黄颡鱼朗格汉斯细胞的鉴定及其功能基因的表达分析

为研究黄颡鱼朗格汉斯细胞的结构特点以及细菌感染对其功能相关基因表达的影响,采用免疫组化技术对黄颡鱼免疫器官中朗格汉斯细胞进行鉴定,通过透射电镜进一步观察到黄颡鱼朗格汉斯细胞的超微结构,并采用荧光定量PCR检测鲶爱德华氏菌感染后黄颡鱼免疫相关组织内朗格汉斯细胞功能相关基因IL-1β、TNF-α、IL-10和TLR-4的表达情况。结果显示,黄颡鱼头肾和脾脏中具有朗格汉斯细胞的特异性分子标记CD207蛋白,且黄颡鱼朗格汉斯细胞的结构与其他脊椎动物类似,即细胞质中大量的伯贝克颗粒围绕着中心粒呈放射状排列。在鲶爱德华氏菌感染后,朗格汉斯细胞功能相关基因IL-1β、TNF-α、IL-10和TLR-4在黄颡鱼免疫器官内的表达量显著上调。上述结果表明,黄颡鱼含有朗格汉斯细胞,并且其可能参与了机体抗鲶爱德华氏菌感染的免疫反应。

壳寡糖对克氏原螯虾消化酶活性、肠道菌群结构、血清非特异性免疫指标及抗病力的影响

本试验旨在研究饲料中添加壳寡糖(COS)对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)消化酶活性、肠道菌群结构、血清非特异性免疫指标及抗病力的影响。选用240尾初始体重为(17.39±1.20)g的克氏原螯虾,随机分为4组,每组3个重复,每个重复20尾。各组分别饲喂添加0(C0组)、200(C200组)、400(C400组)和800 mg/kg(C800组)壳寡糖的试验饲料。试验期14 d。结果表明:1)C200组和C800组的肠道淀粉酶活性显著高于C0组(P<0.05),C200组、C400组和C800组的肠道脂肪酶、胰蛋白酶活性及肝胰腺淀粉酶、脂肪酶活性均显著高于C0组(P<0.05),C200组和C400组的肝胰腺胰蛋白酶活性显著高于C0组(P<0.05)。2)C200组的Simpson指数、Chao1指数、ACE指数及Shannon指数均显著高于C0组(P<0.05)。与C0组相比,C200组、C400组和C800组的肠道中变形菌门(Proteobacteria)的相对丰度均有所下降,厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和软壁菌门(Tenericutes)的相对丰度均有所上升;各组肠道中相对丰度较高且共有的菌属有红细菌属(Rhodobacter)、乳球菌属(Lactococcus)、希瓦氏菌属(Shewanella)和拟杆菌属(Bacteroides)。3)C400组和C800组的血清碱性磷酸酶(AKP)活性显著高于C0组(P<0.05),C400组的血清酸性磷酸酶(ACP)活性显著高于C0组(P<0.05),C200组、C400组和C800组的血清过氧化氢酶(CAT)活性均显著低于C0组(P<0.05)。4)白斑综合征病毒(WSSV)攻毒第7天,克氏原螯虾的累积死亡率随着饲料中壳寡糖添加水平的增加而下降。其中,C400组和C800组的累积死亡率相较于C0组分别降低了42.10%和57.89%。由此可见,在饲料中添加适量的壳寡糖可以提高克氏原螯虾消化酶活性,改善肠道菌群结构,并提高抗WSSV感染的能力。

不同温度下恩诺沙星在克氏原螯虾体内的药代动力学

在18℃和25℃2种温度下,对克氏原螯虾注射剂量为20μg/kg的恩诺沙星药液,分析恩诺沙星和环丙沙星在克氏原螯虾体内的药物动力学特征和残留规律。结果显示,恩诺沙星及环丙沙星在血淋巴、肌肉、肝胰腺中回收率80%~110%,检测值日内变异系数均小于5%,日间变异系数均小于6%,检测限均在0.01μg/mL(μg/g)以下。18℃时恩诺沙星在克氏原螯虾血淋巴、肌肉、肝胰腺中的T max分别为0.0830、0.3447、1.9335 h,25℃时恩诺沙星在克氏原螯虾血淋巴、肌肉、肝胰腺中的T max分别为0.0830、0.2634、1.1658 h,温度提高加快了克氏原螯虾中恩诺沙星的吸收。消除半衰期T 1/2β大小顺序为肝胰腺(55.7403 h)>肌肉(52.7437 h)>血浆(18.6087 h)。以恩诺沙星和环丙沙星作为残留标志物,25℃时恩诺沙星在肝胰腺的消除期为311.47 h,18℃时恩诺沙星在肝胰腺的消除期为417.77 h,根据本试验结果,以国家标准0.2μg/g为残留标准,建议恩诺沙星休药期为325(℃·d)。

不同性别和生长阶段对克氏原螯虾肠道菌群多样性的影响

为研究性别和生长阶段对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)肠道菌群的影响,实验对来自虾塘的雌雄成虾肠道样品及来自实验室养殖的幼虾和成虾的肠道样品进行了16S rRNA高通量测序分析。结果表明,不同性别间克氏原螯虾肠道菌群的多样性和功能均没有显著性差异(独立样本t检验:P>0.05),其优势菌群在门水平上均包括厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes)等;属水平上包括拟杆菌属(Bacteroidia)、希瓦氏菌属(Shewanella)、梭菌属(Clostridium)和柠檬酸杆菌属(Citrobacter)等;但各优势菌群在个体间的丰度差异较大,且在成虾阶段趋于保守,属肠道常驻菌群。幼虾肠道菌群的Alpha多样性显著高于成虾(独立样本t检验:P<0.05)。在门水平上,优势菌群较为一致,包括变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门和放线菌门(Actinobacteria)。成虾厚壁菌门与拟杆菌门的比例高于幼虾,表明成虾分解食物和吸收营养的潜力更强。在属水平上,成虾和幼虾肠道中均存在大量的黄杆菌属(Flavobacterium)、拟杆菌属和氢噬胞菌属(Hydrogenophaga),这些菌属可以帮助机体进行多种营养代谢,成虾肠道中与碳水化合物代谢相关的菌群多于幼虾。PICRUSt功能预测显示,在克氏原螯虾肠道中,营养代谢功能相关的菌群相对丰度最高,而成虾肠道菌群代谢碳水化合物的功能显著高于幼虾。实验表明,在野外虾塘养殖下的克氏原螯虾的肠道菌群不论是在群落多样性、物种丰度还是菌群功能预测上,都未体现出性别间的差异,且肠道菌群的个体差异较大;但在不同生长阶段间,克氏原螯虾肠道微生物的群落多样性、丰度及功能都有显著差异,相比于幼虾,成虾肠道菌群多样性降低,多种代谢功能升高。

草鱼树突状细胞的分离鉴定及益生芽孢杆菌对其免疫功能的影响

为揭示草鱼(Ctenopharyngodon idellus)树突状细胞(Dendritic cells)的生物学特性及益生芽孢杆菌对其免疫功能的影响,研究通过草鱼体外细胞培养技术分离获得草鱼DCs,对其形态学特征、生物学功能及膜表面标记分子的表达进行了分析鉴定;RT-PCR检测了益生芽孢杆菌对草鱼DCs免疫相关细胞因子表达的影响。结果表明草鱼DCs具有典型的树突状形态,可有效地激活T淋巴细胞的增殖并具有迁移能力。LPS刺激可促进其成熟过程,显著提升膜表面标记分子CD80/86、CD83的表达。这表明草鱼DCs和哺乳动物DCs在形态和功能上具有高度相似性。RT-PCR结果显示,在体外条件下使用紫外照射灭活的益生枯草芽孢杆菌对草鱼DCs进行刺激后,抗炎性因子IL-4,IL-10的表达水平显著提升(P<0.05),并在12h时达到峰值。这表明枯草芽孢杆菌可通过促进树突状细胞分泌抗炎性因子来影响其免疫功能。以上结果为进一步研究鱼类树突状细胞的生物学特性及益生芽孢杆菌对其免疫功能的影响提供了重要的依据。