L型滑液囊支原体实时荧光定量PCR方法的建立与应用

为建立一种快速、灵敏的检测我国优势基因型(L型)滑液囊支原体(MS)的方法,试验针对L型MS vlh A基因核苷酸序列保守区设计引物及Taq Man-MGB探针,将PCR扩增的vlh A基因克隆至p MD19-T载体,构建重组质粒vlh A-L作为阳性质粒标准品,建立实时荧光定量PCR(q PCR)方法,并检验该方法的特异性、灵敏性和重复性。结果显示:该方法特异性良好,与C型MS-H株及其他鸡常见病原不发生交叉反应;重组质粒vlh A-L最小检出浓度为1.94×10^(1) copies/μL;组内和组间重复性变异系数均小于1%;临床样品检测结果与PCR测序结果吻合。研究表明,建立的q PCR方法特异性强、灵敏性高、重复性好,适用于检测我国L型MS感染情况,还可满足监测免疫MS-H株疫苗鸡群L型MS感染的要求。

《兽医微生物学》五“微”一体课程思政教学改革探索与实践

在新农科建设的背景下,探讨如何培育出能为国家贡献力量、适应未来社会发展的高素质新农科人才,已成为农业院校高等教育的核心议题。《兽医微生物学》作为动物医学专业的重要基础课程,其教学质量直接关系到学生的专业素养和综合能力。因此,将思政教育巧妙地融入《兽医微生物学》的教学中,以提升学生的综合素质,已成为当前教学改革的关键环节。本文旨在介绍《兽医微生物学》教学实践中总结的五“微”一体教学改革探索与实践。通过深入分析课程特点,结合思政教育的元素,我们构建了一个五“微”一体的教学体系,旨在以“润物无声”的方式将思政教育融入课程中,并探讨其在教学中的实施效果及存在的挑战。我们期望这一探索能为兽医微生物学的教学改革提供有价值的参考。

冀南地区滑液支原体分离鉴定及耐药性分析

【目的】了解中国冀南地区滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的流行和耐药情况,为该地区防控MS感染提供科学依据。【方法】于2019—2022年采集冀南地区疑似MS感染的7个规模化鸡场样品(发病鸡的气囊、腭裂或爪垫渗出液)进行病原分离培养及PCR鉴定,对分离株进行vlhA基因分型序列分析,采用微量肉汤稀释法测定分离株最小抑菌浓度(MIC)。【结果】所采集样品中分离出9株疑似MS菌株,均可使液体培养基颜色变为橘黄,在固体培养基中菌落形态为典型的“煎荷包蛋”样;PCR鉴定及测序结果显示,9株分离株与MS HN01株相似性为100%,表明分离株均为MS;vlhA基因分型序列结果显示,9株MS富含脯氨酸重复序列(PRR)区均为35个氨基酸,属于L型,核苷酸序列相似性为99.7%~100%,与中国其他地区L型菌株亲缘关系较近,与泰国L型菌株亲缘关系较远;MIC测定结果显示,9株MS对泰乐菌素、替米考星、螺旋霉素、林可霉素、沃尼妙林、泰妙菌素、多西环素、土霉素、氟苯尼考、恩诺沙星的MIC 50/90值分别为0.25/0.25、0.5/0.5、0.5/0.5、1/1、≤0.016/≤0.016、0.062/0.125、1/1、2/2、4/4和32/32μg/mL。【结论】本研究于冀南地区成功分离到9株L型MS,与国内其他地区MS差异较小、遗传进化相对稳定,治疗当地MS感染可选用泰妙菌素、沃尼妙林、泰乐菌素、替米考星、螺旋霉素,其次为林可霉素、多西环素、土霉素。本研究结果可为当地防控MS感染提供科学依据。

MRI在代谢综合征中的早期胰腺癌筛查中的应用

目的:探究磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging, MRI)在代谢综合征(metabolicsyndrome, MS)中的早期胰腺癌(pancreaticcancer, PC)筛查中的临床诊断价值。方法:选取我院2020年1月至2022年12月期间在我院进行体检的90例代谢综合征患者和同期90例健康志愿者作为研究对象。90例代谢综合征患者为观察组,90例健康志愿者为对照组。利用MRI检查两组腹部脂肪分数(fatfraction, FF)值,胰腺脂肪分数(Pancreatic fat fraction, PFF)、第4、5腰椎间隙平上8cm处腔断面的下脂肪面积(Small Area, SA)、腹腔脂肪面积(visceral fat area, V A)、腹部总脂肪面积(Total abdominal fat area, T A),并计算腹部下脂肪面积比例(Proportion of the lower abdominal fat area, SFP)以及腹部内脏脂肪面积比例(Proporo of the abdominal visceral fat area, VFP)的值。结果:观察组FF值和PFF值均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),观察组SA、VA、TA、SFP、VFP值均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组有23例(25.56%)患有胰腺癌,对照组有8例(8.89%)患有胰腺癌,两组之间相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:代谢综合征患者中在MRI检查脂肪定量值和胰腺脂肪定量值中FF值以及PFF值以及胰腺脂肪面积的高于正常人群,且有代谢综合征患者更容易发生胰腺癌。

滑液支原体分子分型及免疫原性蛋白研究进展

滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是感染鸡和火鸡的主要病原体之一,对全球养禽业造成了巨大经济损失。为了选择分子分型方法进行分子生物学鉴定分析,以便研制出安全有效的亚单位疫苗,从病原特征、分子分型和免疫原性蛋白等方面对MS进行了综述。病原特征主要包括MS生长条件、传播方式和敏感性。MS分型方法众多,目前较为常用的是可变脂蛋白血凝素(vlhA)基因序列分析,其识别力较高,但具有多变性,有时难以确定分离株亲缘关系的相关性;多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)具有分子分型能力强的特点,更适合流行病学调查。目前,亚单位疫苗是支原体疫苗研发的重要方向,而筛选出合适的抗原是制备亚单位疫苗的前提,现已报道多种免疫原性蛋白,如NADH氧化酶、PDHA、MSPB、P35等。未来还需对MS毒力基因、致病机制和传播机制等深入研究,采用统一的分型方法对全球MS菌株进行分子生物学鉴定分析,积极研究免疫原性良好的抗原蛋白。本文为MS分子生物学鉴定及亚单位疫苗研制提供了参考。

7种血清4型禽腺病毒疫苗免疫效果比较

旨在评估不同类型血清4型禽腺病毒(FAdV-4)疫苗对鸡免疫保护效果,为养殖场选择合适疫苗提供参考。选取5个厂家生产的组织毒细胞毒混合疫苗、细胞毒疫苗和重组蛋白疫苗3种FAdV-4组分的7种疫苗进行评价,采用胸肌注射法免疫,每种疫苗免疫8只21日龄SPF鸡,并设攻毒对照组和空白对照组,在免疫后21 d采集血清测定中和抗体和Fiber-2抗体,同时用FAdV-4分离株进行攻毒,在攻毒后7 d采集肝脏、抗凝血和泄殖腔拭子检测FAdV-4,采集血清测定Fiber-2抗体。结果显示,在免疫后21 d,重组蛋白疫苗组产生的Fiber-2抗体水平显著高于其他组(P<0.05),但未产生中和抗体;组织毒细胞毒混合疫苗组和细胞毒疫苗组均产生不同水平中和抗体和Fiber-2抗体;细胞毒疫苗EV1组产生的中和抗体水平显著高于其他组(P<0.05),但同一厂家的细胞毒疫苗EV2组产生的Fiber-2抗体水平显著低于其他组(P<0.05);在攻毒后7 d,除重组蛋白疫苗BV组死亡1只外,其他各组均无死亡;重组蛋白疫苗组和细胞毒疫苗组出现少量排毒和心包积液;各组均产生高水平Fiber-2抗体。综上,不同抗原疫苗诱导产生中和抗体的能力不同,重组蛋白疫苗不能诱导产生中和抗体,其他2种抗原疫苗可诱导机体产生中和抗体,但相同工艺不同厂家疫苗(CV与BV、DV与EV1、EV2)、甚至相同工艺同一厂家的不同疫苗(EV1与EV2攻毒后的心包积液情况)免疫效果均存在差异。总体来看,疫苗免疫保护效果:组织毒细胞毒混合疫苗>重组蛋白疫苗>细胞毒疫苗,2种组织毒细胞毒混合疫苗AV1、AV2和重组蛋白疫苗CV均可有效预防FAdV-4感染。

金黄色葡萄球菌CP8-FnBPB-ClfA偶联蛋白对金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎的免疫效果研究

为研究金黄色葡萄球菌(S.aureus)CP8-Fn BPB-Clf A偶联物对S.aureus性奶牛乳房炎的免疫保护效果,本研究将脂质体、氢氧化铝(ALUM)或大肠杆菌不耐热肠毒素B(LTB)作为佐剂与纯化的CP8-Fn BPB-Clf A混合分别免疫泌乳期奶牛,通过检测乳汁中体细胞数(SCC)、监测血清中Ig G、Ig A及乳汁中Ig G水平,对免疫效果进行评价。结果显示,通过ALUM佐剂乳化后的CP8-Fn BPB-Clf A免疫泌乳期奶牛,其血清及乳汁中抗体水平最高,持续时间最长,并且乳汁中SCC下降幅度最大。本研究结果表明,CP8-Fn BPB-Clf A经ALUM乳化后免疫奶牛,能够有效降低奶牛乳汁中的SCC,激发奶牛免疫反应。

一例家禽巴氏杆菌病的诊断与防治

禽巴氏杆菌病又称禽霍乱,是由多杀性巴氏杆菌引起的传染病,以败血症和炎症出血为主要特征。该病发病快、死亡快,以败血性经过和剧烈下痢为主要特征;病鸡主要表现呼吸困难,特征性症状是张口摇头,因此也被称之为“摇头瘟”。本病发生无明显的季节性,以7~10月龄为发病高峰,呈散发性或地方流行性。

心电引导定位法置入新生儿PICC导管的效果评价

目的评价心电引导定位法在置入新生儿PICC导管的效果。方法选取行PICC置管术的新生儿90例,分成3组每组30例,分别进行传统、改良、心电引导3种尖端定位方法,对尖端到位率、最佳位置范围到达率、插入长度与理想长度的差异性进行比较。结果传统组、改良组、心电引导组尖端到位率分别为93.33%、90.0%、100%。心电引导组尖端最佳位置范围到达率为100%,高于其他两组(χ~2=15.0,χ~2=20.0;P<0.05)。3组插入长度与理想长度比较差异有统计学意义(P<0.05),其中心电引导组准确度最高(0.00±0.01),改良组次之(0.01±0.05),传统组最低(0.02±0.04)。结论心电引导技术对新生儿PICC置管尖端定位有指导性作用,并保障PICC导管插入长度的准确性,提高PICC使用的安全性。

内蒙古地区乳样中牛支原体的分离及PCR鉴定

为检测内蒙古地区某牛场患乳房炎的奶牛乳样中是否存在牛支原体,同时建立直接提取乳样中牛支原体DNA进行PCR检测的方法,本研究无菌采集乳房炎乳样,通过支原体的分离培养、形态学观察和生化试验,初步鉴定分离株为牛支原体,然后提取液体培养基菌体DNA进行牛支原体特异性PCR鉴定,同时,采用Chelex-100法直接提取原乳样中菌体DNA进行PCR鉴定,并测序分析扩增片段序列。液体培养物提取DNA与Chlex-100法直接提取原乳样菌体DNA进行特异性PCR均扩增出目的条带,该片段序列与GenBank中牛支原体oppD/oppF基因的同源性达到99.8%,证实分离株为牛支原体。说明Chlex-100法可直接提取乳样中牛支原体DNA进行快速PCR鉴定。

Chelex-100法直接提取乳样中奶牛乳房炎主要致病菌DNA方法的建立

为建立一种直接从乳样中快速提取细菌DNA的方法,试验通过人工制备8个倍比稀释细菌的乳样,检测了Chelex-100法提取3种奶牛乳房炎主要致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌)DNA进行PCR扩增的敏感性,并与苯酚—氯仿法进行了比较分析。结果显示,以Chelex-100法提取乳样中细菌DNA进行PCR扩增具有较高的敏感性,所检测金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌的最小浓度分别为103、102、102 CFU/mL;而使用苯酚—氯仿法提取乳样中各细菌DNA的PCR敏感性均为104 CFU/mL。综上所述,Chelex-100法提取乳样细菌DNA的PCR敏感性可以满足临床检测奶牛乳房炎的需要,显现了简单快速、经济、无污染的优点,为从乳样中直接提取细菌DNA提供了新的思路,对PCR快速检测乳房炎致病菌具有重要意义。

MSCT及图像后处理技术对卵巢肿瘤蒂扭转的评价

目的:探讨多层螺旋CT及图像后处理技术对卵巢肿瘤蒂扭转的诊断价值。方法:回顾分析2010年1月-2019年12月我院经手术病理证实63例卵巢肿瘤蒂扭转的多层螺旋CT表现,提高对本病认识。结果:扭转的卵巢肿瘤包括单纯性囊肿19例,畸胎瘤20例,囊腺瘤9例,性索间质来源肿瘤14例,巧克力囊肿1例。右侧38例,左侧25例,肿瘤呈囊性32例,囊实性17例,实性14例。CT轴位及冠状位、矢状位MPR图像显示卵巢扭转的蒂61例,肿瘤壁新月形或环形增厚42例,肿瘤内出血19例,子宫向扭转侧移位34例,肿瘤壁表面毛糙19例,肿瘤周围脂肪炎性反应23例,盆腔积液、积血19例,4例患者见水肿卵泡征。结论:卵巢肿瘤蒂扭转具有特征性的CT影像学表现,CT轴位结合冠状位和矢状位MPR图像可明显提高卵巢肿瘤蒂扭转的准确率。

上海市及周边部分地区猪传染性胸膜肺炎血清学调查与分析

为初步了解我国上海市及周边部分地区猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoiae,APP)的感染情况,对2015~2016年间采集于上海市、江苏省、江西省以及浙江省部分地区的1031份猪血清进行胸膜肺炎放线杆菌感染情况检测。结果显示,上海市及周边地区部分规模化猪场猪群中APP抗体总阳性率为27.06%,其中APP抗体阳性率江西省(38.08%)、江苏省(33.09%)和浙江省(25.21%)均高于上海市(11.20%);种猪(37.74%)高于哺乳仔猪(33.16%)和育肥猪(25.96%)以及保育猪(14.68%);APP抗体水平夏季(40.25%)高于冬季(25.00%)、春季(28.21%)和秋季(15.29%);小型猪场(42.11%)高于中型(24.86%)和大型猪场(17.97%)中APP抗体阳性率。统计分析显示,APP抗体阴、阳性与地区、猪群的生长阶段、生长季节以及猪场规模有关(P<0.001)。检测结果表明,我国上海市及周边地区猪群中胸膜肺炎放线杆菌感染较为普遍。本研究结果为我国猪传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumonia,PCP)的防控以及净化工作提供了一定的数据支持。

禽源肠炎沙门菌aroA基因缺失株的构建及其生物学特性研究

试验旨在研究aroA基因对肠炎沙门菌生物学特性及毒力的影响。利用λ-Red同源重组技术,将从田间分离的禽源肠炎沙门菌的aroA基因进行敲除,经连续传代检测缺失株遗传稳定性,并通过细菌生长曲线、对不同生化反应管的利用情况、生物膜形成能力、对环境应激的抵抗能力及对1日龄雏鸡的毒力比较野生株和基因缺失株之间的差异。结果显示,试验成功构建缺失株,连续传30代未发现目的基因回复突变;在相同培养条件下,缺失株与野生株在相同时间进入对数生长期和稳定期,但缺失株生长速率低于亲本株;缺失株较野生株生化特性未发生改变;缺失株的生物膜形成能力及对酸、碱、高渗和热应激的抵抗能力均显著低于野生株(P<0.05);1日龄雏鸡分别滴口接种缺失株和野生株,观察14 d,野生株组鸡全部死亡,而缺失株组无死亡。综上所述,本试验成功构建并获得了具有良好遗传稳定性的肠炎沙门菌aroA基因缺失株,缺失株生化特性和体外生长趋势未发生明显改变,但生物膜形成能力、对环境应激抵抗能力及毒力均明显下降。本研究为进一步研究肠炎沙门菌aroA基因缺失株的免疫原性奠定了基础。

大肠杆菌的牛津杯药敏试验

大肠杆菌病是由埃希氏大肠杆菌的某些致病株所引起的一类疾病,各种年龄的鸡均可感染,大肠杆菌病可以单独发病也可以通过其他疾病的继发感染,由于近年来抗菌药物的滥用,大肠杆菌耐药株日益增多,使得该病呈蔓延趋势。所以本次针对临床分离的三种大肠杆菌菌群,进行牛津杯药敏试验,同时对比标准药敏片。结果显示成品牛津杯药敏结果与标准药敏片结果一致性较高,可通过药敏结果来指导现场用药防止耐药产生。

禽场生物安全体系建设的流程控制

广义的生物安全是指为了保证动物健康,而采取的所有措施;狭义的生物安全是指为了降低病原侵入和传播风险而采取的所有措施。在生物安全建设的做法上,常会产生不同的理解,比如,我们如何理解两次洗澡的优劣?消毒次数是不是越多越好?如何有效执行生物安全?下面从几个方面阐述禽场生物安全体系建设的流程控制。