环江香猪黏附素13基因多态性及其与仔猪腹泻的相关性分析

试验旨在对环江香猪仔猪腹泻抗性/易感的黏附素13基因(MUC13)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)/单倍型与仔猪腹泻的相关性进行分析。试验采用高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术对93头环江香猪腹泻仔猪和95头健康对照仔猪进行基因分型,结合DNA测序对HRM检测结果进行验证,并通过SHEsis在线平台确定其单倍型。结果显示,环江香猪MUC13基因的G224A位等位基因分布频率在腹泻组和对照组间差异显著(P<0.05),GG、GA和GG+GA基因型分别与AA基因型相比差异均显著(P<0.05)。A112G、T170C和G164C位点各基因型频率和等位基因频率在腹泻组和对照组之间差异均不显著(P>0.05),腹泻组与对照组E位点均为野生纯合基因型。单倍型Ⅹ(GTAC)在腹泻组的分布极显著高于对照组(P<0.01)。因此,MUC13基因G224A位点和单倍型Ⅹ(GTAC)与环江香猪仔猪断奶前腹泻相关。

Microcystin-LR对体外牛子宫内膜上皮细胞增殖和凋亡的影响

使用Microcystin-LR体外处理牛子宫内膜上皮细胞,探究其对细胞活率影响及分子调控机制,以期为提高牛繁殖效率提供理论基础和实践依据。试验运用CCK-8检测MC-LR处理后细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡率;Annexin V-FITC试剂盒检测细胞凋亡;实时荧光定量检测Pi3k、Akt、mTOR、Cyt-c、Caspase-3、Caspase-9和p53基因mRNA表达量。Western blot检测Pi3k、Akt、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达量。结果表明,不同浓度和时间处理下细胞存活率出现升高和降低两种相反情况,根据CCK-8检测结果,选择12 h,100μg·L^(-1)和24 h,160μg·L^(-1)两种处理方案开展后续试验。在12 h,100μg·L^(-1)条件下,Pi3k、Akt、mTOR的mRNA表达量升高(P<0.01),Cyt-c、Caspase-3和Caspase-9基因mRNA表达量下降(P<0.05),Pi3k和Akt蛋白表达量升高(P<0.05),Caspase-3和Caspase-9蛋白表达量降低(P<0.05)。处于G0/G1期细胞数量减少(P<0.01),处于G2/M和S期细胞数量增加(P<0.01);p53基因mRNA表达量升高(P<0.05)。在24 h,160μg·L^(-1)处理条件下,Caspase-3、Caspase-9、Bax/Bcl2基因mRNA表达量升高(P<0.05),Caspase-3和Caspase-9蛋白表达量升高(P<0.05)。研究表明,100μg·L^(-1)MC-LR处理细胞12 h,细胞通过增强Pi3k-Akt-mTOR信号通路,抑制线粒体凋亡通路促进细胞增殖,同时导致处于G1期细胞数量减少、G2/M期和S期细胞数量增加。160μg·L^(-1)MC-LR处理细胞24 h,细胞通过活化线粒体凋亡通路发生凋亡。

DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR对多能基因及甲基化相关基因在徒手克隆胚胎中表达模式的影响

本试验通过实时荧光定量PCR方法对多能基因Oct4和Nanog及DNA甲基化相关基因Dnmt1和Tets在徒手克隆(handmade cloning,HMC)胚胎中的表达模式进行初步研究,并探讨5-Aza-CdR处理重构胚对这些基因表达模式的影响。结果显示,Oct4、Nanog和Tet3的表达在2细胞时期达到顶峰,Dnmt1和Tet2基因的表达随HMC胚胎发育而下降,而Tet1基因随HMC胚胎发育表达上升。使用5-Aza-CdR处理重构胚没有改变Oct4、Tet1和Tet3基因的表达模式,使Nanog基因在胚胎发育初期表达增加,Dnmt1和Tet2基因在胚胎发育初期表达降低。研究初步确立了Oct4、Nanog、Dnmt1和Tets基因在HMC胚胎的表达模式,5-Aza-CdR对重构胚的处理可对HMC胚胎的甲基化模式产生影响。

PRC1对于小鼠卵母细胞作用机制的初步研究

胞质分裂调控蛋白1(PRC1)是微管结合蛋白家族中的重要成员之一,影响着细胞分裂过程的诸多生物学事件。为了探究PRC1调节减数分裂的机制,试验以小鼠卵母细胞体外成熟为研究模型,首先采用免疫荧光方法检测卵母细胞减数分裂不同时期PRC1的表达,之后采用荧光定量PCR检测各个时期PRC1基因的mRNA表达量。结果表明:PRC1在小鼠卵母细胞发育的各个阶段都有表达,且与纺锤体微管处于共定位的状态;在小鼠卵母细胞体外培养到达第一次减数分裂末期(TI)时,PRC1基因的mRNA表达量最高。说明PRC1在减数分裂的过程中均有表达,且作用于减数分裂中的纺锤体微管。

褪黑素对雌性动物繁殖的影响

哺乳动物中的褪黑素(5-甲氧基-N-乙酰色胺)主要来源于松果腺,是一种由松果腺分泌的吲哚类激素,具有调控动物生理节律、季节性繁殖和卵巢功能等作用。文章简要介绍了褪黑素对雌性动物卵巢功能和季节性繁殖调控方面的影响,希望对以后相关研究奠定基础。

环江香猪FSHβ、ESR及ZAR1基因多态性分析

环江香猪是广西著名的地方品种,本研究采用PCR-RFLP、HRM结合测序的方法分析了广西环江香猪繁殖状相关基因FSHβ、ESR和ZAR1基因的多态性。结果显示,首次成功克隆测序了环江香猪ZAR1基因的外显子3,与Gen Bank中的ZAR1基因(DQ231443,gi:83727928)外显子3序列100%同源。针对134头环江香猪检测样本中均未发现FSHβ和ESR基因的多态突变位点。对ZAR1基因的外显子3和部分内含子3测序后发现5个新突变SNP位点,未见有已报道的对猪产仔数产生显著影响的外显子3(C54T)突变。论文显示不同品种猪基因突变多态性亦呈现为不同的模式,研究结果对建立环江香猪基因标记辅助选择方法具有重要意义。

SAHA处理对猪手工克隆胚胎体外发育潜能的影响

为了探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）对德保猪手工克隆胚胎（HMC）发育潜能的影响,试验摸索SAHA的适宜处理浓度[0（对照）,1.0,2.5,5.0,7.5,10.0μmol/L]和时间（0,6,12,24 h）;之后分为4组,SAHA组、体外受精（IVF）组、孤雌激活（PA）组、对照（HMCC）组,分别在体外发育的1细胞期、2细胞期、4细胞期、囊胚期收集胚胎,在相同时期下比较各组胚胎组蛋白H4K8乙酰化（Ac H4K8）水平差异和相关基因（HDAC1、HAT1、ASF1A、OCT-4）相对表达量。结果表明：7.5μmol/L SAHA处理囊胚率显著高于对照（P〈0.05）,12 h囊胚率显著高于0 h（P〈0.05）;所以适宜处理浓度为7.5μmol/L,适宜处理时间为12 h。在1细胞期、2细胞期、囊胚期,SAHA组Ac H4K8水平接近IVF组水平（P〉0.05）。在囊胚期,SAHA组HDAC1基因相对表达量接近IVF组（P〉0.05）;在囊胚期,SAHA组OCT-4基因相对表达量接近IVF组（P〉0.05）。说明SAHA可以使HMC胚胎Ac H4K8水平接近IVF水平,并纠正克隆胚胎乙酰化的异常,从而提高克隆胚胎发育潜能。

HNP1对牛支持细胞中细胞周期因子的影响

为了探讨异源蛋白侵入支持细胞的细胞反应,试验采用体外模拟血睾-屏障和支持细胞受损的方法,即用载体pEGFP-N3和pEGFP-N3-HNP1转染牛睾丸支持细胞,通过细胞内产生的异源蛋白,检测支持细胞的反应以及周期蛋白因子(P53、CDC25A)的表达变化。结果表明:转染48 h和96h后HNP1可下调支持细胞P53、CDC25A基因的表达。说明异源蛋白作用于支持细胞,可抑制或降低周期蛋白P53、CDC25A的表达,导致细胞分裂停止或降低。