难治性癫痫患儿的基因变异特征分析

目的分析不同年龄段难治性癫痫(RE)患儿的基因变异特征,为精准诊疗提供一定的数据支撑。方法选取2018年1月1日至2019年11月21日于浙江大学医学院附属金华医院就诊的117例RE患儿为研究对象,根据发病年龄分为<1岁、1~<3岁、3~<12岁和≥12岁4组。回顾性分析患儿的临床资料、全外显子组测序数据、携带基因变异患儿的父母测序结果等资料。结果本研究纳入RE患者共117例,其中男性67例,女性50例。发病年龄范围为4日龄~14岁。117例RE患儿中,33例携带致病性或可能致病性变异,检出率为28.21%(33/117)。<1岁组、1~<3岁组和≥3岁组的检出率分别为53.85%(21/39)、12.00%(3/25)和16.98%(9/53),差异有统计学意义(χ^(2)=19.202,P<0.001)。有、无共患病患儿的检出率分别为33.33%(12/36)和25.93%(21/81),差异无统计学意义(χ^(2)=0.359,P=0.549)。33例携带基因变异患儿中,27例为单核苷酸多态性变异(SNV)或插入缺失(InDel)变异,6例为拷贝数变异(CNV)。检出率最高的变异基因为PRRT2(15.15%,5/33),其次为SCN1A(12.12%,4/33)。携带基因变异的患儿中,72.73%(8/11)的患儿根据参考文献调整药物后获得临床缓解。结论28.21%的RE患儿可检出致病或可能致病CNV变异,发病年龄小的患儿检出率较高,PRRT2和SCN1A基因受累较多见。根据受累基因的类型调整药物将有助于提高缓解率。

miR-126在食管癌组织中低表达并抑制食管癌EC109细胞的增殖和迁移

目的:探讨微小RNA(microRNA,miRNA,miR)-126在食管癌组织中的表达及mi R-126对食管癌EC109细胞增殖和迁移的影响。方法:应用实时荧光定量PCR法检测24例食管癌组织及其相应癌旁组织中mi R-126及SOX2(sex determining region Y-box 2)m RNA的表达。将miR-126模拟物(mimics)或其阴性对照(miR-negative control,miR-NC)转染至EC109细胞后,应用实时荧光定量PCR法检测EC109细胞中mi R-126的表达水平,MTT法和Transwell小室法分别检测细胞的增殖能力和迁移能力。构建野生型和突变型SOX2基因3’-端非翻译区(3’-untranslated region,3’-UTR)双荧光素酶报告系统,检测萤火虫荧光素酶的相对活性,以验证mi R-126对SOX2基因的作用靶点。应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测转染mi R-126 mimics后,EC109细胞中SOX2 m RNA及其蛋白的表达水平。免疫组织化学法检测食管癌组织及其相应癌旁组织中SOX2蛋白的表达。结果:食管癌组织中miR-126的表达水平明显低于相应的癌旁组织(P<0.01),SOX2 m RNA的表达水平明显高于相应的癌旁组织(P<0.05),且mi R-126与SOX2的表达呈负相关(r=-0.837,P<0.001)。mi R-126mimics转染后,EC109细胞中mi R-126的表达水平明显高于阴性对照组(P<0.01),细胞的增殖能力和迁移能力明显低于阴性对照组(P<0.05,P<0.01)。mi R-126与SOX 2基因的2个预测结合靶点都能特异性结合。转染mi R-126 mimics后,EC109细胞中SOX2 m RNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组(P<0.01)。食管癌组织中SOX2蛋白的阳性表达率明显高于相应的癌旁组织(P<0.01)。结论:mi R-126在食管癌组织中呈低表达,且对食管癌EC109细胞的增殖和迁移能力具有抑制作用。SOX2可能是mi R-126的靶基因之一。

一个肝豆状核变性家系ATP7B基因致病性变异分析

目的明确1个肝豆状核变性(Wilson disease,WD)家系ATP7B基因的致病变异类型及来源,为疾病的诊断及遗传咨询提供依据.方法收集先证者及其父母和哥哥的外周血样,应用Sanger测序检测该家系4人ATP7B基因21个外显子及其侧翼序列的点突变及小片段插入/缺失,用高分辨比较基因组杂交芯片(array-based comparative genomic hybridization,aCGH)检测先证者ATP7B基因的拷贝数变异(copy number variation,CNV),并通过荧光定量PCR技术(quantitative real-time PCR,qPCR)验证该家系中另外3人ATP7B基因的拷贝数情况.结果ATP7B基因测序结果显示,先证者携带一个已知致病性杂合变异(c.2668G>A,p.V890M),该变异遗传自母亲,同时发现母亲还携带5个常见的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点变异,且均为杂合状态,而父亲及哥哥也携带这5个变异,所不同的是其中两个变异为纯合状态.先证者以上5个SNP均为野生型.高分辨CGH芯片结果显示,先证者ATP7B基因存在大小约4 kb的杂合缺失,包含第2、3外显子,覆盖2个SNP.qPCR结果表明,先证者父亲和哥哥ATP7B基因第2、3外显子的拷贝数约为正常对照的1/2,提示二人携带该片段的杂合性缺失;母亲结果无异常.结论本研究通过联合使用Sanger测序、CGH芯片及qPCR技术对1个WD家系进行了分子诊断,同时发现了一个新的ATP7B基因致病性CNV,丰富了ATP7B基因的突变谱.