病毒疫苗效能评价方法的研究进展

病毒疫苗是通过激发机体的细胞免疫和体液免疫的能力 ,以及启动受染细胞的凋亡机制 ,进而抑制相应病毒的增殖扩散与致病。那么 ,对于病毒疫苗效能的评价也面临上述机制的再现与验证。所以 ,关于评价病毒效能的方法学研究发展很快。本文对新近有关评价病毒疫苗效能的方法学研究进展作了综述。

T7噬菌体表达巨细胞病毒PP65蛋白抗原的初步研究

目的利用噬菌体展示技术构建巨细胞病毒基质蛋白PP65的抗原,初步评价其抗原性。方法PP65的基因片段经酶切后,与T7噬菌体的基因组相应酶切位点结合,借助包装蛋白组装成为完整的噬菌体。PP65目的蛋白以融合蛋白的形式表达在T7噬菌体的头蛋白部位,每个噬菌体颗粒表面可表达5～15个拷贝。噬菌体可以在宿主细胞中快速繁殖,并且能够迅速裂解宿主细胞,使目的蛋白的富集达到很高的效率。人巨细胞病毒基质蛋白PP65可以激发机体强烈的免疫反应,运用T7噬菌体载体展示系统表达PP65的部分肽段,扩增噬菌体,以SDS-PAGE电泳和western-blot鉴定所表达的抗原特性。结果获得了重组T7-PP65噬菌体,通过鉴定,噬菌体表达在其头蛋白上的PP65抗原可以被天然PP65的单克隆抗体所识别。结论噬菌体展示技术可以有效地进行病毒蛋白抗原的表达,为抗原筛选和疫苗的研制提供科学依据。将PP65表达在T7噬菌体表面,可以研究其免疫原性及评估其作为疫苗的可能性。

肺炎支原体IgM抗体检测在小儿肺炎诊断中的应用价值

为探讨低效价颗粒凝集SERODIAS—MYCO Ⅱ试剂盒检测肺炎支原体-IgM抗体在小儿肺炎诊断中的应用价值,采用SERODIAS-MYCO Ⅱ试剂盒对146例疑似支原体肺炎患儿和36例非支原体肺炎患儿的血清,进行MP-IgM抗体检测,并与传统冷凝集试验进行比较。结果显示SERODIA-MYCO Ⅱ试剂盒有明显的特异性和敏感性,具有操作简便、快速等优点。因此,建议将SERODIAS-MYCO Ⅱ试剂盒列为支原体肺炎实验室诊断的常规检查。

血培养中常见病原菌及耐药性分析

目的 了解新华医院 3年血培养中分离菌株的构成比及耐药情况。方法 患者血培养标本经Bact/AlertTM血培养仪培养 ,分离所得菌株用Vitek 32全自动微生物分析 /药敏系统进行鉴定和药敏试验。结果 在46 5株菌株中 ,革兰阳性菌占 5 8.7%,革兰阴性菌占 38.1%,念珠菌属占 3.2 %。革兰阳性菌前 3位依次是凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和粪肠球菌。耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌 (MRSA)占金黄色葡萄球菌的6 4.7%,耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌 (MRCoNS)占凝固酶阴性葡萄球菌的 90 .2 %,无万古霉素耐药株。粪肠球菌对高浓度的庆大霉素和高浓度的链霉素的耐药率分别为 6 1.5 %和 46 .2 %。革兰阴性菌前 3位依次是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)菌株分别占 2 8.6 %和 34 .6 %。铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率为 12 .5 %。结论 对血培养中分离菌株进行耐药性监测很有必要 ,可以指导临床合理使用抗生素 ,同时为制定经验治疗方案提供依据。

肿瘤坏死因子α启动子基因多态性与巨细胞病毒感染所致婴儿肝炎综合征的关系

目的探讨血清肿瘤坏死因子α(TNFα)水平及TNFα启动子基因多态性与巨细胞病毒(CMV)感染所致婴儿肝炎综合征(NHS)的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清TNFα水平,同时应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测TNFα启动子基因多态性。结果在NHS患儿中,TNFα基因启动子区-308 G-A单碱基突变频率明显高于健康人群(P<0.01),在NHS患儿母亲中的突变频率也明显高于健康人群(P<0.01),在NHS患儿与NHS患儿母亲中的突变频率差异无显著性。NHS患儿血清TNFα水平[(1 164.00±576.00)pg/m l]显著高于正常同龄婴幼儿[(5.22±2.24)pg/m l,P<0.001];NHS患儿母亲血清TNFα水平[(822.60±506.00)pg/m l]显著高于正常健康成年人[(14.90±8.20)pg/m l,P<0.001],各组内TNFα基因型间TNFα水平比较差异均无显著性(P>0.05)。结论TNFα的基因启动子区-308单碱基多态性可能与NHS的易感性、发病及致病相关。

人巨细胞病毒pp65核酸疫苗的构建、表达与动物免疫效应

构建真核重组表达质粒PVAX1-pp65,通过对其表达产物的鉴定和免疫小鼠实验,探讨PVAX1-pp65载体对诱导免疫应答的效果及方式。用已构建的原核表达载体pp65-pet32a,经酶切后与DNA疫苗载体PVAX1连接,构建HCMVpp65核酸疫苗(PVAX1-pp65)。用脂质体法将其转染293细胞,经间接免疫荧光、免疫印迹试验来验证其表达的产物。同时,免疫小鼠后取其脾脏细胞,经流式细胞仪检测其CD4+和CD8+T细胞;并利用MTT法测定免疫小鼠的T细胞对ConA和重组pp65蛋白刺激后的增殖活性。结果显示构建的真核表达载体PVAX1-pp65,经测序验证其序列正确。体外转染实验结果表明转染重组质粒的细胞胞浆内呈现与特异性pp65单克隆抗体反应的颗粒状荧光产物,免疫印迹试验也显示重组质粒转染的细胞裂解物中有pp65蛋白条带。另外,免疫小鼠脾CD8+T细胞的含量明显高于对照组;免疫鼠脾细胞对重组pp65抗原蛋白的刺激后增殖反应明显。综上结果证实,成功地构建了HCMVpp65核酸疫苗,并能有效地表达,表达的蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性。HCMVpp65DNA疫苗可诱导小鼠产生针对HCMV的特异性细胞免疫应答,可作为一种有应用前景的核酸疫苗进一步深入研究。

壳聚糖纳米粒子携带反义增殖细胞核抗原寡核苷酸抑制血管移植后内膜增殖的实验研究

目的探讨壳聚糖纳米粒子携带反义基因在血管外科领域中的应用。方法雄性SPF级SD大白鼠54只,体重450～600g,随机分为实验组和对照组(n=27)。实验组取右侧颈静脉、颈动脉吻合口段灌注携带增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)的反义寡核苷酸(antisens oligo deoxy nucleotides,ASODN)粒子后,移植至同侧颈动脉;对照组用同样方法灌注生理盐水。取造模后血管通畅的48只大白鼠(n=24)分别于第1、2、3、4周超声多普勒监测血流动力学,取标本行免疫组织化学染色、Western blot蛋白印迹检测、血管壁组织病理变化检测等。结果两组的血栓形成率差异无统计学意义(P>0.05)。在4周的观察期内,代表增殖的PCNA蛋白印迹条带显示:实验组移植静脉、吻合口的浓度较对照组低。术后1、2、3及4周,实验组移植静脉PCNA阳性细胞指数分别为0.13%±0.11%,0.79%±0.28%,0.45%±0.29%,0.43%±0.25%,吻合口分别为1.90%±0.84%,2.11%±0.98%,2.48%±0.77%,2.17%±0.36%,较对照组明显减少(P<0.05);实验组移植静脉及吻合口的空腔面积分别为88.71±16.96、95.98±21.44、88.48±32.81、97.86±34.11μm2和41.49±3.34、45.15±11.65、46.27±8.90、51.62±8.85μm2,均较对照组大(P<0.05),实验组移植静脉、吻合口的内膜面积/中膜面积分别为22.73%±3.11%、32.40%±4.55%、45.14%±3.19%、45.70%±5.01%和41.49%±3.34%、45.15%±11.65%、46.27%±8.90%、51.62%±8.85%,均较对照组小(P<0.05)。最大血流速度比较,两组在第1周血流最大速度相似,后3周出现不同变化。对照组静脉移植段和吻合口的最大流速逐渐增加,在第3周达到最高,至第4周时降低;实验组静脉移植段和吻合口最大流速逐渐降低,在第3周达到最低,至第4周时升高。第4周实验组和对照组移植静脉段和吻合口最大流速均接近。各时间点两组内比较差异有统计学意义(P<0.05),组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论壳聚糖纳米粒子携带PCNA-ASODN能有效抑制血管移植后内膜细胞增殖,从而抑制新生内膜过度增厚。