补脾益气方药对哮喘大鼠嗜酸性粒细胞趋化因子表达的影响

目的观察补脾益气方药对哮喘大鼠肺组织嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)表达的干预作用。方法SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组(A组)、哮喘组(B组)、生理盐水治疗组(C组)、地塞米松组(D组)和补脾益气方药治疗组(E组)。哮喘组通过卵蛋白(OVA)致敏、激发建立大鼠哮喘模型,以生理盐水和地塞米松分别做对照治疗。E组大鼠在复制哮喘模型后,按照1 mL/100 g体质量给予补脾方药1次/d,共14 d。计数肺泡灌洗液细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)、巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数;光镜下观察肺组织病理学改变;采用RT-PCR和Western bloting检测肺组织eotaxin的表达。结果与A组比较,B、C组肺泡灌洗液EOS计数、eotaxin的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.01),D、E组较B组降低(P<0.01),D、E组间无差异(P>0.05)。结论补脾益气方药可能通过降低哮喘大鼠体内eotaxin水平,减轻炎症细胞在肺组织局部浸润,抑制气道炎症。

补脾益气方药对哮喘大鼠Th1/Th2失衡的调节及机制

目的观察补脾益气方药对哮喘大鼠Th1/Th2失衡的免疫调节作用及机制。方法 SPF级雄性Wistar大鼠随机分为对照组、哮喘组、生理盐水治疗组、地塞米松组、补脾益气方药治疗组。检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞比例;采用ELASA方法检测BALF中IL-4和IFN-γ的含量;采用Western blot方法检测肺组织GATA-3和T-bet的表达。结果模型组和生理盐水治疗组与正常组比较,BALF中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的比例及IL-4含量均明显升高,IFN-γ含量显著下降;GATA-3表达增高,T-bet表达降低。经补脾益气方药与地塞米松治疗后,BALF中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的比例和IL-4含量均明显下降,IFN-γ含量显著升高;GATA-3表达下调,T-bet表达上调。上述结果均差异显著,具有统计学意义(P<0.01)。结论补脾益气方药对Th1/Th2失衡有调节作用,这种作用是通过调节GATA-3和T-bet的协调表达来实现。

五味子多糖对甲状腺癌细胞株SW579凋亡及survivin表达的影响

目的:探讨五味子多糖对人甲状腺癌SW579细胞株的生长抑制作用及其机制。方法:48只成年雄性Wistar大鼠分为阴性对照组和药物组,阴性对照组予以生理盐水,药物治疗组予以不同剂量的五味子多糖,分别提取其血清。SW579细胞分为空白组、阴性对照组和药物组。空白组为15%小牛血清的RPMI-1640培养液,阴性对照组细胞加入阴性组大鼠的纯化血清,药物组分别加入不同浓度(100、200和400mg·kg-1)的含药血清,AO/EB荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况,MTT法检测细胞增殖情况,Western blotting检测细胞survivin的表达。结果:流式细胞术结果显示,低、中和高剂量药物组细胞凋亡率为8.63%、35.63%和38.32%,明显高于空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率(4.23%和4.10%)(P<0.01),并随剂量增加而增加。阴性对照组细胞生长抑制率为(0.12±0.06)%,低、中和高剂量药物组细胞生长抑制率为(27.51±1.62)%、(34.69±0.79)%和(45.83±1.33)%,药物组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。Western blotting检测低、中、高剂量药物组细胞survivin的表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)。结论:五味子多糖能有效抑制人甲状腺癌细胞株SW579中survivin基因表达,诱导SW579细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。

五味子多糖对CCl_4诱导的肝损伤大鼠亚细胞水平的保护作用

目的研究五味子多糖对CCl4引起肝损伤大鼠超微结构的保护作用。方法 Wistar大鼠被随机分为对照组、CCl4损伤组、不同浓度的五味子多糖处理组,分别予以生理盐水、10%CCl4和不同浓度的五味子多糖提取液(100、200和400 mg/kg)。检测血清ALT、AST活性;肝匀浆MDA、SOD、ATPase和γ-谷氨酰基转肽酶(γ-GT)酶活性及含量变化;透射电镜下观察肝脏超微结构的改变。结果大鼠摄入五味子多糖后的低、中、高剂量组与CCl4诱导的肝损伤大鼠血清ALT、AST活性比较显著降低(P<0.01),肝中MDA的生成量显著减少〔对照组(0.91±0.27),模型组(3.69±0.34),低剂量组(1.30±0.26),中剂量组(0.99±0.13),高剂量组(0.96±0.43),P<0.01〕,SOD、ATPase和γ-GT酶活性均明显增强(P<0.01),并呈现剂量依赖效应。经治疗后肝脏组织的总抗氧化能力显著提高,电镜下可见CCl4引起的肝脏组织气球样变、脂肪变性、炎症浸润及线粒体肿胀的超微结构均得到明显改善。结论五味子多糖提取物对肝细胞具有明显的保护作用,这种作用可能与其拮抗CCl4毒性代谢产物导致的脂质过氧化对肝亚细胞结构的损伤有关。

五味子多糖对环磷酰胺诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用

目的探讨五味子多糖对环磷酰胺(Cyclophosphamide,CY)诱导小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用及相关机制。方法小鼠腹腔注射CY,建立胸腺细胞凋亡模型,施以不同浓度五味子多糖灌胃,利用流式细胞仪、末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL染色)及Bcl-2、Bax免疫组化分别观察不同剂量的五味子多糖对CY诱导的胸腺细胞凋亡的影响及机制。结果流式细胞仪和TUNEL染色显示CY组与对照组相比的细胞凋亡率明显增高,五味子多糖治疗组与CY组比较凋亡率明显降低(P<0.01)。CY组bcl-2基因表达明显下降,bax基因表达明显增加,Bcl-2/Bax比值下降。五味子多糖组与之相反,二者比值升高(P<0.01)。结论五味子多糖能够抑制CY诱导的胸腺细胞凋亡,降低胸腺细胞的损伤,其抑制作用可能通过促进Bcl-2表达、抑制Bax蛋白表达实现的。

RNAi沉默Survivin基因对人甲状腺癌SW579增殖的影响

目的:应用RNAi技术封闭Survivin基因,对甲状腺癌细胞增殖的影响,探讨RNA干扰survivin基因表达治疗甲状腺癌的可行性。方法:实验设为空白组、脂质体组、阴性对照组和RNAi组。RNAi组是针对Survivin基因的有效序列合成DNA正义链及反义链,经变性、退火,形成双链DNA,与pGenesil-1线性质粒构建重组体,经脂质体转染SW579细胞。各组利用RT-PCR、Western-bloting检测survivin表达情况;MTT法检测细胞增殖的变化,流式细胞仪检测转染后SW579细胞凋亡的变化。结果:RT-PCR、Western blotin结果显示,转染survivin基因重组体组的mRNA和蛋白水平的表达与其它各组比较均明显下调(P<0.01),转染后SW579细胞生长率下降,凋亡指数明显增加(P<0.01)。结论:特异封闭survivin基因,能够有效地抑制甲状腺癌细胞的增殖,诱导其凋亡的发生。

过量碘对原代培养的猪甲状腺细胞凋亡的诱导作用

目的观察过量碘对原代培养的猪甲状腺细胞凋亡的诱导作用,并对其机制作初步探讨。方法取健康的猪甲状腺细胞培养24 h后,加入不同浓度的碘化钾,观察细胞的形态改变;琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术分析DNA的降解;采用MDA法测定细胞膜的脂质过氧化程度。结果加入碘化钾后6 h左右,可见细胞凋亡,48 h左右达到高峰;琼脂糖凝胶电泳出现典型的梯状带;流式细胞术可见亚二倍体高峰,细胞凋亡率随碘化钾浓度的升高而升高(P<0.05);脂质过氧化产物丙二醛含量随碘化钾浓度的升高而升高(P<0.05)。结论过量碘化钾诱导原代培养的猪甲状腺细胞凋亡,呈剂量依赖关系,可能通过活性氧机制启动凋亡。

原代培养猪甲状腺细胞及甲状腺过氧化物酶活性与氟化钠的影响

目的:流行病学调查结果显示,地方性氟中毒与甲状腺肿的流行有很大的重叠性。探讨氟化钠对原代培养猪甲状腺细胞及甲状腺过氧化物酶活性的影响。方法:实验于2006-10/2007-05在辽宁医学院科学实验室中心完成。①实验方法:在猪死亡1h内取其甲状腺组织,去除甲状腺组织包膜及外层活性差的组织,选取中央活性高的部位,剪成1mm3组织块,用胰蛋白酶、胶原酶Ⅳ消化分离,得到含猪甲状腺细胞的消化液,沉淀悬于含体积分数为0.15的胎牛血清、1U/L牛促甲状腺素、80万U/L庆大霉素的F12培养基中,过滤,调整细胞浓度至5×105L-1,接种培养,每3d更换培养液。常规培养48h的猪甲状腺细胞接种于96孔培养板,按氟化钠终浓度不同分为0,40,80,160mg/L组。②实验评估:染毒48h后,采用噻唑蓝法测定细胞存活量,采用改良愈创木酚法测定甲状腺过氧化物酶活性。结果:①氟化钠对原代培养猪甲状腺细胞存活量的影响:与0mg/L氟化钠比较,40mg/L氟化钠染毒后猪甲状腺细胞的存活量基本相似;80,160mg/L氟化钠染毒后猪甲状腺细胞的存活量均明显下降(P<0.01)。②氟化钠对甲状腺过氧化物酶活性的影响:与0mg/L氟化钠比较,40,80,160mg/L氟化钠染毒后的甲状腺过氧化物酶活性均明显下降(P<0.01),呈剂量-效应关系。结论:氟化钠对原代培养的猪甲状腺细胞及甲状腺过氧化物酶活性均具有抑制作用。

氟化钠对原代培养猪甲状腺细胞毒性效应的实验研究

目的观察NaF对原代培养猪甲状腺细胞的毒性效应,并探讨其作用机制。方法采用40mg/L,80mg/L和160mg/LNaF对原代培养猪甲状腺细胞进行染毒,48h后光镜下观察猪甲状腺细胞形态结构的变化,并采用吖啶橙染色法,在荧光显微镜下观察细胞核形态结构的变化;采用MTT法测定细胞存活率。结果中、高剂量氟组甲状腺细胞滤泡结构渐消失,细胞变小、变圆,亮度增加。甲状腺细胞核内可见致密浓染的黄绿色染色,呈圆形、月牙形,可见发泡现象及凋亡小体,且细胞的存活率显著低于对照组(P<0.01)。结论NaF对原代培养猪甲状腺细胞具有毒性效应,并呈现一定的剂量效应关系。

医学生物化学课堂教学模式的改革与探讨

辩证认识传统教学模式,探索新的培养全面合格医学人才的教学模式。提出了目标教学是课堂教学的最基本模式,总结了目标教学模式的基本环节和操作策略,并阐述了如何在实施目标教学模式过程中运用以问题为基础的教学模式、案例教学模式和启发式教学。

胸腺肽对哮喘大鼠的调节及机制的研究

目的观察胸腺肽对哮喘大鼠Th1/Th2的调节作用,研究胸腺肽对T-bet和GATA-3表达的影响。方法将60只SPF级6~8周龄的雄性大鼠分为正常组、哮喘组、地塞米松组（0.5 mg/kg）、胸腺肽高剂量组（5 mg/kg）、胸腺肽中剂量组（2.5 mg/kg）、胸腺肽低剂量组（1.25 mg/kg）。用卵清蛋白致敏法建立大鼠哮喘模型。正常组及哮喘组腹腔注射生理盐水,其他组注射相应药物。用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组大鼠血清中IL-4、IFN-γ的含量。免疫组化法检测各组的肺组织中GATA-3和T-bet因子蛋白表达情况。结果哮喘组血清中IL-4含量比其他组浓度均高（P〈0.05）,哮喘组血清中IFN-γ含量比其他组浓度均低（P〈0.05）。哮喘组GATA-3蛋白的表达比其他组浓度均高（P〈0.05）。各组中T-bet的表达,哮喘组Fbet的表达比其他组浓度均低（P〈0.05）。结论胸腺肽通过上调T-bet和下调GATA-3实现上调IFN-γ和抑制IL-4的调节,对哮喘大鼠有治疗作用。

基于省级精品资源共享课建设的混合式教学——以《生物化学与分子生物学》课程为例

在"以学生为中心"的现代医学教育理念指导下,依托省级精品资源共享课《生物化学与分子生物学》的建设成果,开展线上线下相结合的混合式教学,以探索新的授课与学习模式。实践中初步摸索出混合式教学的一些经验,并总结其存在的不足,提出将来改进的方向。

生物化学混合式教学考核评价体系构建与实践

文章以药学生物化学课程为例,探讨了多维度过程性考核+期末终结性考试相结合的考核评价体系,构建了混合式教学考核评价体系模型及具体实践方案,旨在实现对学生学习态度、学习动机以及学习过程中的自主学习、沟通表达、团队合作、探索未知能力培养要求的全面考核,提高教学质量和人才培养质量。

胸腺肽α1对哮喘大鼠Th2/Th1平衡的调节及相关机制的研究

目的探讨胸腺肽α1对哮喘大鼠IL-25表达的影响,以及对Th2/Th1平衡的调节作用及相关机制,为哮喘的临床治疗提供实验依据。方法雄性SPF级Wistar雄性大鼠随机分为5组:正常组、哮喘模型组、地塞米松治疗组(0.5 g/kg)、胸腺肽α1治疗组(5 mg/kg),地塞米松联合胸腺肽α1治疗组(地塞米松0.25 g/kg,胸腺肽5 mg/kg),腹腔注射给药14 d,用卵清蛋白(OVA)致敏建立大鼠哮喘模型,正常组腹腔注射生理盐水做对照,ELISA检测血清及肺泡灌洗液中IL-25和IL-5的水平,Western blot检测肺组织NF-κB的表达情况,以及与IL-25表达水平的相关性分析。结果哮喘组IL-25和IL-5及NF-κB的表达水平均高于其他各组,经地塞米松、胸腺肽α1及二者联合治疗的各组与哮喘组比较均明显下降(P<0.01),血清及肺泡灌洗液IL-25和IL-5的表达水平的相关性分析,结果显示IL-25和IL-5的表达水平成高度正相关(r=0.97,r=0.93,P<0.01),IL-25与NF-κB表达水平成高度正相关(r=0.96,P<0.01),与哮喘组比较胸腺肽α1均能明显降低IL-25、IL-5和NF-κB的表达水平(P<0.01)。结论胸腺肽α1均能通过能够抑制IL-25及IL-5的表达,这种抑制作用可能与NF-κB表达密切相关。

五味子粗多糖提取物对大鼠肝纤维化的防治作用研究

目的:研究五味子粗多糖提取物对复合病因诱导的大鼠肝纤维化的防治作用。方法:实验分为6组,即正常对照(生理盐水)、模型(生理盐水)、秋水仙碱(0.1mg·kg-1)和五味子粗多糖提取物高、中、低剂量(400、200、100mg·kg-1)组。腹腔注射CCl4复制大鼠肝纤维化模型;灌胃给药。检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性,肝匀浆丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(HOP)的含量以及超氧化物岐化酶(SOD)的活性;形态学上观察肝组织病理学变化,用细胞图像分析系统(CIAS)对肝纤维化进行半定量。结果:与正常对照组比较,Massion染色显示模型组肝纤维化明显,有大量胶原纤维存在,肝小叶结构紊乱,血清ALT和AST显著升高,肝中MDA和HOP含量显著升高,SOD活性显著下降(P<0.01)。与模型组比较,各用药组大鼠血清ALT和AST显著降低;肝中MDA含量下降,SOD活性升高,具有显著性差异(P<0.01),并呈剂量依赖效应;肝HOP含量及胶原面积百分比显著下降(P<0.01)。结论:五味子多糖可减轻肝损害、肝脂质过氧化和肝纤维化的作用。

氟对猪甲状腺原代培养细胞甲状腺过氧化物酶活性及mRNA表达的影响

目的探讨氟对猪甲状腺原代培养细胞甲状腺过氧化物酶（TPO）活性及mRNA表达的影响。方法用原代培养的猪甲状腺细胞，按氟化钠（NaF）剂量不同分为：0（对照）、40、80、160mg／L组。甲状腺细胞培养48h后，采用吖啶橙染色观察甲状腺细胞形态学改变，改良愈创木酚法检测TPO活性，RT-PCR法测定TPOmRNA的表达水平。结果培养48h后，80、160mg／L组吖啶橙染色可见凋亡小体及大量漂浮细胞、碎片。0、40、80、160mg／L组TPO活性[（3．103±0．090）、（1．944±0．025）、（1．361±0．008）、（0．668±0．026）U／L]随着染氟剂量的升高而明显降低，组间比较差异有统计学意义（F=1563．864，P〈0．05），TPO活性与染氟剂量呈负相关（r=-0．955，P〈0．05）。4组TPO mRNA表达水平（0．947±0．013、0．634±0．018、0．448±0．028、0．210±0．009）也随着染氟剂量的升高而明显降低，组间比较差异有统计学意义（F=2713．855，P〈0．05）。结论氟可能是通过抑制TPO活性及TPO mRNA的表达来影响甲状腺功能。

氟对原代培养猪甲状腺细胞功能的影响

目的探讨氟对原代培养甲状腺细胞功能的影响。方法用猪甲状腺细胞，采用原代培养方法，按染氟（NaF）剂量不同分为：0（对照组）、40、80、160mg／L组。染氟48h后，采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞存活率，改良愈创木酚法测定甲状腺过氧化物酶（TPO）活性，放射免疫法测定甲状腺素（T4）水平。结果甲状腺细胞培养48h后，细胞贴壁，多呈六边形，呈聚集性趋势生长，并可见典型的滤泡结构。甲状腺细胞染氟培养48h后，细胞存活率组间比较差异有统计学意义（F=1．49．092，P〈0．05）；40mg／L组细胞存活率为（96．04±2．08）％，与对照组（100％）比较，差异无统计学意义（t=2．157，P〉0．05）；80、160mg/L组细胞存活率分别为（86．59±1．79）％、（70．12±1．49）％，与对照组比较，差异有统计学意义（f值分别为7．621、17．697，P〈0．05）。甲状腺细胞T4水平随着染氟剂量的升高而明显降低[（44．940±8．212）、（31．442±4．384）、（22．742±4．504）、（15．193±1．633）nmol／L]，组间比较差异有统计学意义（F=978．255，P〈0．05）。甲状腺细胞TPO活性也随着染氟剂量的升高而明显降低[（3．103±0．090）、（1．944±0．025）、（1．361±0．008）、（0．668±0．026）U／L]，组间比较差异有统计学意义（F=1563．864，P〈0．05）。TPO活性与染氟剂量呈负相关（r=-0．955，P〈0．05）。结论氟可通过降低T4水平而影响甲状腺功能，其发生机制可能是通过诱导细胞凋亡，降低细胞存活率和抑制TPO活性有关。

生物化学与分子生物学课程网络教学平台的应用研究

目的 探讨生物化学与分子生物学课程网络教学平台的应用效果.方法 选取锦州医科大学2015级临床医学专业66名本科生为研究对象,通过随机平均的方式将学生分为实验组和对照组,实验组使用网络教学平台进行教学,对照组采用传统教学方法进行教学,通过期末考核及问卷调查等方式,比较和分析2种不同教学方法的教学效果.结果 通过对两组学生期末考核成绩的比较发现,实验组学生对基本理论知识的掌握程度和对实验操作技能的运用明显优于对照组,另外实验组学生还体会到网络平台还具有充分调动学生的学习积极性、有效改善学习方法和师生交互效率提升等三大优势.结论 在生物化学与分子生物学课程教学中应用网络教学平台,可以充分调动学生的学习积极性,提高学生自主学习能力和学习成绩,切实提高了课程的教学质量.