对虾白斑综合症病毒VP28基因在家蚕体内的表达

VP2 8是对虾白斑综合症病毒 (Whitespotsyndromevirus,简称WSSV)的囊膜蛋白。在克隆了VP2 8基因的基础上 ,成功构建了重组转移载体pBlueBacHisC vp2 8和重组杆状病毒HyNPV VP2 8。用重组病毒的细胞培养液注射接种 5龄饷食后的家蚕 ,剪病蚕腹足采血淋巴 ,进行SDS PAGE和Westernblotting分析 ,结果表明 ,WSSV VP2 8基因在家蚕体内得到了表达 ,特异性条带大小约为 31kD。研究结果为探讨WSSV感染对虾的分子机制打下了基础。

对虾白斑综合征病毒VP19基因的克隆和序列分析

以东海宁波海区收集的甲壳内侧出现白斑为特征的发病中国对虾为材料,从中分离出一株病毒(ZJ2001),经电镜和动物试验鉴定为对虾白斑综合征病毒;用煮沸法一步获得病毒基因组DNA,以此基因组为模板,利用PCR技术,扩增病毒囊膜蛋白VP19的基因,将扩增得到的基因克隆并测序.用DNATools软件对测得的序列分析表明:VP19基因序列与GeneBank中的比较(AF309029),其核苷酸同源性为99%,氨基酸同源性为98%.

利用宿主范围扩大的杂交病毒HyNPV在家蚕中表达对虾白斑综合症病毒VP19基因

对虾白斑综合症其病原是对虾白斑综合症病毒(Whitespotsyndromevirus,简称WSSV)。VP19是WSSV的一个囊膜蛋白,HyNPV(HybridofAcNPVandBmNPV,简称HyNPV)是BmNPV和AcNPV通过基因重组后得到的一个具有BmNPV和AcNPV双重优点的新型杂交病毒,在克隆了VP19基因的基础上,成功构建了重组转移载体pBlueBicHisCvp19和重组杆状病毒HyNPVVP19。用重组病毒注射接种5龄起蚕,经SDSPAGE和Westernblotting分析,结果表明,WSSVVP19基因在家蚕体内得到了表达,特异性条带大小与预计的基本一致,约为21kD。

对虾白斑综合征病毒VP28基因在大肠杆菌中的表达

在已构建重组质粒pGEM-vp28的基础上,通过NcoⅠ,HindⅢ双酶切质粒pGEM-vp28和表达载体质粒pET-30a,分别获得携带限制性内切酶粘性末端的vp28基因片段和表达载体质粒片段,两片段经T4DNA连接酶连接获得了重组表达质粒pET30a-vp28,将此重组质粒导入表达宿主菌EscherichiacoliBL21中,用IFID诱导表达4h后,其表达产物在SDS-PAGE和Westernblot中的显示的特异性条带大小约27ku,与预期的大小相近。

现行原种对人工饲料摄食性的研究

试验拟通过对现行蚕品种原种的人工饲料适应性研究，为人工饲料适应性蚕品种选育提供基础材料及理论依据。本试验周查了中系、日系共１４个现行原蚕品种收蚁后在温度对２９０℃、湿度９５％下经过４８小时后蚁蚕的疏毛率。结果疏毛率最低为１２．７％，最高为９７．１％。系统间蚁蚕的摄食性存在着极显著的差异，同系统内不同品种间也存在着较显著的差异．

淡水池养南美白对虾白斑综合症病毒的分离及其回攻试验

从苏州市某淡水养殖池塘中采得南美白对虾(Penaeus vannamei)病虾,从病体中分离出一种杆状病毒,纯化的病毒粒子经电镜观察发现其大小(50nm×375nm)、形态特征(杆状)与对虾白斑综合症病毒(WhiteSpot Syndrome Virus,简称WSSV)极其相似,克氏原螯虾(Procambarus clarki)回归试验及病毒分离、观察实验,初步表明采集的病料为对虾白斑综合症病虾.

对虾白斑综合症的研究综述

对虾白斑综合症是由对虾白斑综合症病毒(whitespotsyndromevirusWSSV)引起的暴发性流行病。典型症状是病虾甲壳内侧出现0.5～2mm大小不等的白色斑点,此病病程短,死亡率高。白斑综合症病毒(WSSV)的形态结构与杆状病毒相似,杆状病毒分子分布于患病组织细胞核内。WSSV不仅水平传播,还存在垂直传播的可能性。到目前为上,诊断技术己较为进步,但尚无有效手段控制该病的发生。今后的研究重点在防治上。

人工饲料加工方法与疏毛率的关系

将家蚕人工饲料加工成不同的形状,并采用不同的方法进行灭菌和熟化。把同一蚕品种的蚁蚕收在预先准备好盛有上述饲料的培养皿内,饲育温度29℃,湿度95％,调查24h疏毛率,结果表明:灭菌方法对疏毛率影响不大,饵料形状对疏毛率影响较大,以片状为佳,条状次之,平板状最差。

杀虫剂溴氰菊酯对野桑蚕和家蚕的毒力比较

基于了解野桑蚕（Bombyx mandarina）和家蚕（Bombyx mori）对农用杀虫剂溴氰菊酯的抗药性差异，采用点滴法和浸叶法测定了溴氰菊酯对野桑蚕和家蚕的毒力，结果其毒力基本一致。野桑蚕和家蚕对溴氰菊酯的敏感度均较高，LD50在0．027～0.429ng／头之间，但吴江野桑蚕、启东野桑蚕和苏大野桑蚕的抗药性较相对敏感的家蚕品种大造、菁松、皓月强10．11～15．89倍，较家蚕品种L11强4．37倍。

家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂4(serpin-4)的基因克隆、原核表达和多克隆抗体制备

丝氨酸蛋白酶抑制剂4(serpin-4)为丝氨酸蛋白酶抑制剂家族中的一员。本研究旨在研制高效价的家蚕Bombyxmoriserpin-4多克隆抗体,为深入研究serpin-4基因的生理功能打下物质基础。首先于家蚕脂肪体中克隆了serpin-4基因,利用基因重组技术构建了pET28a-serpin-4原核表达载体,经IPTG诱导,获得原核表达重组融合蛋白,利用镍柱回收纯化技术,获得目的蛋白;经SDS-PAGE和抗His多抗检测,纯化蛋白的分子量大小与预测的一致,即获得了高纯度的目的蛋白,以此蛋白为免疫抗原,采用4次免疫方式对昆明小鼠进行抗原免疫,最终获得抗serpin-4的多克隆抗体血清;该血清经ELISA和Westernblot验证,效价达到1:20000,特异性较好。家蚕serpin-4多克隆抗体的成功制备,一方面表明应用于其他生物的多克隆抗体制备所采用的方法对于家蚕serpin基因的研究同样适用;另一方面,也为深入研究家蚕serpin-4的生理功能打下了物质基础。

中细纤度家蚕新品种“苏秀×春丰”的育成

利用杂交育种及系统选择的方法,育成了具有中细纤度特色的4眠性家蚕新品种苏秀×春丰。经江苏省家蚕新品种实验室鉴定和农村生产试验表明,新品种孵化、眠起、上蔟齐一。实验室鉴定成绩为万蚕茧层量、万蚕产丝量分别比对照品种菁松×皓月提高1.02%和1.28%,茧丝品质性状也优于对照品种,其中茧丝长1525m,解舒丝长1186m,解舒率77.78%,茧丝纤度2.646dtex,洁净93.94分。新品种具有茧丝纤度细、茧丝长、茧丝纤度综合均方差小的特色,适合缫制细纤度高品位生丝。2010年4月该品种通过江苏省蚕品种审定委员会审定,可作为华东地区优质原料茧生产的实用家蚕品种。

镉铅对家蚕茧质及血细胞DNA损伤的影响

利用4龄起家蚕,添食不同浓度的Pb2+、Cd2+重金属离子,研究其对家蚕茧质和DNA损伤的影响。结果表明,受Pb2+、Cd2+影响,实验组家蚕的全茧量、茧层量、茧层率均低于清水对照组;凝胶电泳显示,DNA链发生明显的梯状断裂现象。

家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin-6的克隆、序列分析和组织表达

本文利用RT-PCR和RACE方法,获得了家蚕Bombyxmori丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(serpin)的开放读码框(ORF)和5′UTR序列。根据该基因与其他昆虫serpin的同源性关系将其命名为家蚕serpin-6基因,GenBank登录号EU159447。为了研究serpin-6与家蚕免疫反应的相关机理,对serpin-6基因的组织表达和免疫刺激反应进行了研究。结果表明该基因在家蚕的头部和生殖腺中mRNA表达量非常高,在中肠,脂肪体,丝腺和血淋巴表达量较低。用脂多糖(LPS)刺激5龄第3d家蚕后,serpin-6基因在脂肪体和血淋巴中都被显著诱导表达,且都在刺激6h后表达量最高。推测该基因在家蚕细胞免疫反应中起着一定的作用。

国内消费者丝绸购买行为及消费意愿的调查研究

通过对全国100多个城市的1万多名消费者的丝绸消费行为及意愿调查,寻找扩大丝绸消费的途径与对策。首先介绍了调查的方法、对象及其结构;然后介绍了调查的内容、结果与分析;最后提出:国内消费者的丝绸消费行为存在较大差异;女性公务员、女性教师、高收入者以及年龄较高的是丝绸消费主要群体;我国丝绸市场仍然存在着巨大的消费潜力。因此,增加丝绸品类,改变经营策略和服务方式,加大宣传力度,是丝绸企业及其经营者扩大丝绸销售和刺激丝绸消费的主要途径与对策。

野桑蚕细胞色素P450家族CYP4M5基因的克隆和诱导表达

细胞色素P450单加氧酶系在生物体对外源化合物的代谢和内源化合物的调节中都起着非常重要的作用,昆虫对杀虫剂产生抗性与单加氧酶系介导的代谢反应有关。以野桑蚕(Bombyxmandarina)中肠为材料,依据家蚕(Bombyxmori)基因组P450基因预测序列设计一对引物,采用RT-PCR方法克隆了一个P450家族基因的cDNA序列,命名为CYP4M5(GenBank登录号:EU273876)。序列分析表明,野桑蚕CYP4M5基因编码区长度为1 512 bp,编码503个氨基酸,相对分子质量约为58 kD,等电点7.8。同源性分析表明该基因与家蚕CYP4M5的同源性最高,达97.42%。分析鉴定了该基因在野桑蚕各组织中的mRNA表达水平以及溴氰菊酯诱导24 h后mRNA的表达水平,结果显示:在正常野桑蚕幼虫体内,CYP4M5在脂肪体中的表达水平最高;野桑蚕经5 ng/μL溴氰菊酯药液处理后,CYP4M5在中肠和脂肪体中表达量分别增加1.1倍和4.4倍。推测该基因可能参与野桑蚕对杀虫剂的解毒代谢作用。

Pb^(2+)、Cd^(2+)混合添食对家蚕生长发育及细胞凋亡的影响

家蚕自3龄起添食单一和混合的Cd2+、Pb2+重金属溶液,观察并记录其生长发育状况,测量各时期体长,提取DNA并分析断裂情况。结果表明,添食Pb2+、Cd2+两种混合重金属离子的家蚕体型比单一添食相应含量Cd2+的大,其体长大于单一添食相同含量Pb2+、Cd2+的家蚕;单一重金属离子作用下的家蚕DNA发生明显的梯状断裂,出现细胞凋亡现象,而混合重金属诱导的家蚕细胞DNA完整,未发生凋亡现象,预示着竞争位点假说在家蚕体内的存在。