甲醛处理后作病理检查。结果:大脑(AchE)活力,正常组、模型组、治1组、治2组依次为,5.77 &#177;1.52▲、6.02 &#177;0.79、7.30 &#177;0.59、5.27 &#177;1.09▲▲ (U/mg.prot ),与治疗1组比较,▲P ▲▲P ★、7.05 &#177;5.07▲、52.95 &#177;25.79▲★★、53.95 &#177;12.82▲★★ (U/g组织湿重),与正常组比较,▲P ★P ★★P ▲▲、44.71 &#177;2.21★★、55.41 &#177;2.10★▲▲、41.30 &#177;3.36★★▲▽▽ (U/ml),与正常组比较,★P ★★P ▲P ▲▲P ▽▽P 3+含量依次为135.00 &#177;8.37、149.40 &#177;0.89、147.43 &#177;4.83、118.75 &#177;6.41 (ng/ml),超氧阴离子自由基()清除率依次为27.65 &#177;4.81、14.71 &#177;3.60、22.65 &#177;8.67、21.57 &#177;6.14 (%),造模前、中、后,Hb依次为正常组无明显变化、模型组降低、治疗组先降低后升高。结论:铝可导致大脑chAT下降、AchE活性升高,乙酰胆碱减少,胆碱能神经障碍,认知功能障碍,可能是老年痴呆症发病的重要原因,同时铝又使动物抗氧化能力降低,加重疾病;本中药复方制剂通过排铝、恢复(chAT) (AchE)酶活力,提高抗氧化能力,治疗后对老年痴呆症有明显疗效。而茯苓(治1组)比复方制剂疗效较差。

提高学困生对小学语文学习兴趣之我见

在新课程改革的过程中,广大教师要坚守“一切为了学生,为了学生的一切”的教学理念,对于所有的学生做到一视同仁,让每一个学生都能够学习到有价值的知识,根据不同层次与水平的学生实施不同的教学策略。当前小学语文教师的一个重要的教学任务便是实现对学困生的转化,激发出学困生学习语文的兴趣。本文将就如何提高学困生对小学语文学习兴趣的策略进行深入的分析与探讨。