MTT法检测细菌细胞数的主要影响因素分析

MTT法是生物活细胞计数的灵敏、快速和便捷方法。报告对MTT法应用于细菌细胞数定量分析时的分析前培养时间、MTT反应时间、MTT剂量和检测波长等主要影响因素的分析结果,同时报告MTT反应产物溶解检测与直接检测,以及MTT法与平板菌落计数法定量检测的结果比较。结果如下:Formazan生成量与细菌活细胞数呈正相关,对数生长期变化最明显;MTT为0.25 mg/mL,反应2 h时吸光值与菌落数具有良好的线性关系(r=0.999 8);Formazan的最大吸收波长为570～580 nm;MTT反应产物溶解检测和直接检测结果经统计学分析无显著性差异(P>0.05);细菌细胞数在107～109 cfu/mL范围内,MTT法与菌落计数法定量结果呈现良好的线性关系(r≥0.991 7)。

一种简单准确的微生物活菌计数方法

目的:探讨微量点样法用于计数微生物活菌数的可行性。方法:分析了菌种、培养基和点样量对测定结果的影响,并与平板涂布法计数结果进行了比较和相关性及线性回归分析。结果:微量点样法的菌落生长特点受菌种、培养基和点样量的影响较小;活菌计数结果与平板涂布法相比,(1)对8种测试菌株(约108CFU/mL)均没有显著性差异(P>0.05);(2)对4种不同类型细菌(Escherichia coli,Pseudomonas aeruginosa,Streptococcus pneumoniae and Bacteroides fragilis,约107～109CFU/mL)均具有极显著的直线回归关系(P<0.01,n=5),其回归方程分别为y=1.0740x-0.4144(R2=0.9881),y=0.8100x+1.4789(R2=0.9977),y=1.1194x-0.7373(R2=0.9806),y=0.9107x+0.772(R2=0.9812)。结论:微量点样法简化了平板涂布法的操作过程,适应性广、准确性高,因此,是一种简单、经济的细菌活菌计数方法。