10-羟基喜树碱衍生物的合成及其抗肿瘤活性的初步研究

为提高10-羟基喜树碱在水中溶解性和稳定性,将其与丁二酸酐经酯化合成喜树碱衍生物—10,20(S)-O-二琥珀酰羟基喜树碱,所得衍生物经核磁共振氢谱表征,并用水浴搅拌法测定衍生物溶解度。采用MTT比色法检测衍生物对结肠癌细胞SW480的生长抑制,DNA片段化分析和Hoechst 33342染色检测其对结肠癌细胞株凋亡的影响。结果表明,衍生物在水中的溶解度(25℃)为2.3mg,比10-羟基喜树碱高21.8倍;肿瘤细胞的生长抑制作用呈剂量/时间依赖性,其半数抑制浓度(IC50值)为700nM;而琼脂糖凝胶电泳检测到典型的DNA梯状图谱,Hoechst 33342染色表明喜树碱类衍生物可诱导细胞凋亡。

三叶半夏凝集素C端结构域的可溶表达及其活性研究

利用pET-32-SUMO表达载体在大肠杆菌中可溶表达三叶半夏凝集素C端结构域(P-D2),并研究其凝血活性、糖结合特异性以及肿瘤抑制活性。实验结果表明,P-D2蛋白的产量为5mg/L。该蛋白具有凝集小鼠红细胞的活性,可以被D-甘露聚糖抑制,但不能被D-乳糖、D-葡萄糖、D-麦芽糖抑制。P-D2蛋白的体外抗肿瘤活性实验表明其对肝癌细胞Bel-7404以及结肠癌细胞SW-620都有良好的抑制作用。凋亡现象观察实验发现P-D2蛋白可以诱导癌细胞Bel-7404的凋亡。这是首次在大肠杆菌表达系统中表达了可溶的半夏凝集素C端结构域,为其他凝集素的可溶表达提供了新的选择。

复制缺陷型腺病毒PCA的构建及其对结肠癌细胞生长的影响

通过同源重组方式,利用Adeasy系统成功构建携带p14ARF基因的复制缺陷型腺病毒,命名为AdpShuttle-CMV-p14ARF(PCA),并研究其对结肠癌细胞株SW480及HT-29的杀伤作用。PCR方法鉴定阳性重组子病毒;MTT法检测PCA对细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化;结晶紫染色法定性分析PCA对两种结肠癌细胞的杀伤作用。结果显示:经目的病毒PCA作用,SW480及HT-29出现明显病变和生长抑制现象,并呈现出时间和浓度依赖性;Hoechst染色后观察到细胞内出现凋亡小体,并且数目随药物处理浓度的升高而增多。