发酵罗汉果渣对黄羽肉鸡肠道形态和菌群的影响

本文旨在研究发酵罗汉果渣对黄羽肉鸡肠道形态和菌群的影响。选用1日龄健康的黄羽肉鸡360羽,随机分为4个组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ),每组6个重复,每重复15羽。对照组(Ⅰ组)饲喂基础饲粮,Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组于1~21日龄分别饲喂在基础饲粮中添加1%、3%和5%的发酵罗汉果渣等量替代玉米;于22~42日龄和43~70日龄分别在基础饲粮中添加5%、8%和10%的发酵罗汉果渣等量替代玉米,试验期70 d。结果显示:与Ⅰ组相比,21日龄和42日龄,Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组十二指肠、空肠、回肠的绒毛高度、隐窝深度及V/C值的差异不显著。70日龄,Ⅲ、Ⅳ组十二指肠隐窝深度分别降低36.01%(P<0.05)和33.46%(P<0.05),V/C值分别提高78.05%(P<0.05)和69.98%(P<0.05)。肠道菌群中,Ⅰ、Ⅲ组共有的OTU数目为537、特有OTU数目分别为55和7;在门水平上,核心菌门是厚壁菌门、拟杆菌门和变形菌门,其中Ⅲ组的变形菌门和肠杆菌门相对丰度显著低于Ⅰ组(P<0.05);在属水平上,Ⅲ组梭状芽孢杆菌群的相对丰度显著高于Ⅰ组(P<0.05),两组的α多样性指数和β多样性指数的差异不显著(P>0.05)。发酵罗汉果渣可改善黄羽肉鸡肠道微生态环境,促进其肠道健康。

嗜水气单胞菌Hcp蛋白的原核表达·多克隆抗体制备及生物信息学分析

[目的]获得嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,AH)Hcp蛋白的多克隆抗体(Polyclonal Antibody)及基本生物学特性。[方法]利用RT-PCR方法扩增Hcp基因,构建重组表达质粒后转化BL21感受态细胞,经IPTG(异丙基硫代半乳糖苷,Isopropylβ-D-Thiogalactoside)诱导表达获得Hcp重组蛋白,纯化后免疫家兔,制备针对该蛋白的多克隆抗体,进行抗体的效价测定、Western blotting鉴定,利用生物信息学在线工具对其基本理化性质、保守结构域、磷酸化位点、二级与三级结构进行预测。[结果]该蛋白在IPTG终浓度为0.6 mmol/L、37℃下诱导表达6 h可获得最高表达量,蛋白主要以可溶性蛋白的形式存在;Western blotting结果显示,AH的培养物上清与沉淀均能够与制备的兔抗发生特异性结合,具有良好的反应原性,制备的多克隆抗体效价达1.024×10^(6)。生物信息学分析表明,嗜水气单胞菌Hcp蛋白的分子式为C_(846)H_(1304)N_(224)O_(259)S_(8),共编码172个氨基酸,相对分子质量为19013.49 u,等电点(PL)为5.24,属于稳定蛋白;二级结构中无规则卷曲占比为51.74%,延伸链占比为25.00%,α-螺旋占比为19.19%,β-转角占比为4.07%。[结论]成功制备了Hcp蛋白的多克隆抗体,为进一步研究AH的VI型分泌系统(Type VI secretion system,T6SS)提供技术支持。

克氏原螯虾副溶血性弧菌的分离鉴定与小鼠致病性试验

为探究从广西某养殖基地收集的患病克氏原螯虾(Procambarus clarkii)分离获得的一株细菌GXBL的致病性和生物学特性,利用形态学、分子生物学及生理生化综合鉴定菌株,进行分离菌感染实验动物、组织病理实验及药敏实验。结果显示,分离株GXBL在TCBS培养基上菌落呈蓝绿色、圆形,染色镜检为短棒状或弧状的革兰氏阴性菌;生理生化鉴定结果显示,分离菌能发酵阿拉伯糖、葡萄糖、甘露醇、尿素、精氨酸和甲基红,不能发酵纤维二糖、乳糖及蔗糖;16S rRNA序列分析显示该分离菌为副溶血性弧菌;动物试验结果显示,该分离菌对小鼠有一定的致病性,造成小鼠的肝细胞大片坏死,肝板结构被破坏,肺泡壁显著增厚,血管内聚集大量红细胞,脾脏淋巴细胞明显减少;药敏结果显示,分离菌对氨苄西林、头孢哌酮、庆大霉素、四环素、多黏菌素B、复方新诺明等18种抗生素敏感,对青霉素G、甲硝唑和氟康唑3种药物耐药。本研究结果可为副溶血性弧菌引起的克氏原螯虾细菌性疾病防治提供参考依据。

猪支原体肺炎灭活疫苗的临床应用对比研究

为了评估5种市售的猪支原体肺炎(MPS)灭活疫苗的临床免疫效果,试验将规模猪场300头3日龄体重接近的仔猪随机分为5个免疫接种疫苗组[以猪肺炎支原体(Mhp)J株为疫苗株的猪支原体肺炎灭活苗A组,以P-5722-3株为疫苗株的猪支原体肺炎灭活苗B组,以P-5722-3株为疫苗株的猪支原体肺炎灭活苗C组,以SY株为疫苗株的猪支原体肺炎灭活苗D组,以NJ株为疫苗株的猪支原体肺炎灭活苗E组]和1个对照组,所有猪只于3,30,90,120,150日龄采血,175日龄解剖观察测定肺脏病变情况并进行Mhp抗原检测;测定猪群的体重、平均日增重、Mhp血清抗体水平、肺脏病变评分和肺组织Mhp阳性率,评价5种MPS灭活疫苗的临床免疫效果。结果表明:各疫苗组出栏重和平均日增重均较对照组有提高,其中3~27日龄仔猪阶段,D组平均日增重显著高于对照组(P<0.05);疫苗组较对照组肺脏病变程度减轻,降低幅度为8.3%~38.8%,其中D组降低幅度最大。各疫苗组之间Mhp阳性感染率差异不显著(P>0.05),A、C、D组猪只Mhp阳性感染率低于对照组,D组最低(为68.0%);3日龄开始,各组试验猪Mhp抗体水平呈下降趋势,至120日龄时降至最低。150日龄时,除D组Mhp抗体阳性率为0外,其他各组均出现Mhp抗体转阳的情况。说明5种疫苗对防止猪群感染Mhp或减轻症状具有不同程度的效果,其中D组MPS灭活苗(SY株)免疫效果更好,能显著提高仔猪的生长性能,减轻肺脏损伤。

全州禾花鲤鳞片下层组织的结构及全长转录组分析

为研究全州禾花鲤(Cyprinus carpio var.Quanzhounensis)皮肤组织结构和转录组差异、丰富鲤鱼皮肤转录组信息,选用建鲤(Cyprinus carpio var.Jian)和全州禾花鲤鳞片下层组织,利用透射电镜观察结构差异,发现禾花鲤与建鲤相比组织缺乏层叠排列的鸟嘌呤结晶且黑色素颗粒增多;利用牛津纳米孔(ONT)测序技术分析了转录组特征,获得高质量数据18.49Gb,识别为全长序列17182183条,检测出可变剪接(AS)事件3075个、可变多聚腺苷酸化(APA)57624个,预测新基因编码区序列15615个、长链非编码RNA(lncRNA)771个。其中,可变剪接事件中外显子跳跃、内含子保留数量在种间差异极显著(P<0.01),具有5个多聚腺苷酸化位点的转录本数量在种间差异极显著(P<0.01),表明可变剪接和多聚腺苷酸化参与性状形成相关的调控过程;共筛选出差异表达转录本841个,KEGG通路分析表明其在细胞外基质–受体相互作用、粘着斑等通路富集,GO分析发现其在细胞外隙、转录因子复合体、整合素复合物等词条显著富集,且最显著富集的KEGG通路和GO词条均与细胞外基质紧密关联,推测这些转录调控的变化可能导致皮肤细胞外基质的组成、密度和构象变化。后续研究应更多关注鸟嘌呤结晶缺失造成的皮肤性状变化,有助于全州禾花鲤种质资源开发与利用。

猪丁型冠状病毒N基因原核表达及多克隆抗体制备

旨在研究猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的抗原性,为下一步诊断试剂盒的研发提供依据。试验通过RT-PCR的方法扩增PDCoV CH/GX/1468B/2017株完整的N基因并构建原核表达质粒pET32a-N,将pET32a-N转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,经诱导表达获得重组N蛋白,纯化后经Western blot方法检测其反应原性,免疫昆明小鼠制备重组N蛋白多克隆抗体并进行效价测定(间接ELISA法)和特异性验证(间接免疫荧光法)。结果显示:重组N蛋白在IPTG终浓度为1.0 mmol/L,37℃诱导表达6 h的条件下可获得最高表达量,该重组蛋白主要以可溶性蛋白的形式表达;Western blot结果显示,纯化后的重组N蛋白可以和PDCoV阳性猪血清发生特异性结合,具有良好的反应原性。制备的多克隆抗体的效价可达1∶64000,间接免疫荧光法结果表明其能特异性识别和结合PDCoV,说明重组N蛋白具有较好免疫原性。提示:PDCoV N蛋白抗原性好,可作为诊断试剂盒的候选抗原。

比较单径测量法与体积测量法评价晚期非小细胞肺癌化疗的疗效

目的比较单径测量法与体积测量法评估晚期非小细胞肺癌化疗疗效的一致性。方法回顾性分析104例接受化疗的晚期非小细胞肺癌患者化疗前及化疗2周期后的胸部增强CT扫描图像,对每例患者选取1-2个肺内病灶作为靶病灶,测量靶病灶的轴位最大长径、与其垂直的最大短径、冠状位垂直最大径及体积,根据轴位最大长径、体积的变化率分别进行疗效评价。记录每个病灶的形态学表现。结果 104例中,共85例（85/104,81.73%）采用体积测量与单径测量的评价结果一致、二者的评价呈中度一致（Kappa值为0.520）。单径测量评价为疾病稳定（SD）的85例患者中,评价结果一致组与不一致组间治疗前后形态变化、轴位垂直短径变化率、高度变化率的差异均有统计学意义（P均〈0.05）。结论在晚期非小细胞肺癌化疗疗效评估中,单径测量法与体积测量法的评价结果一致性为中度。

JEV、PRRSV、PPV及PRV多重PCR检测方法的建立及应用

为了建立一种能快速鉴别猪日本脑炎病毒(JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的准确、高效的多重常规PCR检测方法,针对JEV、PRRSV、PPV、PRV基因保守区域合成特异性引物,优化后获得最优反应条件,对该方法特异性、敏感性、重复性进行了测定,并应用该方法对临床样品进行初步应用。结果显示,该方法对JEV、PRRSV、PPV、PRV可进行特异性扩增,对混合阳性质粒检测下限达2×10^(6)copies/μL,对猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒等相关病毒均无扩增,且重复性良好。用该方法检测51份2021年采集的广西区内组织样品,检出JEV、PRRSV、PPV、PRV阳性率分别为7.84%、50.98%、5.88%、23.53%,且存在多重混合感染的情况。所建立的多重PCR方法具有良好的特异性、敏感性及重复性,可应用于临床常见猪繁殖障碍性病毒病的快速诊断和监测预警,为猪繁殖障碍性病毒病提供了诊断技术支持。

双悬浮架磁浮列车二系悬挂参数优化研究

空气弹簧作为车辆二系悬挂的关键部件,其性能直接影响车辆的舒适度和安全性。采用一种双悬浮架模块配合悬挂中置的轻型旅游磁浮列车为研究对象,通过建立其动力学模型,对比在不同水平刚度和垂向刚度工况下的动力学性能,根据车辆的舒适度、安全性及结构要求分析空气弹簧水平刚度和垂向刚度的最优范围,并分析不同车体质心高度对空气弹簧刚度选取的影响。结果表明,随着车体质心高度的增大,所需的空气弹簧水平刚度相应增大,对垂向刚度的选取则无明显影响。

基于多对比度磁共振血管壁成像技术对前循环症状性颅内外动脉粥样硬化斑块特征的对比研究

目的基于多对比度MRI血管壁成像技术,比较颅内动脉、颅外动脉粥样硬化斑块的特征.方法回顾经3D多对比度头颈联合MRI血管壁成像检查确定存在前循环症状性颅内外动脉粥样硬化斑块的患者资料.观察斑块分布情况;测量斑块负荷,包括斑块最大管壁厚度、长度、管腔狭窄程度;分析斑块内成分,包括脂质坏死核、出血、钙化,对比分析颅内动脉和颅外动脉粥样硬化斑块的影像学特征.结果在入组的45例患者中,共检出颅内、外动脉粥样硬化斑块203个,其中颅外动脉斑块156个(76.8%),颅内动脉斑块47个(23.2%).颅外动脉粥样硬化斑块最大管壁厚度([ 3.2±1.0)mmvs (1.9±0.4)mm,P<0.001]、斑块长度[10.7(7.5~13.7)mmvs4.3(2.6~6.3)mm,P<0.001]大于颅内动脉,而颅内动脉管腔狭窄程度[28.0%(20.0%~38.5%)vs18.8%(10.8%~30.5%),P<0.001]重于颅外动脉.颅外动脉粥样硬化斑块内脂质坏死核的发生率高于颅内动脉(66.0%vs21.3%,P<0.001),而斑块内出血的发生率颅内动脉高于颅外颈动脉(27.7%vs13.5%,P=0.027).结论在合并有颅内外动脉粥样硬化斑块的患者中,颅外动脉的斑块最大管壁厚度、斑块内脂质坏死核的发生率高于颅内动脉,而管腔狭窄程度、斑块内出血的发生率低于颅内动脉.

罗非鱼耐寒性能研究进展

罗非鱼是水产养殖的重要品种,低温是限制其生长的重要因素,研究低温对罗非鱼的寒害机理及适应机制对提高其耐寒能力尤为重要。本文综述了罗非鱼耐寒性能的评估指标、方法和低温耐受性,低温对罗非鱼外部特征、行为变化、血液生理生化指标及鳃、肝、脾的影响,介绍了罗非鱼耐寒相关基因的研究进展,以期为罗非鱼耐寒性能评价和耐寒品种选育提供参考。

蛋鸡饲料黄曲霉毒素风险控制的研究进展

黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉产生的一组次生代谢产物,在动物饲料中广泛存在,是禽类饲料质量安全重点关注的风险因子。黄曲霉毒素在饲料中的污染会引起蛋鸡生产性能和蛋品质降低,并以残留的形式随食物链传递威胁人类食品安全。本文对饲料中黄曲霉毒素的毒性、生成代谢、污染现状、防控技术进行了综述,旨在为蛋鸡饲料中黄曲霉毒素的防控提供参考。

放射科影像诊断报告评核及其影响因素的分析

为了分析影响放射科住院医师影像诊断报告评核结果的相关因素,为完善住院医师培训体系和加强住院医师日常管理提供重要依据,通过回顾性分析日常工作时间段完成的放射科诊断报告,分析检查类别、报告提交时间、患者来源、撰写报告的住院医师级别与报告评核结果的相关性,结果发现,上/下午前、后半段X线平片报告评核不合格率的差异存在统计学意义,P值分别为0.023、0.004。住院医师级别、患者来源与评核结果有相关性。因此,在培训过程中,应将工作时间段和患者来源纳入考量范围,为不同级别住院医师分配不同难度的工作内容,完善螺旋上升模式的培养体系。

全州禾花鲤主要生长性状的遗传参数估计

为估计全州禾花鲤(Cyprinus carpio var.Quanzhouensis)生长性状的遗传参数,采用嵌套交配设计和人工授精法构建了23个全州禾花鲤家系,利用混合线性模型估计全州禾花鲤体质量、体长、体宽、体长/体宽、日增重的遗传力、表型相关、遗传相关及育种值。结果表明:体质量(0.45,P<0.01)、体长(0.42,P<0.01)、体宽(0.36,P<0.01)和日增重(0.39,P<0.05)为高遗传力,体长/体宽(0.12,P>0.05)为低遗传力。体质量、体宽、全长、日增重性状相互之间有较高的表型相关与遗传相关(0.76-0.99),体质量与体长/体宽、日增重与体长/体宽之间表型相关与遗传相关(0.55-0.67)较低。育种值分析显示日增重与体长、日增重与体宽、体长与体宽性状育种值之间极显著相关(P<0.01),采用育种值开展个体选择与表型值选择结果存在明显差异。全州禾花鲤选育应采用多性状综合选育策略,同时改良生长速度、体型和体色性状,从而获得优质高产禾花鲤新品种。

全州禾花鲤皮肤转录组特征分析

为探究全州禾花鲤乌褐色、半透明的经济体色性状,发掘全州禾花鲤的皮肤基因信息,以全州禾花鲤的皮肤组织为研究对象,利用高通量测序技术进行转录组比较分析。结果显示,全州禾花鲤和建鲤(对照)的皮肤组织转录组测序获得37066778~58708166条clean reads,Q30在94.96%以上,GC碱基比例在51.00%左右;发现新基因10537个,检测出单核苷酸多态性(SNP)位点1278906个、插入缺失(InDel)位点80238个。筛选显著差异基因11717个,其中上调基因5133个,下调基因6584个。GO注释到56个二级分类,显著富集的GO条目127个,主要集中在生物学过程和细胞组分;KEGG分析获得显著富集通路60个;网络分析结果显示,以代谢途径(Metabolic pathways)、p53信号通路(p53 signaling pathway)和细胞周期(Cell cycle)通路作为网络核心,与众多KEGG通路关联且相对独立。

猪肺炎支原体、猪圆环病毒2型和3型多重荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

为建立一种快速、特异的猪肺炎支原体(Mhp)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的多重荧光定量PCR鉴别检测方法,根据Mhp、PCV2和PCV3及β-actin基因保守区域序列,设计合成4对特异性引物及4种荧光基团标记的Taq Man探针。构建含有各目的基因的重组质粒标准品,筛选引物,优化反应条件,成功建立多重荧光定量PCR后评价该方法的特异性、敏感性、重复性并将该方法初步应用于临床样品检测。结果显示,该方法能同时特异性地鉴别检测Mhp、PCV2和PCV3,检测PRRSV、CSFV、PRV、JEV、PPV、PEDV、TGEV、FMDV病毒核酸无交叉反应;对Mhp、PCV2、PCV3和β-actin标准质粒的最小检出量分别为26.4、66.7、25.6、5990 copies/μL;该方法重复性好,组间和组内试验变异系数低于1.5%;用该方法检测101份临床样本,Mhp、PCV2和PCV3阳性率分别为20.8%、36.6%和33.7%。建立的多重荧光定量PCR方法能同时快速和定量检测Mhp、PCV2和PCV3,较普通PCR更敏感,实用性强,有效避免了多次检测耗时长、费用高的问题,为Mhp、PCV2和PCV3的监测和防控提供了可靠的检测技术。

中国圆田螺肌肉营养成分及消化酶活力比较分析

为探究不同生长阶段中国圆田螺(Cipangopaludina chinensis)的肌肉营养价值和消化能力,分别对中国圆田螺幼螺和成螺的肌肉一般营养成分、氨基酸含量和消化酶进行测定。营养成分结果显示,成螺粗蛋白和灰分含量高于幼螺,幼螺水分和粗脂肪含量高于成螺;氨基酸评分(AAS)和化学评分(CS)结果显示,中国圆田螺的第一限制氨基酸为蛋氨酸+半胱氨酸,成螺必需氨基酸指数(EAAI)、氨基酸总量(TAA)、必需氨基酸总量(EAA)、支链氨基酸(BCAA)、非必需氨基酸(NEAA)和呈味氨基酸(FAA)均高于幼螺。消化酶活力结果显示:在胃、肠、肝胰脏中的α-淀粉酶活力和纤维素酶活力均为幼螺高于成螺;在肠、肝胰脏中的β-淀粉酶活力均为幼螺高于成螺,而在胃组织中则成螺高于幼螺,且在成螺和幼螺组织中两种淀粉酶活力均表现为肝胰脏>胃>肠,纤维素酶活力表现为胃>肝胰脏>肠;胃蛋白酶活力在三个组织中均为成螺高于幼螺,且在成螺和幼螺组织中均表现为肠>肝胰脏>胃。结果表明,中国圆田螺成螺蛋白质营养价值比幼螺更高,在幼螺阶段可能对淀粉和纤维物质的消化能力较强,对蛋白的消化能力较弱;而在成螺生长阶段则截然相反。

鳜Follistatin基因cDNA的克隆及其胚胎发育表达分析

为探讨鳜Siniperca chuatsi卵泡抑素(Follistatin,FST)基因在胚胎发育时期的表达状况,本文采用qRT-PCR、3′RACE和5′RACE技术从鳜胚胎组织中克隆得到鳜FST基因的全长cDNA序列(GenBank登陆号:KM077175.1)为1271 bp。生物信息学分析表明,鳜FST基因编码区为960 bp,编码319个氨基酸。同时,对鳜FST氨基酸序列与其他物种的同源性以及系统进化特征进行了分析。qRT-PCT定量分析证实,FST在鳜胚胎发育早期的受精期和卵裂期开始低量表达,之后从囊胚期表达开始显著性增加,在神经胚期达到最高表达,随后FST表达保持较低表达水平。

鳜RORα基因的胚胎发育特征及饥饿 对其节律性表达影响分析

为探究鳜RORα基因的表达特征及饥饿对其节律性调控的影响,采用实时荧光定量PCR分析RORα在鳜胚胎不同发育阶段的表达,以及短期饥饿后RORα基因在鳜肌肉和肝脏中的昼夜节律表达。结果显示:RORα基因在卵裂期表达量低,囊胚早期至原肠胚早期呈现较高水平的表达,原肠胚晚期至仔鱼期表达降低;除尾芽期外,其余各阶段的表达量差异不显著。正常投喂时,鳜肌肉和肝脏中RORα基因呈现明显的昼夜节律性,均为昼高夜低的节律性振荡;而饥饿5 d后,肌肉中RORα基因昼夜节律性表达消失,而肝脏中RORα基因虽有昼夜节律性,但其中值、振荡幅度、峰值相位等影响显著(P<0.05)。实验表明:RORα基因可能对鳜胚胎的囊胚至原肠胚期起重要作用;饥饿胁迫影响RORα基因在鳜肌肉和肝脏的昼夜节律性,进而可能导致鳜的生理过程发生紊乱。

全州禾花鲤色素细胞组成、分布及色素含量观测

采用显微镜、苏木精-伊红染色观察法和酶联免疫分析法,研究全州禾花鲤Cyprinus carpio不同部位皮肤、鳞片以及背鳍色素细胞的组成、分布、形态特征及色素含量,结果显示:全州禾花鲤背部呈乌褐色,腹部呈白色半透明,鳃盖透明可见鳃丝;鳞片中的色素细胞主要包括黑色素细胞、黄色素细胞以及少数红色素细胞,与建鲤Cyprinus carpio var.Jian相比不含鸟嘌呤结晶。背部皮肤中包含黑色素细胞、黄色素细胞和红色素细胞;腹部皮肤仅含有少量的黄色素细胞和红色素细胞,无黑色素细胞。鳍条中以黑色素细胞和黄色素细胞为主。皮肤切片染色观察显示,全州禾花鲤皮肤下无虹彩细胞带,皮肤中的黑色素和叶黄素含量分别为10.10 ng/L和1.53 mg/kg,分别比建鲤高39.70%(P<0.01)和低71.29%(P<0.05)。研究结果为进一步揭示全州禾花鲤特殊体色性状形成的分子机制和良种选育提供资料。