盐酸小檗碱对人血红蛋白拟过氧化物酶活性的影响

目的明确盐酸小檗碱(berberine hydrochloride,BH)对人血红蛋白(hemoglobin,Hb)拟过氧化物酶(peroxidase,POD)活性的影响并分析其作用机制。方法采用紫外吸收光谱法测定Hb拟POD活性,确定最适pH和最适温度。采用不同浓度BH与Hb相互作用后测定POD活性,并通过Lineweaver-Burk双倒数作图判定其作用机制。采用荧光光谱法测定BH与Hb相互作用后荧光淬灭常数,判定荧光淬灭方式,计算结合位点数和结合常数。结果Hb拟POD活性发挥的最适pH为6.37,最适温度为38.4℃。BH与Hb相互作用后POD活性的米氏常数K_(m)和最大反应速度V_(max)均变小,K_(m)/V_(max)比值不变。荧光淬灭常数随温度升高而变小,即BH可静态淬灭Hb荧光。BH与Hb具有1个结合位点,在25、30、37℃下的结合常数分别为为8.63×103、8.25×10^(3)、7.39×10^(3)L/mol。结论BH可反竞争性抑制Hb拟POD活性。