植物乳杆菌melA基因的克隆及其作为食品级筛选标记的初步研究

以L.plantarum1.557的基因组DNA为模板,通过PCR技术成功克隆α-半乳糖苷酶基因(melA基因),与报道的melA基因序列同源性达到99%以上。再以大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pMG36e为基本骨架,将melA基因插入该载体,构建melA基因标记的穿梭表达载体pMG36e-melA。重组表达质粒pMG36e-melA经Sac I和Sph I双酶切和PCR鉴定与预期片段大小相符。结果表明已初步构建了以melA基因为食品级筛选标记的重组载体。

小提质粒快速排除假阳性克隆的新方法

对传统的小提质粒方法进行了简化,在15 min内提出重组子质粒,从而快速地排除不含质粒的假阳性菌落。为验证方法的可靠性,构建了7个重组子,并应用PCR方法进一步对筛选结果进行鉴定。结果表明:此方法简便、迅速、可靠、重复性好,适用于革兰氏阴性菌,可以先排除一部分假阳性克隆,缩小筛选范围。