感染坏死性胰腺炎一例诊治分析

通过对1例感染坏死性胰腺炎(INP)患者的诊治过程进行记录与分析,并结合本中心的临床经验及对INP诊疗进展的文献综述,针对外科干预时机及策略进行讨论与总结。总结认为,对于INP的外科干预时机应尽量于4周后进行,而对于外科干预策略的决定应优先选择整体创伤较小的内镜或微创入路(腹腔镜或硬镜)清创,其次是开腹清创;但不应拘束于一种治疗模式,可结合自身条件在充分评估病情后进行升阶梯治疗。整体治疗策略应根据胰腺坏死性感染病灶的位置、累及范围、病程时期、患者一般情况等条件,由MDT团队制定个体化的治疗方案。

miR-144脂质体复合物体外抑制肝癌细胞增殖和侵袭能力及对裸鼠种植肿瘤的抑制作用初步研究

目的研究mi-RNA-144脂质体复合物对HepG2和SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并观察其在体内的抑瘤作用。方法通过薄膜分散法制备DOTMA阳离子脂质体,与miR-144孵育得到miR-144脂质体复合物,通过摄取和转染实验确定DOTMP脂质体与miR-144的体积质量比;观察miR-144脂质体复合物对HepG2和SMMC-7721细胞杀伤、迁移和侵袭能力的影响。在裸鼠肝脏种植肿瘤模型,观察miR-144脂质体复合物的抑瘤作用。结果选择DOTMP脂质体与miR-144的体积质量比为3:1,得到的miR-144脂质体复合物粒径在200 nm左右,其多分散性指数(PDI)小于0.3;DOTMP脂质体与质粒的体积/质量比(μl/μg)为3:1时,转染效率最高(P<0.05);随着孵育时间的延长,miR-144脂质体复合物对SMMC-7721细胞和HepG2细胞的杀伤作用均增强(P<0.05);经miR-144脂质体复合物处理过的HepG2细胞和SMMC-7721细胞迁移和侵袭距离均显著缩短(P<0.01);与对照组比,经过miR-144脂质体复合物处理的肿瘤细胞接种肿瘤直径显著缩小(P<0.05)。结论 miR-144脂质体能够在体外和体内抑制肝癌细胞的侵袭,具有很大的应用前景。

海南黎族人群mi RNA146a单核苷酸多态性位点与肝细胞癌遗传易感性分析

目的分析海南黎族人群miRNA146a单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)遗传易感性的关系.方法选取2015年3月至2018年3月于海南省人民医院接受治疗的45例肝脏良性疾病患者为对照组,选取2014年3月至2016年3月于本院接受治疗的142例HCC患者为观察组,两组患者HBsAg均为阳性.取2组患者肝组织标本提取DNA后行PCR扩增,查找包含miRNA146a外显子在内的SNP位点,探究miRNA146a与肿瘤易感性、患者术后早期复发间的相关性.结果 HCC患者中miRNA146a rs2910164 C/C型54例,G/G型15例,C/G型73例,Logistic分析表明HCC发生的危险因素为miRNA146a rs2910164 C/G型和C/C型,HCC早期复发的危险因素为miRNA146a rs2910164 C/G型和肿瘤大小.结论 miRNA-146a rs2910164位点与海南黎族HCC患者肿瘤遗传易感性有关,HCC患者术后早期复发的危险因素为rs2910164 C/G型和肿瘤大小.

肝血管瘤自发破裂出血一例

病人：女性，31岁。因突发上腹部疼痛1h入院，入院前1h因跑步突感上腹部持续性疼痛，呈撕裂样，休息及改变体位未见明显缓解。无发热、恶心、呕吐、腹泻等伴随症状，否认肝病史。

肝癌细胞仑伐替尼耐药的基因筛选及其通路研究

目的基于CRISPR/Cas9技术筛选肝癌仑伐替尼耐药相关基因并探究其潜在关系。方法应用CRISPR/Cas9 sgRNA全基因组文库技术结合Affymetrix表达谱芯片筛选肝癌对仑伐替尼耐药的相关基因。通过TCGA数据库分析这些基因在肝癌中的表达及预后的关系,最终确定采用THOC2为肝癌仑伐替尼耐药基因并用于后续研究。采用免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)染色、Western blotting、RT-PCR检测THOC2在肝癌细胞株(MHCC-97H、MHCC-LM3、SMMC-7721)及仑伐替尼耐药/敏感肝癌组织中的表达情况。通过慢病毒感染构建高表达THOC2的SMMC-7721-THOC2肝癌细胞,采用免疫共沉淀(Co-IP)等技术探讨THOC2介导肝癌仑伐替尼耐药的可能机制。结果发现7个与肝癌仑伐替尼抵抗密切相关的耐药基因,包括THOC2、CTNNB1(β-catenin)、MET(c-Met/HGFR)、HTATIP2、C10orf11、PRDX3、MAST4。TCGA分析提示THOC2在肝癌与癌旁中表达存在统计学差异,且与肝癌临床分期及预后密切相关。IHC染色、Western blotting、RT-PCR检测发现THOC2主要分布于胞核中,其在仑伐替尼耐药组患者中的表达水平高于药物敏感组患者;THOC2在高转移潜能的肝癌细胞株(MHCC-97H、MHCC-LM3)中的表达较在SMMC-7721中更显著;Western blotting、Co-IP进一步表明上调THOC2后Wnt/β-catenin通路下游靶点BAX、cyclinD1和c-myc蛋白水平显著增高,且THOC2与β-catenin存在相互作用关系。结论THOC2基因高表达可能通过Wnt/β-catenin通路参与调控肝癌对仑伐替尼的耐药。

长链非编码RNA CRNDE对胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨胰腺癌细胞系中长链非编码RNA CRNDE(LncRNA CRNDE)的表达及对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过real-time RT-PCR检测LncRNA CRNDE在胰腺癌细胞系和正常胰腺导管上皮细胞系中的表达。将胰腺癌细胞系Panc-1分成3组,LncRNA CRNDE沉默表达组(si-CRNDE组)、阴性对照组(si-NC组)及空白对照组(Blank组),对si-CRNDE组及si-NC组采用LipofectamineTM3000分别转染LncRNA CRNDE沉默序列(si-CRNDE)及阴性对照序列(si-NC),Blank组仅给予缓冲盐溶液对照。采用real-time RT-PCR验证沉默效率,CCK-8实验测定细胞增殖能力,细胞划痕实验测定细胞迁移能力,Transwell实验测定细胞侵袭能力,蛋白质印迹实验测定c-Myc和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白的表达。结果:胰腺癌细胞系Panc-1(P<0.01)、AsPC-1(P<0.01)、HPAC(P<0.05)、BxPC-3(P<0.05)中LncRNA CRNDE相对表达量高于HPDE6-C7细胞系。转染siRNA48 h后,si-CRNDE组LncRNA CRNDE相对表达量低于si-NC组(P<0.01)。CCK-8实验示细胞铺板后在0、24、48 h,si-CRNDE组与si-NC组的OD450nm值差异无统计学意义(P>0.05),在72和96 h,二者差异有统计学意义(分别P<0.05和P<0.01);Blank组与si-NC组差异无统计学意义(P>0.05)。细胞划痕实验结果示si-CRNDE组细胞划痕愈合率低于si-NC组[(26.3±2.8)%vs(52.1±3.7)%,P<0.05]。Transwell实验示si-CRNDE组侵袭细胞数少于si-NC组(108±15 vs 319±21,P<0.05)。蛋白质印迹结果示si-CRNDE组c-Myc蛋白质表达量低于si-NC组(0.47±0.04 vs 1.02±0.03,P<0.05)。si-CRNDE组p-ERK蛋白质表达量低于si-NC组(0.27±0.04 vs 1.04±0.05,P<0.01)。结论:LncRNA CRNDE在胰腺癌细胞系中高表达,沉默LncRNA CRNDE表达可抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,机制可能与c-Myc、p-ERK蛋白下调表达有关。

miRNA-144基因过表达对肝癌小鼠的抑瘤作用及对肠道菌群的影响

目的分析微小RNA-144(miRNA-144)基因过表达对肝癌小鼠的抑瘤作用及对肠道菌群的影响。方法建立小鼠移植性腹水型肝癌。观察miRNA-144基因过表达对肝癌小鼠一般情况、肝肠组织病理学形态、肠道内容物菌群丰度及多样性、肠道屏障功能的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应及Western blot对Occludin、ZO-1、miRNA-144 mRNA及Occludin、ZO-1蛋白的情况进行测定。结果miRNA-144过表达能改善肝癌小鼠的一般体质状况,抑制肝癌的发展,改善肠道微生态环境和肠道黏膜屏障功能,上调结肠组织Occludin、ZO-1、miRNA-144 mRNA及Occludin、ZO-1蛋白的表达。结论miRNA-144过表达能抑制原发性肝癌的发展,改善小鼠肠道微生态环境和肠道黏膜功能,其机制可能与上调Occludin、ZO-1 mRNA和蛋白表达有关。

TLR4和肠道菌群在原发性肝癌进展中动态变化及与预后的关系

目的探讨Toll-样受体4(TLR4)和肠道菌群在原发性肝癌进展中动态变化情况,并分析其与预后之间的关系。方法选取100例慢性乙肝患者、80例肝硬化合并乙型肝炎患者和60例肝癌合并乙型肝炎患者作为研究对象,并分别命名为乙型肝炎组、肝硬化组和肝癌组,另选取年龄及性别与其匹配的100名健康体检者作为对照组。采用流式细胞术检测各组外周血单核细胞表面TLR4表达情况,收集各组新鲜粪便,并检测其肠道菌群的分布,并分析两者之间的关系。比较各组外周血单核细胞表面TLR4表达和肠道菌群分布差异,并分析其与肝癌患者预后之间的关系。结果对照组、乙型肝炎组、肝硬化组和肝癌组外周血CD14+TLR4+单核细胞阳性率分别为(34.92±4.79)%、(41.92±7.46)%、(49.21±8.83)%和(57.62±10.58)%,4组比较差异有统计学意义(F=78.624,P<0.01);双歧杆菌含量分别为(10.73±2.91)lg CFU/g、(8.15±2.04)lg CFU/g、(6.33±1.32)lg CFU/g和(5.21±0.87)lg CFU/g,4组比较差异有统计学意义(F=15.932,P<0.01);肠球菌含量分别为(4.91±0.78)log CFU/g、(6.44±1.29)log CFU/g、(8.11±2.08)log CFU/g和(10.21±2.77)log CFU/g,4组比较差异有统计学意义(F=12.372,P<0.01)。经Pearson相关分析得知,单核细胞表面TLR4表达与乳酸杆菌和双歧杆菌呈负相关(P<0.05),其相关系数分别为-0.643和-0.672;与肠球菌和大肠埃希菌呈正相关(P<0.05),其相关系数分别为0.771和0.734。随访1年,60例肝癌患者中,18例复发,15例死亡。复发者和未复发者外周血CD14+TLR4+单核细胞阳性率分别为(59.32±9.17)%和(55.21±5.23)%,两者比较差异有统计学意义(t=2.200,P=0.032);死亡者与生存者外周血CD14+TLR4+单核细胞阳性率分别为(61.04±10.23)%和(53.29±8.11)%,两者比较差异有统计学意义(t=2.998,P=0.004)。与未复发者和生存者比较,复发者和死亡者双歧杆菌和乳酸杆菌含量明显减少,但肠球菌和大肠埃希菌含量则明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TLR4可促进HBV进展为肝癌,与肠道菌群变化明显相关,两者在肝癌预后监测中有一定价值。

奥曲肽在门静脉高压症病人术后应用的临床研究

目的研究奥曲肽对于降低门静脉高压症术后并发症发生率的效果。方法将2010年4月至2011年11月收治的100例门静脉高压症病人用掷硬币法随机分为两组，均行断流术或分流术，其中48例术后2h使用奥曲肽25μg／h（奥曲肽组），连续3d；另52例不使用任何生长抑素（对照组）。比较两组术后实验室结果、腹腔引流量、术后并发症、住院时间等。结果所有病人术后恢复顺利，奥曲肽组术后血红蛋白、红细胞压积、血浆白蛋白均高于对照组，腹腔引流量少于对照组，奥曲肽组术后胰漏、腹腔积液发生率明显低于对照组。结论术后早期使用奥曲肽能够降低门静脉压力，显著减轻手术创面的渗血、减少腹腔引流量、预防胰漏的发生。

奥曲肽在大范围肝切除术后应用的临床研究

目的 探讨使用奥曲肽降低大范围肝切除术后并发症的效果.方法 将120例实施大范围肝切除术的患者随机分为两组,试验组60例术后2h开始以25μg/h匀速静脉泵入奥曲肽,连用72h;对照组60例术后不使用生长抑素类药物.比较两组术后肝功能恢复情况、腹腔引流量、并发症的发生率等.结果 两组基本资料及术中参数等均具有可比性,无一例围手术期死亡,试验组术后平均腹腔引流量明显低于对照组,并发症的发生率低于对照组（18.3% vs 35%,P=0.04）,住院时间也明显缩短（11.8d vs 13.1d,P=0.04）,术后肝功能的恢复差异无统计学意义.结论 大范围肝切除术后早期、短程使用奥曲肽能够降低并发症的发生率,减少腹腔引流量,并不延缓肝功能的恢复.

对中国金融改革的建议

1.关于银行改革 曹思源认为,银行所有制改革是第一位的,管理居其次。目前国有独资银行的垄断带来了低效率,金融改革滞后拖了企业改革的后腿。银行改革关键在于多元化,国有银行应允许非国有资本的加入,而且还应大力发展民营银行。

中国证券市场的今天和明天

主持人:今年6月,中国政府通过《人民日报》社论的方式鼓励公民买股票,结果股票上涨了80％,这样做是否会产生泡沫?有人担心一旦过了10月1日,买方变成卖方,股民会吃亏,你们对此有何评价? 屠光绍:中国股票市场的前景是好的。《人民日报》发表社论的作用主要是传递信息,建立投资者的信心,

中国银行体系的现状和未来

1.关于银行坏账处理 拉迪:银行坏账问题不解决会影响支付,甚至影响储蓄。中国成立资产管理公司、扩大银行资本金,方向都是对的。

风险投资的新趋势

1.中国风险投资的症结何在? 保罗·王:风险投资需要四个要素,资本、技术、人才和流动性,其中流动性是最关键的。现在。

人骨髓间充质干细胞移植对肝衰竭大鼠的治疗作用

目的:探讨体外诱导肝向分化成功后的人骨髓间充质干细胞经门静脉移植对肝衰竭大鼠肝功能及组织的影响。方法:人骨髓间充质干细胞传至第6代后,体外利用肝细胞生长因子(HGF)和上皮细胞生长因子(EGF)诱导其肝向分化。使用四氯化碳建立急性肝衰竭大鼠模型,随机分5组:HGF诱导分化细胞移植组、EGF诱导分化细胞移植组、HGF+EGF联合诱导移植组、无诱导细胞移植组和无细胞移植组,经门静脉移植人骨髓间充质干细胞,分别于移植后12 h、72 h、7 d、1月和2月时间点观察检测肝功能指标及肝脏病理的变化情况。结果:HGF诱导分化细胞移植组、EGF诱导细胞移植组、HGF+EGF联合诱导移植组、无诱导细胞移植组大鼠的生存情况、谷丙转氨酶、胆红素、白蛋白水平各指标较无细胞移植组均明显改善,差异有统计学意义(P<0.05);但HGF诱导细胞移植组、EGF诱导细胞移植组和HGF+EGF联合诱导移植组各指标较无诱导细胞移植组,差异无统计学意义(P>0.05)。病理分析提示细胞移植组的大鼠肝显微结构较无细胞移植组改善明显。结论:肝向分化的人骨髓间充质干细胞移植入肝衰竭大鼠体内能够显著改善肝功能。

不可切除肝细胞癌转化治疗的研究进展

原发性肝癌是我国主要的恶性肿瘤之一,发病率高且预后差,多数患者确诊时已处于中晚期,无法行根治性手术。随着转化治疗的出现和不断发展,中晚期不可切除肝癌成功转化为可手术切除,患者生存期显著改善。目前,临床上转化治疗方案主要包括了局部治疗、系统治疗及二者的联合治疗。本文对初始不可切除肝细胞癌转化治疗的方案、治疗后手术指征和手术时机及术后辅助治疗等多方面进行探讨和展望。

乙型肝炎病毒DNA与肝癌转移复发的关系及外科干预策略

外科手术是当前肝癌可能获得根治的最有效治疗办法,但即使行根治性切除,术后复发率也很高,根治性手术5年复发率＞60％[1-2].复发转移已成为影响患者疗效和获得长期生存的关键因素之一,也是当前肝癌研究的重点.已有研究表明,肝癌根治术后复发除肿瘤自身生物学特性外,乙型肝炎病毒（HBV）活跃复制及肝炎的活动性与其有极其密切的关系[3].我们现就HBV DNA与HBV相关肝癌复发的相关性及外科应对策略做一综述.

Tspan8过表达与肝癌上皮间变及转移的关系

目的探讨四跨膜蛋白Tspan8表达与肝癌转移、上皮间变的关系及其机制。方法利用前期构建的TSPAN8shRNAs慢病毒质粒并筛选稳转细胞株MHCC97．H．LV．GFP．shRNA．Tspan8，沉默Tspan8基因表达。WST法检测细胞增殖变化；蛋白印迹法检测基质金属蛋白酶12表达改变；应用Transwell检测细胞侵袭能力变化；5．0×10^6肝癌细胞肝内注射行体内实验，检测肿瘤生长及肺转移情况。在层黏蛋白-5（1aminin-5）作用于肝癌细胞株MHCC97-H—Mock和MHCC97-H—shRNA-Tspan8两天后，观察2组细胞形态差异，是否发生EMT改变并检测上皮及间质分子标志物。进一步应用免疫共沉淀和荧光分析Tspan8可否与整合素“形成复合物。结果体内外实验显示，与Tspan8-RNA干扰的MHCC-97H细胞（MHCC97-H-shRNA—Tspan8）比较，Tspan8高表达的肝癌细胞MHCC-97H和对照组MHCC97-H—Mock（LV-GFP）增殖侵袭能力、成瘤生长及肝癌肺转移等方面明显增强（P〈0．05）。MHCC97-H—shRNA-Tspan8细胞中MMP-12表达抑制明显，细胞侵袭能力明显下降。进一步的研究显示：在层黏蛋白_5的诱导下四跨膜蛋白Tspan8可与拍结合并诱导高表达肝癌细胞MHCC97一H发生上皮间质转化，而在RNA干扰组肝癌细胞中（MHCC97-H—shRNA-Tspan8）未见发生；免疫共沉淀显示Tspan8可与面结合形成复合物，提示Tspan8偶联饯6后形成复合物并可促进肝癌侵袭转移。结论四跨膜蛋白Tspan8表达与肝癌侵袭转移正相关，并可能与整合素α6结合而诱导肝癌细胞发生上皮间质转化有关，是肝癌复发转移及预后干预的潜在靶点和分子靶向治疗指标。

Tspan8过表达与肝癌转移潜能及预后的关系

目的：探讨Tspan8表达与肝癌侵袭转移及预后之间关系。方法：用qRT-PCR和Westernblot检测不同肝癌细胞系及80例肝癌患者手术标本中Tspan8的mRNA与蛋白表达；应用组织芯片检测352例肝癌组织样本中Tspan8的表达，分析Tspan8表达与肝癌临床病理因素及复发与预后的关系。结果：Tspan8的mRNA与蛋白表达在高转移潜能肝癌细胞系（MHCC97-H、MHCC97-L）中的表达明显高于低转移潜能的肝癌细胞系（PLC/PRF/5、SMMC7721、HepG2），在肝癌组织中的表达明显高于癌旁与正常肝组织，且在有肝内转移或血管侵犯患者癌组织中的表达明显高于无肝内转移及血管侵犯患者的癌组织（均P〈0.05）。Tspan8高表达是肝癌术后复发转移（HR=1.64，95%CI=1.21~2.23， P=0.002）和术后生存（HR=1.66，95%CI=1.23~2.25，P=0.001）的独立危险因素，Tspan8高表达患者术后5年总生存率明显低于Tspan8低表达组，术后复发时间明显短于低表达患者（均P〈0.05）。结论：Tspan8促进肝癌侵袭转移，Tspan8高表达患者预后不良。

NIMA相关激酶2在胰腺癌中的表达及其临床意义

背景与目的:NIMA相关激酶2(NEK2)在多种恶性肿瘤中呈高表达,且与肿瘤进展及不良预后密切相关。然而,NEK2在胰腺癌中的表达及意义尚不清楚。因此,本研究探讨NEK2在胰腺癌组织中的表达及其与患者临床病理因素、预后的关系。方法:收集海南省人民医院肝胆胰外科于2013年1月—2014年12月接受胰腺癌切除术的108例患者组织标本,以及临床病理资料与随访资料。免疫组化法染色检测组织标本中NEK2的表达,分析NEK2的表达与临床病理因素的关系,Kaplan-Meier生存曲线和Log-rank分析及比较不同NEK2表达水平患者无瘤生存率及总生存率差异。Cox风险比例模型分析影响预后的危险因素。结果:在正常胰腺组织中无NEK2表达,108例胰腺癌组织中,NEK2高表达63例(58.3%),低表达45例(41.7%)。NEK2的表达与患者CA19-9水平(P=0.015)﹑TNM分期(P=0.002)﹑肿瘤分化程度(P=0.034)﹑淋巴结转移(P=0.043)明显有关,而与性别﹑年龄﹑吸烟﹑CEA水平﹑肿瘤大小﹑肿瘤部位无明显关系(均P>0.05)。NEK2高表达患者1﹑3、5年无瘤生存率分别为60.5%﹑20.7%、5.2%,NEK2低表达患者1﹑3、5年无瘤生存率分别为75.4%﹑50.6%、24.9%;NEK2高表达患者1﹑3、5年总生存率分别为75.6%﹑42.2%、15.3%,NEK2低表达患者1﹑3、5年总生存率分别为85.7%﹑60.6%、30.1%,NEK2高表达患者的无瘤生存率与总生存率均低于NEK2低表达患者(均P<0.05)。单因素与多因素分析结果显示,TNM分期(P=0.029)﹑淋巴结转移(P=0.016)、NEK2高表达(P=0.032)为无瘤生存率的独立影响因素;TNM分期(P=0.035)﹑分化程度(P=0.042)﹑淋巴结转移(P=0.006)及NEK2高表达(P=0.000)为总生存率的独立影响因素。结论:NEK2高表达是胰腺癌患者预后的独立危险因素,NEK2可作为胰腺癌术后患者预后判断的指标。