人体寄生虫学在线教学评价体系的构建与应用

教学评价是人才培养质量监测工作的核心。新冠疫情期间,由于线上教学成为人才培养的主要手段,首都医科大学寄生虫学教研室在建设人体寄生虫学在线课程的同时,也建立了相应的在线教学评价体系。本文通过以课堂表现、课后思考题、阶段性单元测试、形态学绘图、设计性实验报告、虚拟仿真在线实验考核等形式为主的过程性评价和以期末在线考试为主的总结性评价相结合的方式对学生进行考核评价,并通过问卷调查反馈学生在线学习效果和教学改进意见。文章就线上教学评价体系的构建和应用的体会进行了总结,以期充分发挥教学评价的评定、反馈和督导功能,提升人才培养质量。

嗜酸性粒细胞在蠕虫感染免疫中的作用

嗜酸性粒细胞增多是蠕虫感染的重要特征。蠕虫造成的宿主上皮损伤能诱导2型免疫细胞的激活和分化。其中,嗜酸性粒细胞在细胞因子、趋化因子以及黏附分子的作用下发育成熟并募集到蠕虫感染部位,通过分泌一系列颗粒蛋白与免疫调节因子发挥免疫效应。本文就嗜酸性粒细胞和蠕虫之间关系的最新进展进行综述,探讨嗜酸性粒细胞对宿主的保护性免疫与病理损伤的两面性,及其对宿主机体的免疫调节作用。

云南和海南两省不同地区恶性疟原虫裂殖子表面蛋白2基因型的研究

目的 分析云南和海南两省恶性疟原虫的基因型及其分布。方法采用套式PCR法特异扩增MSP2基因中间多态区 ,对恶性疟原虫群体进行基因分型。结果 检测云南省 31例和海南省 2 9例恶性疟原虫患者血清 ,其中分别有 14和 18种不同的MSP2等位基因型 ,其等位基因株存在高度的多态性 ,基因片段大小及分布频率具有地区差异。海南省不同等位基因型虫株混合感染及多重感染现象比云南省严重。

旋毛虫钙网蛋白表达纯化及其与补体C1q互作位点的初探

旋毛虫钙网蛋白(Trichinella spiralis calreticulin,Ts-CRT)可以通过与宿主补体C1q互作后,帮助虫体逃避宿主补体系统介导的免疫杀伤。为研究Ts-CRT与C1q相互作用的分子结构基础,本研究首先通过分子克隆和亲和层析等方法获得了高纯度的重组蛋白Ts-CRT^(380);其次通过微量热涌动(microscale thermophoresis,MST)实验测定Ts-CRT^(380)与C1q相互作用能力;然后利用Discovery Studio软件模拟Ts-CRT与C1q的分子对接,分析Ts-CRT上参与互作的关键位点,并与4种蠕虫CRT相应位点进行序列比对,分析其保守性。结果显示,Ts-CRT^(380)与C1q解离常数K_(d)值为149μmol/L,证明二者存在中等强度的相互作用,Ts-CRT通过K145、W323、F77和K47等17个氨基酸残基与人源C1q互作,序列比对证实这17个氨基酸位点在5种蠕虫CRT中高度保守。本研究结合MST实验与生物信息学分析,获得了Ts-CRT与人源补体组分C1q的互作位点,有助于理解旋毛虫逃避宿主补体攻击的分子结构和机制;通过序列比对发现旋毛虫CRT与C1q互作位点在其他蠕虫CRT中高度保守,可为以CRT为靶点研制抗蠕虫新药提供依据。

用DNA限制性片段长度多态性鉴定中国旋毛虫3个分离株

以旋毛虫国际标准虫株Ｔ．ｓｐｉｒａｌｉｓ（Ｔｓ）、Ｔ．ｎａｔｉｖａ（Ｔｎ）和Ｔ．ｎｅｌｓｏｎｉ（Ｔｎｅ）作对照，利用限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）差异对分离自我国黑龙江省３株旋毛虫进行虫种归属鉴定。５种内切酶实验结果显示：黑龙江猪株（ＨＬ）与Ｔｓ酶切图谱相同；犬株（ＷＣ）与Ｔｎ酶谱相同；猫株（ＳＷ）与Ｔｎ的ＤｒａⅠ，ＰｓｔⅠ，ＨａｅⅢ酶谱相近，而与Ｔｎｅ酶谱差异显著。提示：黑龙江猪株系Ｔｓ；犬株系Ｔｎ；猫株在分类归属上似乎与Ｔｎ靠近。

旋毛虫成虫抗原基因的原核表达及表达产物的特性分析

目的 获得旋毛虫成虫抗原基因的原核表达产物并对其进行纯化及免疫特性分析。 方法 旋毛虫成虫Ts87基因片段亚克隆入 PET- 2 8a(+)表达载体 ,异丙基硫代 -β- D-半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。亲和层析和电洗脱法纯化表达产物 ,SDS- PAGE、 EL ISA和 Western blotting对表达产物进行分析鉴定 ,并将纯化的表达产物人工免疫兔。结果 SDS- PAGE结果显示 ,表达产物为分子量约为 4 0 k Da的重组蛋白。纯化后免疫兔获得高滴度的抗血清。该基因重组蛋白可被感染旋毛虫的猪、兔血清及人工免疫兔血清所识别 ,与感染囊尾蚴、棘球蚴的患者血清或感染日本血吸虫的兔血清不发生交叉免疫反应。 结论 获得一个新的旋毛虫成虫 Ts87基因重组蛋白 ,该蛋白具有特异的抗原性。

新型冠状病毒主蛋白酶及其抑制剂研究进展

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的传染性疾病,而主蛋白酶具有高度的序列保守性,在冠状病毒生命周期中起关键作用,是理想的抗病毒药物设计靶标。本文概述了SARS-CoV-2主蛋白酶的结构和催化反应机制,并根据主蛋白酶抑制剂结构和机制的不同,将已报道的抑制剂分为肽模拟抑制剂和非肽类小分子抑制剂两类,其中以Paxlovid为代表的肽模拟抑制剂,根据其基团可分为基于金属络合物类的Ebselen,基于亚硫酸氢盐类的GC376与GC373,基于醛类的钙蛋白酶抑制剂Ⅱ、Ⅻ和α酮酰胺类的化合物13a、13b。此外,非肽类小分子药物黄芩素也极具潜力。最后对主蛋白酶抑制剂的抗病毒活性、耐药性、稳定性和广谱性等进展进行综述,为广谱抗病毒药物的研发提供参考。

云南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1基因分型及测序

目的：确定云南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白１（ Ｍ Ｓ Ｐ １）基因分型和探讨 Ｍ Ｓ Ｐ １ 基因多态性的遗传及地理特征。方法：采用巢式 Ｐ Ｃ Ｒ法和引物标记周期反应测定法，对云南疫区恶性疟原虫群体 Ｍ Ｓ Ｐ１ 基因分型，并对代表株进行基因序列分析。结果：３０ 例云南恶性疟患者，检出３８ 个基因型虫株，其中 Ｍ Ａ Ｄ２０ 型是优势虫株， Ｋ１ 次之， Ｒ Ｏ３３ 最少，并存在不同基因株混合感染现象。扩增片段序列分析表明，云南疫区的 Ｍ Ａ Ｄ２０ 型、 Ｋ１ 型和 Ｒ Ｏ３３型均分别与国际上典型的 Ｍ Ｓ Ｐ１、 Ｍ Ａ Ｄ ２０、 Ｋ１ 和 Ｒ Ｏ ３３ 等位基因代表株具有高度的同源性。结论：以 Ｍ Ｓ Ｐ１ 为基因标记物的基因分型法，有助于掌握流行区疟原虫种群的基因特点、分布及流行特征。

套式PCR扩增特定SSrRNA基因片段诊断间日疟及混合感染的研究

根据间日疟原虫（Ｐ．ｖ．）小亚单位核糖体核糖核酸（ＳＳｒＲＮＡ）基因序列，设计并合成两对特异引物，采用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，扩增出一条长１２０个碱基对（ｂｐ）的间日疟原虫ＳＳｒＲＮＡ基因特定片段，并用于云南间日疟患者的血样检测。结果表明：该系统特异性强，除间日疟原虫外，恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）、三日疟原虫（Ｐ．ｍ．）及正常人血ＤＮＡ样本均无此扩增带出现。该系统检测原虫的敏感度为０．１个疟原虫／ｌμｌ血，大大高于常规镜检。在进行间日疟检测中，该系统与镜检的阳性符合率为１００％，更重要的是发现镜检漏诊的４例Ｐ．ｖ．和Ｐ．ｆ．的混合感染病例。鉴于该系统具有特异、敏感、稳定、简便的特点和鉴别疟原虫种类、判定混合感染等优点，故对疟疾的诊断。

套式聚合酶链式反应诊断恶性疟原虫及混合感染的研究

为了建立一种特异、敏感、简便的疟疾诊断方法，设计并合成两对针对恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）小亚单位核糖体核糖核酸（ＳＳＵｒＲＮＡ）基因特异的引物，采用套式聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，扩增恶性疟原虫ＳＳＵｒＲＮＡ基因特定片段。利用该系统诊断云南及海南疟疾患者血样，并随机选取扩增产物进行克隆测序鉴定。结果显示，恶性疟原虫模板均扩增出长度为２０５ｂｐ的特定基因片段，经Ｔ－载体克隆测序与恶性疟原虫ＳＳＵｒＲＮＡ特定基因片段序列完全符合。该系统特异性强，除恶性疟原虫外，间日疟原虫（Ｐ．ｖ．）、三日疟原虫（Ｐ．ｍ．）、卵形疟原虫（Ｐ．ｏ．）、正常人血ＤＮＡ样本及空白对照均无此扩增带出现。该系统检测原虫的敏感度为１．５个原虫／μｌ，大大高于常规镜检。６１份Ｐ．ｆ．镜检阳性标本在进行ＰＣＲ检测时亦均呈阳性，同时联合应用套式ＰＣＲ扩增间日疟原虫ＳＳＵｒＲＮＡ特定基因片段的检测系统，发现６１例恶性疟病人中２３例是Ｐ．ｆ．和Ｐ．ｖ．混合感染。该检测系统具有特异、敏感、稳定、简便的特点，对疟疾的诊断。

旋毛虫抗原基因Ts88的克隆及鉴定

目的 获取旋毛虫具有抗原性的新基因。方法 应用旋毛虫免疫血清和人工感染血清对旋毛虫成虫cDNA文库约 3× 10 5重组噬菌斑进行筛选。基因克隆、DNA测序及 5′ -RACE获cDNA全长 ;采用ESEE、DNAstar软件及核苷酸序列数据库 (GenBank)进行cDNA序列分析。结果与结论 免疫筛选成虫cDNA文库 ,获得 3个阳性克隆。其中的Ts88克隆cDNA全长为 196 6bp ,编码 4 84个氨基酸 ,含有一个PWWP功能结构域及多个抗原表位。Ts88cDNA是一个尚未见报道的旋毛虫抗原新基因。

不同疟区恶性疟原虫地理株谷氨酸富有蛋白基因R2区序列分析及分型

[目的 ]测定云南与海南两省不同疟区恶性疟原虫分离株谷氨酸富有蛋白 (GLURP)基因的部分序列及了解其分型。[方法 ]采用套式PCR方法特异性扩增GLURP基因R2区片段 ,并将该基因片段克隆于T载体 ,用双脱氧末端终止法测定不同长度的阳性克隆核苷酸序列 ,并应用DNAStar软件对云南与海南两省分离株GLURP基因及蛋白序列进行比较和分析。[结果 ]首次发现云南与海南两省恶性疟原虫至少存有 7个大小不同的GLURP等位基因型虫株 ,其基因片段变化范围为 6 0 0～ 15 0 0bp。不同分离株的GLURP基因R2区具高度保守性 ,其由编码 19～ 2 0个氨基酸的碱基的基本重复单位构成 ,该基因具有长度的多态性 ,表现在碱基基本重复单位的数目不同。序列分析结果表明 ,我国不同分离株之间或同一地区不同株之间GLURP基因及氨基酸序列具有高度的同源性 ,无明显的地理差异。 [结论 ]不同分离株GLURP基因结构的高度保守性及碱基重复片段数目的多态性 ,对研究疫苗候选抗原和建立疟原虫基因分型方法具有一定理论价值。

聚合酶链反应扩增谷氨酸富有蛋白基因片段应用于恶性疟原虫基因分型

目的：建立恶性疟原虫谷氨酸富有蛋白（ＧＬＵＲＰ）基因分型诊断鉴别系统。方法：设计并合成两对针对恶性疟原虫ＧＬＵＲＰ基因的特异引物，采用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，扩增ＧＬＵＲＰ基因Ｒ２多态区目的基因，并应用于泰国Ｂｏｒａｉ疟区恶性疟患者虫株基因分型。结果：在自然感染的恶性疟原虫株群中，ＧＬＵＲＰ基因存在明显的多态性。在１５４份恶性疟感染血样中，共检查出２９０个基因株，它们属于１２种ＤＮＡ片段长度不同的ＧＬＵＲＰ基因型；其中以７７０ｂｐ片段基因型较为常见，１１００ｂｐ片段基因型较少见。４３％以上病人为不同恶性疟原虫基因株混合感染者。在９个月的流行季节中，１２种不同基因株的频率构成比无明显变化。结论：建立ＧＬＵＲＰ基因分型诊断鉴别系统，将有助于疟原虫虫株分类和致病性研究，对疟疾的流行病学研究与防治具有实用意义。

加强《人体寄生虫学》教材建设的思考与展望

根据我国教育部和卫计委开展实施临床医学教育综合改革的思路,结合我国当前人体寄生虫疾病谱及其流行趋势的变化,以及信息技术的进步带来的医学教育革命等因素,本文从教材的内容、侧重点、种类及形式四个方面阐述了加强《人体寄生虫学》教材建设的设想和展望,以期进一步适应学科发展和高素质医学人才培养之需求。

旋毛虫成虫cDNA文库免疫筛选及序列分析

目的 为获得旋毛虫成虫抗原基因。 方法 应用免疫血清和人工感染血清对旋毛虫成虫cDNA文库进行免疫筛选、克隆测序及核苷酸序列数据库 (GenBank)查寻比较 ,采用DNAstar软件进行基因序列分析。 结果 免疫筛选成虫cDNA文库 ,获得 9个阳性克隆。对其中的Ts87进行测序 ,又采用 5′ RACE ,获取全长为 1172bp的cDNA片段 ,该基因编码 3 47个氨基酸。序列分析表明 ,克隆Ts87是个尚未见报道的旋毛虫基因序列 ,存在预测的抗原表位。 结论 获得具有抗原性的旋毛虫抗原新基因。

斑点-ELISA与平板-ELISA诊断脑囊虫病的敏感性比较观察

应用斑点-ELISA 和平板-ELISA 对52例脑囊虫病患者的血清进行抗体检测。结果显示,两种免疫方法诊断脑囊虫病的敏感性近似(阳性率分别为92.3%与90.4%);与40例正常人血清均无假阳性反应。但斑点-ELISA 具有节省抗原,操作简便,不需特殊仪器设备等优点,适用于临床诊断及流行病学调查。

旋毛虫成虫期特异性基因的筛选与序列分析

目的 获得旋毛虫成虫期特异性基因序列。方法 应用旋毛虫成虫期特异性探针对成虫cDNA文库进行杂交筛选、克隆测序及核苷酸序列数据库 (GenBank)查寻比较 ,采用DNAstar软件进行基因序列分析。结果 利用消减杂交 (subtractedhybridization)获得的旋毛虫成虫期特异性探针筛选成虫cDNA文库 ,获得一个长 16 2 9bp的基因。其开放阅读框架由 146 4个核苷酸组成 ,编码 487个氨基酸。序列分析表明 ,该序列是一个尚未见报道的旋毛虫基因序列 ,在 2 0 7～ 2 70位氨基酸间存在两个锌指结构 ,在 5 2～ 6 4,10 8～ 116 ,137～ 16 3,2 2 6～ 2 6 0位氨基酸处存在预测的抗原表位。结论 获得旋毛虫成虫期特异性基因 。

旋毛虫Ts87抗原的免疫学特性及保护性的初步研究

应用Westernblot和ELISA方法对纯化的重组蛋白PET 2 8a( + ) Ts87进行免疫学特性鉴定及保护性研究。Westernblot和ELISA结果显示 ,Ts87抗原可被人工感染旋毛虫的兔血清、病猪血清、病人血清及抗Ts87的兔血清所识别。Ts87抗原免疫BABL c小鼠 ,较对照组减虫率为 2 9% ,说明Ts87抗原可作为旋毛虫免疫诊断和疫苗的候选抗原。

套式PCR检测蚊体内疟原虫的敏感性与特异性

目的：分析套式聚合酶链反应技术检测蚊体内疟原虫的敏感性与特异性。方法：采用２对针对间日疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）的特异引物，利用套式ＰＣＲ技术，从蚊体ＤＮＡ样本中，扩增间日疟原虫ＳＳＵｒＤＮＡ片段，进行间日疟原虫的检测。结果：扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析，可见扩增出特异的约１２１ｂｐ大小的ＤＮＡ片段，估测每份蚊虫ＤＮＡ样本中含有３个以上子孢子或１００只蚊中含有１只阳性蚊即可得此片段，而对恶性疟原虫、食蟹猴疟原虫、约氏疟原虫及正常蚊虫ＤＮＡ不能扩增出此片段。结论：此法具有高度的敏感性和特异性。

旋毛虫Ts87重组蛋白诱发小鼠保护性免疫的研究

为了进一步探讨旋毛虫Ts87基因原核表达重组蛋白的保护性免疫作用 ,本试验用此纯化重组蛋白组分加福氏完全佐剂 (FCA)皮下注射免疫NIH小鼠 3次 ,继以旋毛虫感染性幼虫 2 5 0条攻击 ,攻击后每周取血清测抗体IgG滴度 ,第 35天计数小鼠肌肉幼虫数。结果显示重组蛋白免疫鼠的肌肉幼虫减虫率为4 2 3% ,血清抗Ts87重组蛋白体IgG的几何平均倒数滴度 (GMRT)达到 80 0 0以上 ,均显著高于佐剂组和对照组。