家蝇幼虫抗菌肽Defensins基因的克隆与序列分析

目的克隆家蝇幼虫的抗菌肽defensins基因并对其进行序列分析。方法提取家蝇幼虫总RNA,根据家蝇成虫defensins基因cDNA序列设计一对引物,RT-PCR扩增目的基因片段,T-A克隆后测序,应用相关生物信息学软件对该序列进行分析。结果RT-PCR扩增出一条约310bp的目的片段,序列分析表明,其与家蝇成虫防御素基因同源性高达97%,核酸序列变异主要发生在信号肽区域。结论成功克隆及分析了家蝇幼虫防御素基因全长编码区cDNA序列,为其下一步的重组表达和生物活性研究奠定了基础。

家蝇幼虫Defensin成熟蛋白序列的克隆及在原核中的表达

目的 克隆家蝇幼虫defensin成熟蛋白编码序列并在大肠杆菌中表迭,为进一步的研究该基因的功能奠定基础。 方法 以家蝇幼虫cDNA文库为模板扩增出defensin基因的成熟蛋白全长编码序列,构建重组原核表达载体pGEX／MDEF,转化的克隆(质粒)通过筛选并测序鉴定。重组的pGEX／MDEF在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,SDS-PAGE鉴定其表达情况和分子质量并用抗鼠GST单抗作western blot杂交进一步鉴定融合蛋白的表达。 结果 以家蝇幼虫cDNA文库扩增出一条长约为140bp的cDNA片段,经测序证实其为defensin基因成熟蛋白的编码序列,它编码含40个氨基酸的蛋白质,预测其分子质量单位为4kD。被成功克隆入pGEX-4T-1载体的家蝇幼虫defensin基因的cD-NA,在重组大肠杆菌BL21(DE3)中诱导可大量生成相对分子质量30KD融合蛋白。 结论 成功构建了家蝇幼虫de-fensin基因原核表达载体,且其成熟蛋白的编码序列在大肠杆菌高效表达。为下一步表达蛋白纯化,以及研究其生物活性提供了材料。

防御素的研究及应用

防御素是一组小分子阳离子抗菌活性肽,富含精氨酸和二硫键,广泛分布于动物、植物和昆虫体内。由于具有广谱抗微生物的特性,防御素在医药、食品和植物转基因工程上将发挥重要作用。文章对不同来源防御素的分子特征、抗菌机制以及应用前景进行综述。

《寄生虫学与检验》实验课教学改革的探索

《寄生虫学及检验》是一门实践性和应用性非常强的学科,实验课是其主要组成部分。为了培养学生独立工作能力,本文结合教学实践,对《寄生虫学及检验》实验课教学改革进行了探索。主要通过调整教学内容,强化实验教学;分阶段实施教学,循序渐进提高学生实验技能;利用多媒体和网络资源,丰富教学内容等措施,提高了教学效果。

苦艾对伯氏疟原虫的抗疟实验研究

目的观察苦艾对感染伯氏疟原虫小鼠的疗效。方法按“四天抑制法”的d0感染,d0～d3给药,每天1次,d4涂薄血膜检查,并计算每天存活率及d4减虫率。结果不同浓度苦艾组疟鼠累积生存率与对照组比较,0.30g/ml组与0.45g/ml组差异有统计学意义(P<0.05);苦艾(0.30g/ml和0.45g/ml)组的d4减虫率与对照组相比差异有显著性;苦艾(0.15g/ml)组的d4减虫率与对照组相比差异无显著性。结论苦艾(0.30g/ml与0.45g/ml)能较好抑制伯氏疟原虫的生长,对小鼠的存活状况有改善作用。

家蝇Defensin基因原核表达条件的优化及其抑菌活性

目的优化家蝇Defensin基因原核表达条件,并初步研究其抑菌活性。方法 Defensin基因成熟肽被克隆入pGEX-4T-1原核表达载体中,构建重组质粒pGEX-4T-1/Defensin,并转化宿主菌后诱导表达,表达过程中对菌液起始浓度、IPTG浓度、诱导温度和时间进行优化。采用亲和层析法分离纯化融合蛋白,SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达情况和分子量。用凝血酶切除谷胱甘肽标签,并通过体外抑菌实验检测其抗菌活性。结果成功构建重组质粒pGEX-4T-1/Defensin,目的基因能够在大肠埃希菌内高效表达,分子量为4 kD,与预期值一致,表达量约达40%。抑菌实验显示其对大肠埃希菌K12D31生长有一定的抑制作用。结论本实验为家蝇Defensin基因功能的深入研究奠定了工作基础。

棘阿米巴角膜炎患者分离株在不同环境中的形态观察

目的观察棘阿米巴的形态学特点,为探讨棘阿米巴感染的诊断提供依据。方法以棘阿米巴角膜炎患者的送检材料为实验材料,置入不同条件中培养,观察其在不同的p H值（2、4、6、8、10）、温度（20、25、30、35℃）和加大肠埃希菌的条件下对棘阿米巴形态和活力的影响。结果棘阿米巴在不同的条件下形态呈多样性,酸性环境中以滋养体为主,而在碱性环境易形成包囊。p H=6,温度为25~30℃和加有大肠埃希菌的培养条件时,适合棘阿米巴生长,其中大部分的虫体为活动滋养体,并进行大量的繁殖。结论棘阿米巴在不同条件中存在滋养体和包囊转化过程,这为进一步研究其诊断及致病机制奠定了基础。

试论图式理论与英语阅读教学

英语阅读教学不仅包括语言图式教学而且包括内容图式教学。本文阐释了图式理论的基本原理,分析了学生不能理解阅读材料的原因。因此,教师应在阅读教学过程中调动学生已有的图式知识创建新的图式知识,使图式知识相互作用,以提高英语阅读教学质量。

新医改背景下如何有效进行医院办公室管理

深入推进的新医改对医院管理工作提出了越来越高的要求,要求医院办公室管理工作积极创新,以应对新医改的挑战。笔者结合自身工作实践,就当前医院办公室管理存在的问题进行了简要论述,重点探讨了如何有效开展医院办公室管理工作,旨在提高办公室管理效率,促进医院稳定、持续发展。

论翻译中语境的制约功能

语境是语际翻译中的一个重要的制约因素,它不仅制约着翻译的理解过程,还制约着语义、话语结构线索与内部信息以及语言的使用与选择等翻译全过程。

医院行政管理人员及行政管理工作中的问题与对策

本文对于目前在开展行政管理工作的过程中产生的问题进行分析,并提出合理的解决措施。

家蝇幼虫天蚕素基因的克隆与序列分析

目的 对家蝇幼虫天蚕素基因进行克隆和序列分析。 方法 根据Genbank公布的家蝇成虫天蚕素Ce cropin基因序列设计一对引物 ,以家蝇幼虫cDNA文库液为模板 ,PCR扩增该基因的编码区序列。 结果 家蝇幼虫天蚕素cDNA目的基因的长度为 2 2 9bp ,与成虫防御素基因一致性为 96% ;最大的ORF位于 2 0bp～ 2 11bp ,含 192bp ,编码 63个氨基酸。 结论 初步预测了该基因编码蛋白的化学性质和二级结构 ,为该基因的重组表达研究打下基础。

家蝇幼虫抗菌肽天蚕素基因的克隆及其在大肠杆菌中融合表达(英文)

目的从家蝇三龄幼虫中提取总RNA,先利用RT-PCR扩增编码天蚕素Cecropin的cDNA序列,克隆入T载体pUCm-T并测定其序列。然后以pUCm-T/Cecropin为模板,通过PCR方法扩增Cecropin成熟肽cDNA序列,并将该序列的N-端大肠杆菌稀有密码子GGA点突变为GGC,C-端终止密码子TAA前加进一个天冬酰胺(Asn)密码子AAC,命名为mCecropin。mCecropin基因序列克隆至融合表达载体pGEX-4T-1中。酶切分析和测序鉴定后,将阳性重组子质粒转入不同的大肠杆菌宿主细胞中进行融合表达。经SDS-PAGE分析,选用E.coliBL21(DE3)作为表达宿主菌。表达的融合蛋白GST-mCecropin通过GSTrap亲合柱纯化后用凝血酶酶切GST标签,mCecropin经HiTrap柱进一步纯化后,具有较强的抗菌活性。

家蝇抗菌肽Cecropin-His_6融合基因的克隆、序列分析及其表达载体构建

克隆家蝇幼虫抗菌肽Cecropin -His 6融合基因 ,构建其真核表达载体 ,为更深入的抗菌肽活性研究及制备新型肽类抗生素创造条件。该文从家蝇幼虫组织中提取总RNA ,RT -PCR扩增编码Cecropin开放阅读框cDNA序列 ,将其克隆至pUCm -T载体进行序列测定 ;然后用含 6×His标签序列的下游引物克隆Cecropin -His 6融合基因 ,并将其构建于真核表达载体pcDNA3.1(+)中 ;同时应用生物信息学对融合基因的理化性质和二级结构进行预测分析。结果表明 ,RT -PCR扩增得到约 2 30bp的目的cDNA片段 ,与Genebank中报道的家蝇CecropincDNA序列存在一个无义变异差异 (Lys:AAG→AAA) ;6×His标签成功融合到Cecropin的C端。Cecropin -His 6融合基因的克隆和真核表达载体的成功构建 ,为进一步制备抗耐药菌的肽类抗生素奠定了基础。

英语词汇教学浅论

词汇教学历来是英语教学的重要内容。英语词汇教学不但要强调记忆,更主要的是培养学生的词汇运用能力。教学中应遵循词单位教学和句单位教学相结合、词的音、形、义相结合以及正确处理积极词汇和消极词汇的关系等原则,通过借助语境、借助练习、借助同义词或反义词等方法进行教学,强化语感训练,以提高学生掌握、运用词汇的能力。

多聚组氨酸标签的Attacin抗菌肽基因克隆及其在CHO细胞中稳定表达

目的克隆家蝇幼虫抗菌肽Attacin-His_6融合基因,构建真核表达载体并转染CHO细胞表达,为深入研究其生物学活性创造条件。方法以pUCm-T/Attacin载体为模板,用含6×His标签序列的下游引物克隆Attacin-His_6融合基因,并将其构建于pcDNA3.1(+)中,pcDNA3.1/Attacin-His_6重组质粒转染CHO细胞,ZeocinG418筛选阳性细胞株,RT-PCR检测重组质粒在CHO细胞的转录情况。结果成功扩增出Attacin-His_6融合基因,构建了pcDNA3.1/Attacin-His_6重组质粒并转染入CHO细胞中,RT-PCR从阳性克隆的CHO细胞中扩增出预期大小的目的片段,从转录水平证实CHO-Attacin-His_6重组细胞株表达了Attacin-His_6基因。结论抗菌肽Attacin基因哺乳动物型工程细胞表达系统的建立,为进一步制备其肽类抗生素奠定了基础。

浅析英语词的比喻用法及作用

比喻是世界各民族语言中应用最为广泛的一种修辞方法，它主要用于揭示事物的特征，使语言形象、具体生动。增强语言的感染力，启发读（听）者丰富的联想。本文通过对英语词的比喻用法及作用进行分析讨论，旨在使读者今后在说话或写文章时能更好地、正确地运用这些词的比喻用法。

抗菌肽Cecropin-His-6基因的真核表达及其生物活性研究

目的研究家蝇幼虫Cecropin-His-6抗菌肽基因生物学功能。方法从家蝇幼虫体内扩增Cecropin-His-6抗菌肽基因,构建pcDNA3.1/Cecropin-His-6重组表达质粒并用脂质体转染CHO细胞中,G418筛选,HisTrapHP亲和层析柱纯化目的蛋白,琼脂糖平板抑菌试验检测目的蛋白的抗菌活性。结果pcDNA3.1/Cecropin-His-6重组质粒成功转染入CHO细胞中,并获得具有抗菌活性的Cecropin-His-6目的蛋白。结论家蝇幼虫抗菌肽哺乳动物型工程细胞表达系统的建立,为进一步制备抗耐药菌的肽类抗生素奠定了基础。

Attacin抗菌肽基因体内抗菌活性研究

目的建立Attacin基因体内抗菌活性检测系统,并初步研究其抗菌活性。方法PCR扩增Attacin编码区目的序列,并构建原核表达重组质粒,转化大肠埃希菌,在体内检测Attacin的抗菌活性,同时SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况。结果与未诱导对照相比,包含重组质粒的宿主菌生长受到抑制,含pET30a(+)/Attacin宿主菌诱导表达后,提纯不到His-Attacin融合蛋白,而含pGEX-4T-1/Attacin宿主菌可获得GST-Attacin融合蛋白。结论建立灵敏、简便的Attacin体内抗菌活性检测方法,为下一步研究Attacin的生物学功能及其应用开发奠定基础。

初中生两种不同心肺复苏技能培训模式的效果比较

目的探讨初中生心肺复苏(CPR)技能培训模式。方法选取浙江省玉环县4所初级中学225名学生作为研究对象,分为常规组102名学生和实验组123名学生。常规组采用常用的"培训者-民众"的普及方法,实验组与学校合作开展生存教育课堂,先由课题组对老师进行培训,再对学生按课程设置进行培训,学生掌握后进行考核,学校开设第二课堂专门教CPR,第二学期再进行复训。比较两种培训模式的效果。结果实验组学生掌握CPR的知晓率高于常规组(<0.05);且第二学期CPR技能掌握高于常规组(<0.05)。结论对初中生采取"培训-考核-复训"模式明显优于"培训者-民众"的普及方法。