青海湖裸鲤线粒体DNA多态性研究

采用PstⅠ、pvuⅡ、HindⅢ、EcoRⅠ 4种限制性内切酶 ,研究了 2 0尾青海湖裸鲤线粒体DNA的限制性片段长度多态性。共检测出 11个酶切位点 。

培育中的青海白猪染色体核型分析

采用外周血淋巴细胞培养方法和常规染色体制备分析技术 ,分析了青海白猪的染色体核型。结果表明 :青海白猪染色体数目为 2n=38条 ,染色体臂数NF为 32 ,公猪染色体核型式为 38,XY ;母猪染色体核型式为 38,XX。核型模式 :2n =♂ /♀ 3838(1 2M +8SM +4ST +1 2T) XY(M ,M)XX(M ,M)

“天王饮”对公兔生殖机能的影响

应用5ml、2.5ml和1.7ml剂量的“天王饮”灌服20只公兔,为期30d.结果表明,实验组睾丸实质重极显著高于对照组(4.65±1.38g,3.41±0.90gVS.P<0.01);实验组血浆睾酮水平极显著高于对照组(7.38±7.02μg/L,1.01±0.3μg/l.VS.P<0.01).说明“天王饮”能提高动物的性激素水平并促进性腺发育.

青海湖裸鲤血液指标的测定

采用常规法对青海湖裸鲤 10项血液指标进行了测定。结果 :RBC ,1.2 8± 0 .2 7× 10 1 2 L ;WBC ,31.99± 3.41×10 9 L ;Hb ,71.8± 11.4g L ;血清指标 :总蛋白 5 2 .92± 8.74g L ,总脂 9.77± 2 .30g L ,胆固醇 5 .97± 2 .0 6mmol L ,血糖 10 .0 9±3.5 6mmol L ,无机磷 3.17± 0 .6 5mmol L ,Mg++0 .74± 0 .2 1mmol L ,Ca++2 .84± 0 .18mmol L。

青海本地山羊血清乳酸脱氢酶活性及其同功酶的研究

采用 2 ,4-二硝基苯肼比色法和聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)法对青海本地山羊的血清乳酸脱氢酶 (LDH)活性及其同功酶酶谱进行了研究。结果 :①青海本地山羊血清LDH活性为( 1 1 3 2± 2 9 1 )U L ,且公、母山羊间无显著性差异 ;②被检山羊均呈单态 ,电泳显现出 5条LDH同功酶酶谱 ,经生物图像处理系统扫描定量其百分含量的排列顺序为 :LDH1>LDH3 >LDH2 >LDH4>LDH5,M亚基与H亚基之比 (M H)为 39% ,且公、母山羊之间相似。

青海地区藏犬染色体核型分析

采用外周血淋巴细胞培养法和常规染色体分析技术,对青海省藏犬的染色体核型进行了分析。结果表明:藏犬体细胞染色体数目为2n=78,NF=80,按形态可分为39对,除性染色体X和Y为中着丝粒(M)染色体外,其它38对常染色体均为端着丝粒(T)染色体。

应用噻唑蓝法初步研究兔外周血单个核细胞转化的条件

应用噻唑蓝法研究了ＰＨＡ－Ｐ引起兔外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）转化的最适条件，培养时间为４８ｈ，ＰＢＭＣ密度为５×１０１２／Ｌ，ＰＨＡ－Ｐ的终浓度为０．５ｍｇ％。并测定了在此最适条件下的吸光值（ＯＤ），为０．２７６±０．１４２。

牦牛瘤胃内几项指标的测定

反争兽的瘤胃有多种微生物(包括细菌和纤毛虫)。内外环境的变化会迅速影响瘤胃内复杂的生物发酵过程,瘤胃内环境也随之发生变化。为此,我们在91年11月对由青海牧区长途运输到西宁后停食(不停水)三天的35只牦牛瘤胃内环境pH值。

阻断α-AR加速兔胰岛素低血糖休克的研究

用酚妥拉明阻断兔的 α- AR后 ,4 h内使胰岛素低血糖休克率从 6 0 %增加到 85 .7% (P<0 .0 5 )。结果证明阻断 α- AR可加速兔的胰岛素低血糖休克的出现。说明在低血糖下 ,兔的 α-

青海湖裸鲤生物学特性的研究

通过对青海湖裸鲤种内性状变异、食性、成熟系数、繁殖力等生物学特性的研究 ,为进一步增殖裸鲤提供了理论依据。

长白与青海八眉“二元杂交”猪种群PERV亚型分析

目的研究长白与青海八眉"二元杂交"猪种群携带的内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)亚型,为评价从猪到人异种移植的生物安全性提供依据。方法从长白与青海八眉"二元杂交"猪种群中随机采集33头个体外周血,应用PCR和RT-PCR技术分别检测PERV前病毒DNA和mRNA,研究该种群携带PERV的亚型,并对PCR扩增的灵敏性进行评估。克隆测序该猪种PERVenv基因,结果用NCBI中的BLAST软件进行分析。结果所检测的33头个体均带有PERV前病毒DNA,外周血中均有PERV mRNA表达,其中,69.7%(23/33)个体携带env-A,env-B和env-C三种囊膜蛋白基因,而其余的30.3%(10/33)个体只带有env-A和env-B两种囊膜蛋白基因,env-C基因缺失。灵敏性分析实验结果表明,PCR扩增PERV时,DNA模板不能少于15ng。克隆env-A,env-B和env-C基因,结果提交GenBank(GenBank登录号分别为DQ856326、DQ856327、DQ856328)。生物信息分析结果表明,该猪种env基因与GenBank登录其他猪种序列相比存在差异,其中env-A、env-B基因发生移码突变,蛋白合成提前终止。结论长白与青海八眉"二元杂交"猪种群携带PERV,69.7%个体为PERV-ABC亚型;缺失突变使PERVenv-A,env-B基因阅读框发生改变,有可能影响其感染特性,从生物安全性方面综合考虑,该猪种不宜作为异种移植供体。

成熟液中不同添加物对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

试验研究了在成熟液中分别添加0.1%PVA、10%FBS和不同浓度的EGF(20、30、40、50 ng·mL-1)对猪卵母细胞体外成熟的影响,以确立猪卵母细胞体外成熟的最佳条件。结果表明,在成熟液中添加0.1%PVA和10%FBS后,对猪卵母细胞的成熟率影响无显著差异(P>0.05),对猪卵母细胞孤雌激活后36 h的卵裂率和第6天的桑葚胚率无显著差异(P>0.05);添加不同浓度的EGF对猪卵母细胞体外成熟率无显著差异(P>0.05);但是添加30和40 ng·mL-1 EGF组在36 h的卵裂率要极显著地高于添加20和50ng·mL-1 EGF的两组(P<0.01);而分别添加30、40和50 ng·mL-1 EGF 3组处理在第6天的桑葚胚率无显著差异,且极显著地高于添加20 ng·mL-1 EGF组的(P<0.01)。所以,在成熟液中添加0.1%PVA可以替代10%FBS,尤以添加30 ng·mL-1 EGF组对猪卵母细胞的体外成熟效果较好。

创建《动物生理学》校级精品课程的改革与探索

通过以创建校级精品课程为目标,以学生成才为宗旨,坚持教学研究与改革的一系列做法,围绕精品课程建设进行探索,从而取得了较好的教学效果。

藏系绵羊瘤胃内环境几项指标的测定

观测了青海省互助县61只藏系绵羊瘤胃液的颜色、气味、粘稠度、沉渣比、纤维素消化、气体发酵强度,以及纤毛虫活率、纤毛虫分类、纤毛虫计数。观测结果表明,青海藏系绵羊瘤胃内环境的某些理化指标稍不同于水牛、黄牛、奶山羊。其瘤胃内纤毛虫的活动性主要与温度、pH值以及纤毛虫种属等有关。

不同外源性激素对乏情母牦牛处理效果的研究

选择420头体况维持在2.0 ～3.0的当年产犊乏情母牦牛分3个组,用3种不同的方法进行诱导发情处理.第1组：注射GnRH-PG-GnRH;第2组：注射GnRH-PG-E2;第3组：注射PG-GnRH.结果表明：第1组、第2组和第3组经不同的处理后,发情率分别为70.00％ （98/140）、54.29％ （76/140）、52.14％（73/140）,受胎率分别为48.57％ （68/140）、34.28％（48/140）、21.43％ （30/140）.第1组发情率分别显著高于其它2个组（P＜0.05）;采用GnRH-PG-GnRH处理方案,通过三年扩大试验,发现牦牛平均发情率在66.67％（72/108）以上,受胎率在44.44％（48/108）以上.

猪孤雌胚胎体外序贯培养

试验旨在探索不同培养体系和不同序贯培养法对猪孤雌胚胎体外发育的影响。采用普通培养和序贯培养2种培养方法进行猪卵母细胞的体外培养。结果表明,孤雌激活卵母细胞在NCSU23+0.4%BSA中分裂效果较好,而mTCM199+0.1%PVA则更有利于孤雌胚胎突破4细胞阻滞达到桑葚胚。在4种序贯培养中,NCSU23(0.4%BSA)+mTCM199(0.1%PVA)一组更适合于猪孤雌胚胎的体外培养。

阻断不同AR加速胰岛素低血糖休克的研究

在兔、小鼠、豚鼠、鸡 4种动物上分别阻断不同AR后进行了加速胰岛素低血糖休克的研究。结果发现 :在兔上阻断α、β、β1 、β2 -AR均能加速胰岛素低血糖休克 ,休克率从 60 %分别增加到 85 7%、1 0 0 %、95 %和 90 % (P <0 0 0 5、0 0 0 5、0 0 0 5和 0 0 2 5 ) ;潜伏期从 1 31 4± 45 4(min ,下同 ) ,缩短为 1 1 6 1± 44 6;74 8± 2 9 3;86 2± 2 0 3;1 0 0 8± 2 1 5 (P >0 0 5和P <0 0 0 1、0 0 0 1、0 0 2 5 )。在小鼠上阻断α和β1 -AR可加速胰岛素低血糖休克 ,休克率从 47 3%增加到 78%和74% (均P <0 0 0 5 ) ;潜伏期从 1 64 8± 31 9缩短为 1 34 0± 45 6和 1 43 8± 45 6(P <0 0 0 5和0 0 2 5 ) ;而阻断β和 β2 -AR后反而延缓休克的发生 ,休克率下降到 3 4%和 1 5 9% (均P <0 0 0 5 ) ;潜伏期无显著变化。在豚鼠上阻断β -AR可加速胰岛素低血糖休克 ,休克率从 73 3%增加到 95 7% (P <0 0 5 ) ;潜伏期从 1 65 1± 47 6缩短为 1 1 8 3± 33 7(P <0 0 0 5 ) ;而阻断α -AR对休克率和潜伏期无显著影响 (P >0 2 5和 0 5 )。在鸡上阻断β -AR可加速胰岛素低血糖休克 ,休克率从 9 2 %增加到 1 0 0 % (P <0 0 0 5 ) ,潜伏期从 1 83 5± 1 0 9 6缩短为 90 9± 31

亮甲酚蓝对猪卵母细胞体外成熟及核移植胚胎发育能力的影响

试验旨在研究亮甲酚蓝(brilliant cresyl blue,BCB)染色对卵母细胞体外成熟及后期胚胎发育潜力的影响。本研究利用13、26、39、52μmol/L BCB对成熟培养前的卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte-complexes,COCs)染色90min,比较各组卵母细胞的着色率、成熟率及孤雌激活胚胎和核移植胚胎的发育情况。结果表明,随着BCB浓度的增加,COCs着色率依次增加(20.00%、46.39%、51.66%和59.03%),但猪卵母细胞体外成熟率逐渐降低(74.03%、72.16%、70.53%和48.61%);不同浓度BCB染色后所得BCB+组卵的成熟率均明显高于BCB-组。试验结果发现,BCB浓度在26μmol/L时,经染色的COCs既有较高的着色率,且不影响其体外成熟的效率。基于此,研究选取26μmol/L BCB作为最佳浓度对猪卵母细胞进行染色筛选,然后进行体外培养、孤雌激活及核移植试验。结果显示,筛选的BCB+组卵母细胞的孤雌胚和核移植胚的卵裂率和囊胚率均显著高于BCB-组(P<0.05),而与对照组间无显著差异(P>0.05)。胚胎移植试验挑选BCB+组中发育较好的1-2细胞期重组胚对5头代孕母猪进行了移植,其中2头怀孕,1头顺利产下了6头健康胎儿。综合以上试验结果表明,利用BCB染色可作为一种有效的方法筛选体外成熟质量较高的猪卵母细胞,同时提高胚胎体外生产效率。

猪去核无透明带卵母细胞电融合参数的探讨

试验通过采用不同场强、电场时程和脉冲次数对去核的猪体外成熟卵母细胞电融合参数进行比较研究,观察细胞融合情况。结果表明,在电场时程30μs、1次直流脉冲(DC)的情况下,电场强度0.8kV/cm时卵母细胞的融合率为94.7%,显著高于其他各组(P<0.05);当电场强度为0.8kV/cm、1次直流脉冲的情况下,电场时程60和90μs时,卵母细胞融合率为86.5%和83.8%,差异不显著(P>0.05),但显著低于30μs时的电融合效率(P<0.05);在电场强度为0.8kV/cm,电场时程为30μs的情况下,1次电脉冲激活卵母细胞的融合率(94.7%)和2次电脉冲的融合率(95.6%)无显著差异(P>0.05),但两者显著高于3次电脉冲的融合率(81.7%)(P<0.05)。通过对各组进行比较,在电场强度为0.8kV/cm、电场时程为30μs、1次直流脉冲的电刺激可以对体外成熟的猪卵母细胞取得较好的融合效果。