地肤内生细菌对番茄灰霉病菌的拮抗作用

从植物内生细菌中筛选拮抗活性菌株和寻找新的农用活性代谢产物,可为植物病害防治提供新的资源。本研究从地肤中分离筛选得到5株对番茄灰霉病菌具有抑制作用的内生细菌,其中D-29菌株对在离体番茄上对灰霉病菌具有强烈的抑制作用。D-29发酵液、细菌悬浮液、无菌滤液在离体红番茄上对灰霉病抑制率分别为64.61%、61.50%、44.10%。发酵液在离体青番茄上对灰霉病菌的抑制率4d时为100%、6d时为67.11%。D-29菌株可使灰霉病菌部分菌丝顶端生长畸形,胞内物质外泄,产孢梗畸形。用不同浓度的D-29无菌滤液处理病菌孢子,100%D-29无菌滤液抑制效果最明显,抑制率高达80%。

枯草芽孢杆菌D-29拮抗作用及其抗菌蛋白特性研究

枯草芽孢杆菌D-29是从地肤根内分离获得的一株生防细菌,为进一步了解D-29的生防特性,采用平板对峙法测定其抑菌谱并对其抑菌蛋白进行了研究。结果表明,该菌对番茄灰霉病菌、玉米大斑病菌等11种植物病原真菌均具有抑制作用,其中对玉米大斑病菌的抑菌效果最好,抑制率为54.6%;确定80%饱和硫酸铵为最佳盐析饱和度,获得的粗提蛋白耐高温,对有机溶剂和紫外光照不敏感,耐酸不耐碱。

欧李酸腐病病原菌鉴定及其生物学特性研究

对欧李上一种新病害欧李酸腐病进行了病原菌鉴定并对病原菌生物学特性进行了研究。欧李酸腐病发生在欧李果实成熟期,果实腐烂变酸,病部产生白色霉层。病原菌在PDA培养基上呈白色粉状,分生孢子长筒形、末端钝圆,大小为4.5～10μm×3.3～7.5μm,根据病原菌的形态特征将其鉴定为白地霉(Geotrichum candidum)。生物学特性研究结果表明该菌生长的适宜温度范围为20～30℃,最适温度为25℃,最适pH为6～7,12h光暗交替条件下生长最快,适宜生长的最佳碳源为葡萄糖和果糖,最佳氮源为牛肉浸膏。

枯草芽孢杆菌D-29菌株发酵条件的优化

枯草芽孢杆菌D-29是一株具有广谱抑菌活性的生防菌株。对D～29菌株发酵条件进行了优化，结果表明，最佳初始培养基配方为：玉米粉10g，麦芽糖30g，碳酸钙1．5g，豆粉30g，水1000mL；最佳培养条件为：250mL三角瓶装液量100mL，初始pH值为7，接菌量1％，培养温度28℃，培养时间48h，转速170--190r／min。

DNA条形码技术在植物检疫中的应用探究

目前,植物检疫在分子生物学上的应用技术主流是实时荧光定量PCR技术及DNA条形码技术,其中,DNA条形码技术一直是近几年来的研究热点,其因高效、快速、准确的性能而被学者重视,基于此,就DNA条形码技术在植物检疫上的应用进行研究。

食品安全抽样过程中发现的问题及对策

近年来,食品安全问题成为民众及国家都较为关注的一个问题,对此国家及各省每年都会组织食品安全抽样检测来监管食品安全问题。抽样是食品抽检中至关重要的一个环节,食品抽样工作必须保证抽样的规范性及食品的代表性,否则就会产生很大的风险。因此,在食品抽样过程中,应严格规范食品抽样工作,做好风险控制。

单核细胞增生性李斯特菌LAMP-浊度/荧光检测方法的建立

将环介导等温扩增技术(LAMP)分别与浊度信号检测系统(turbidimeter)和荧光信号检测系统(fluorescence)相结合,建立了LAMP-浊度/荧光单核细胞增生性李斯特菌检测方法。选择单核细胞增生性李斯特菌保守毒力基因iap序列,通过环介导等温扩增引物设计在线软件设计4条特异性引物,进行反应条件的优化,并对建立的LAMP的特异性和灵敏度进行评价分析。结果表明,构建的LAMP-浊度信号检测方法优化后的扩增温度为61℃,菌液最低检测浓度为22.1 CFU/mL,灵敏度是普通PCR扩增方法的10倍;LAMP-荧光信号检测方法优化后的扩增温度为64℃,菌液最低检测浓度为2.21 CFU/mL,灵敏度是普通PCR扩增方法的100倍;建立的两种LAMP方法的特异性良好,其中1株单核细胞增生性李斯特菌标准菌株和1株本试验分离保存的单核细胞增生性李斯特菌检测结果均为阳性,8株非单核细胞增生性李斯特菌检测结果均为阴性。利用两种LAMP方法对630份肉类及其制品、人工污染样品等进行检测,检出45个LAMP阳性,与国标法(GB)检测结果一致。结果表明,建立优化的单核细胞增生性李斯特菌LAMP-浊度/荧光检测方法具有快速、特异、灵敏等特点,特别适用于基层兽医、食品及口岸一线部门对单核细胞增生性李斯特菌快速筛查工作。

志贺氏菌可视浊度/荧光环介导等温扩增方法的建立

为给实验室和现场检测提供一种快速且易于操作的志贺氏菌检测方法,通过将LAMP技术分别与荧光检测技术和浊度检测技术相结合,建立了灵敏、特异、准确的可视浊度/荧光环介导等温扩增(LAMP)检测方法。根据志贺氏菌基因保守序列,利用LAMP在线软件设计4条最佳引物,通过优化反应温度,分别建立了可视浊度环介导等温扩增检测方法(LAMP-浊度)以及可视荧光环介导等温扩增检测方法(LAMP-荧光),并分析所建立的两种方法的特异性和灵敏度。结果显示:所建立的LAMP-浊度方法最适反应温度是63℃,菌液灵敏度为13.6 cfu/mL,是普通PCR方法的10倍;所建立的LAMP-荧光方法最适反应温度是64℃,菌液灵敏度为1.36 cfu/mL,是普通PCR方法的100倍。利用4株志贺氏菌和10株非志贺氏菌,证实了建立的两种可视化LAMP方法具有良好的特异性。通过环介导等温扩增技术分别与浊度检测技术和荧光检测技术相结合,使其完成时间缩短至1 h内,整个扩增过程可实时监测,并可避免由于开盖加染料而导致的假阳性。

葡萄扇叶病毒RT-LAMP检测方法的建立

葡萄扇叶病毒(grapevine fanleaf virus,GFLV)是侵染葡萄的主要病毒之一,严重影响葡萄的产量和品质。该病毒的传统检测方法操作复杂、耗时长,本研究利用反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术,建立葡萄扇叶病毒的RT-LAMP荧光快速检测方法。研究结果显示,新建的GFLV RT-LAMP检测方法最适检测温度为64℃,在60 min内可完成反应,灵敏度为普通RT-PCR方法的10倍,且特异性良好。用GFLV的RT-LAMP方法对葡萄基地采集的90份葡萄叶片样品进行检测,结果与普通RT-PCR方法检出一致。说明建立的葡萄扇叶病毒RT-LAMP检测方法有快速、便捷、特异性强、灵敏度高的特点,可供海关检疫、植保站、实验室及其他机构使用。