姜黄素对脂多糖诱导炎症致软骨细胞凋亡及增殖能力的影响

背景:在骨关节炎的相关研究中,姜黄素被证实具有抗炎抗氧化及抗凋亡的作用,但相关机制的研究还不够深入。目的:探讨姜黄素对脂多糖诱导的软骨细胞凋亡、增殖的影响,以及潜在的作用机制,为治疗骨关节炎疾病提供新思路。方法:取4周龄SD大鼠,进行软骨细胞的体外分离培养,甲苯胺蓝染色进行细胞鉴定。采用脂多糖诱导法建立体外软骨细胞炎症模型。将软骨细胞分为5组:对照组(普通培养基);模型组(含5μg/L脂多糖培养基);低剂量姜黄素组(含5μg/L脂多糖+5μmol/L姜黄素培养基);中剂量姜黄素组(含5μg/L脂多糖+10μmol/L姜黄素培养基);高剂量姜黄素组(含5μg/L脂多糖+20μmol/L姜黄素培养基)。培养24h后,ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素1β和转化生长因子α的水平;流式细胞仪检测细胞凋亡状况;MTT法进行细胞增殖检测;Western blot法检测自噬相关蛋白及ERK1/2的表达变化。结果与结论:(1)经脂多糖诱导处理的软骨细胞上清液中白细胞介素1β和转化生长因子α的水平均显著高于对照组(P <0.01),各姜黄素组细胞上清液中白细胞介素1β和转化生长因子α的水平较模型组显著降低(P <0.05,P <0.01),且呈剂量依赖性;(2)经24 h培养后,模型组细胞凋亡率显著高于对照组(P <0.01),与模型组相比,各姜黄素处理的细胞凋亡率有所降低,且20μmol/L姜黄素处理的细胞凋亡率降低最为显著(P<0.01);(3)MTT法检测结果显示,与对照组相比,模型组细胞增殖能力显著降低(P<0.01);与模型组相比,经不同浓度的姜黄素处理细胞后,细胞的增殖能力得以恢复,且20μmol/L姜黄素处理的细胞恢复效果最好;(4)Western blot法检测结果显示,与模型组相比,各姜黄素组细胞自噬能力明显增强,自噬标志物LC3-II及相关蛋白Beclin-1表达量均显著升高(P <0.05,P <0.01),且p-ERK1/2蛋白表达量显著升高(P <0.05);(5)结果提示,20μmol/L姜黄素能显著缓解脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应,抑制软骨细胞凋亡,并对脂多糖诱导的炎症软骨细胞增殖抑制具有一定的拮抗作用,这可能与姜黄素通过ERK1/2途径激活的自噬分子调控紧密相关。

关节镜技术对膝关节结核的诊疗分析

目的探讨运用关节镜技术对膝关节结核进行诊疗的价值与疗效。方法对2012年1月至2017年5月我科收治的13例膝关节结核病人进行回顾性分析,其中男4例,女9例,年龄为25~64岁,平均年龄为(44.3±12.1)岁;术前均行抗结核药物治疗3~4周;行关节镜检查、清理术,术中取病变组织送病理检查;术后续行抗结核药物治疗。收集并比较13例病人术前及随访时的美国特种外科医院(the American hospital for special surgery,HSS)膝关节评分以及红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)。结果经术中所见及术后病理结果,本组确诊为膝关节滑膜结核7例,骨结核4例,全膝关节结核2例。13例病人随访6~36个月,平均(19.5±4.7)个月。1例骨结核病人因未遵医嘱,未进行规范抗结核治疗及规律复查,术后病情迁延并沿原手术切口形成窦道,经二次手术和术后抗结核治疗后窦道愈合;其他病人病情均无复发,疗效良好。末次随访时,13例病人的HSS膝关节评分值及ESR值均显著优于术前,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论关节镜技术对于膝关节结核的诊断与治疗均具有重要意义,合理的围术期处理以及术后规范抗结核治疗可以获得良好的治疗效果。

姜黄素通过调控脂多糖诱导的炎症抑制软骨细胞凋亡

目的探讨姜黄素通过调控脂多糖(LPS)诱导的炎症抑制软骨细胞凋亡。方法取4周龄SD雌性大鼠,分离原代软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定细胞。将软骨细胞分为对照组、模型组及姜黄素低、中、高剂量组,除对照组外,其他组均采用LPS诱导软骨细胞炎症模型。姜黄素低、中、高剂量组分别加入5、10、20μmol/L姜黄素干预24 h。Hoechst 33258染色观察细胞形态及凋亡情况;流式细胞术检测细胞线粒体膜电位以及ROS水平;生化测定细胞内ATP浓度;Western blot检测Bcl⁃2、Bax、Cyt⁃c、caspase⁃3、caspase⁃9表达。结果模型组软骨细胞凋亡增加,线粒体膜电位降低,ATP浓度下降,ROS水平升高,Bcl⁃2蛋白表达下降,而Bax、Cyt⁃c、caspase⁃3及caspase⁃9蛋白表达均升高(P<0.05)。姜黄素干预后,细胞凋亡减少,线粒体膜电位及ATP浓度均升高,ROS水平降低,Bcl⁃2表达升高,Bax、Cyt⁃c、caspase⁃3及caspase⁃9蛋白表达降低(P<0.05),呈现出剂量依赖性。结论姜黄素可改善线粒体功能故障,通过调控线粒体介导的内源性途径抑制LPS诱导的炎症软骨细胞发生凋亡。

机器人辅助定位股骨隧道在内侧髌股韧带重建术中的应用

目的探讨机器人辅助定位股骨隧道在内侧髌股韧带(MPFL)重建术中的应用效果。方法回顾性分析2019年1月至2022年1月武汉市第四医院运动医学科收治的36例复发性髌骨脱位需行MPFL重建术的患者资料。男15例,女21例;年龄23.5(18.3,29.0)岁;脱位次数2.5(2.0,3.0)次。根据在MPFL重建术中是否使用机器人辅助定位将患者分为观察组(17例,采用机器人辅助定位股骨隧道重建MPFL)和对照组(19例,采用C型臂X线机术中透视定位股骨隧道重建MPFL)。比较两组患者的手术时间、导针定位次数、术后1 d疼痛视觉模拟评分(VAS)、术后1~3 d的髌骨倾斜角(PTA)、术后1~3 d的股骨隧道中心点与股骨理想Schöttle点的距离,以及末次随访时的膝关节功能Lysholm的膝关节主观评分、国际膝关节评分委员会(IKDC)评分等。结果两组患者术前一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。所有患者术后随访12.0(10.3,13.0)个月。观察组患者的手术时间[(64.1±16.7)min]、导针定位次数[1.0(1.0,2.0)次]、疼痛VAS[2.5(2.0,3.0)分]、股骨隧道插入点与理想插入点间的距离[(4.7±1.2)mm]显著优于对照组患者[(84.2±19.7)min、3.0(2.0,4.0)次、3.5(3.0,4.0)分、(6.1±1.2)mm],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组患者的PTA、Lysholm评分、IKDC评分与对照组患者比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论机器人辅助定位股骨隧道在MPFL重建术中能够获得满意的疗效。与C型臂X线机术中透视定位相比,机器人辅助定位能够减少导针定位次数,减轻患者术后疼痛程度,提高建立股骨隧道的精准度和效率。

可注射型肌腱干细胞-壳聚糖水凝胶促进兔肩袖腱-骨愈合的实验研究

目的探讨以壳聚糖(chitosan,CS)负载肌腱干细胞(tendon-derived stem cells,TDSCs)构建的可注射型水凝胶(以下简称TDSCs/CS水凝胶)促进兔肩袖腱-骨愈合的效果。方法取3只成年新西兰大白兔肩袖组织,采用Henderson分步酶消化法分离培养TDSCs,并经多向分化及流式细胞术鉴定。以CS包裹第3代TDSCs构建TDSCs/CS水凝胶,体外培养1~5 d以细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测水凝胶中TDSCs增殖情况,并以单纯TDSCs作为对照,评估TDSCs/CS水凝胶细胞相容性。另取36只成年新西兰大白兔,随机分为3组(n=12),分别为肩袖修复组(对照组)、肩袖修复+CS水凝胶注射组(CS组)、肩袖修复+DSCs/CS水凝胶注射组(TDSCs/CS组)。3组建立肩袖损伤+单排技术修复模型后,CS组及TDSCs/CS组将对应水凝胶注入腱-骨界面处修复肩袖,对照组不作其他处理。术后观察动物一般情况,于4、8周取材,实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测腱-骨界面成肌腱相关基因(腱调蛋白、转录因子),成软骨相关基因(蛋白聚糖、性别决定区Y框蛋白9),成骨相关基因(ALP、人Runt相关转录因子2)表达;另于8周取材行HE、Masson染色观察并行组织学半定量评分,生物力学测试修复肩袖极限载荷和失效部位,评价组织愈合情况和生物力学特性改变。结果CCK-8法检测示共培养后CS水凝胶可促进TDSCs增殖(P<0.05)。术后各组动物均存活至实验完成。术后4、8周,TSDCs/CS组的成肌腱、成软骨、成骨相关基因相对表达量均高于CS组和对照组(P<0.05),TSDCs/CS组组内术后8周上述基因相对表达量亦高于术后4周(P<0.05)。组织学染色示TDSCs/CS组腱-骨界面处有清晰的软骨组织和致密有序胶原形成,半定量分析结果示TDSCs/CS组与对照组相比,细胞数量、胶原纤维分布以及组织学评分增高(P<0.05),血管数量降低(P<0.05);TDSCs/CS组与CS组相比,胶原纤维分布以及组织学评分均增高(P<0.05),而细胞数量、血管数量差异无统计学意义(P>0.05)。生物力学检测示所有样本测试过程中均在修复部位失效,TDSCs/CS组极限载荷高于对照组(P<0.05),但与CS组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论TDSCs/CS水凝胶可以诱导兔肩袖肌腱和骨之间的软骨再生,促进腱-骨愈合。

后交叉韧带胫骨撕脱骨折两种固定的比较

[目的]比较螺钉与双排锚钉缝线桥固定后交叉韧带胫骨止点骨折的临床疗效。[方法]回顾性分析2016年1月—2021年12月在本院手术治疗的72例急性后交叉韧带胫骨止点骨折患者的临床资料。依据骨折情况,43例采用切开复位松质骨螺钉垫圈固定(螺钉组),另外29例采用切开复位双排锚钉缝线桥固定(缝线桥组)。比较两组围手术期情况、随访及影像结果。[结果]两组均顺利完成手术,均无神经、血管损伤等并发症。螺钉组手术时间显著少于缝线桥组[(53.8±10.1)min vs(65.2±11.1)min,P<0.05],两组切口长度、术中透视次数、术后引流量、下地时间、切口愈合等级、住院时间的差异均无统计学意义(P>0.05)。随访时间平均(12.6±2.9)个月,两组恢复完全负重活动时间的差异无统计学意义(P>0.05)。术后随时间推移,两组VAS、Lysholm和IKDC评分,以及膝ROM和后抽屉试验均显著改善(P<0.05),相应时间点,两组间上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。影像方面,对于骨折块横径>10 mm亚组,两组复位均为优,但对于骨折块横径≤10 mm亚组,缝线桥组骨折复位质量显著优于螺钉组[优/良/差,(21/0/0)vs(13/2/2),P<0.05]。两组骨折愈合时间和K-L分级的差异均无统计学意义(P>0.05)。[结论]螺钉和双排锚钉缝线桥固定后交叉韧带胫骨撕脱骨折均可取得较好的临床效果,但对于骨折块横径≤10 mm或者粉碎性骨折,建议行双排锚钉缝线桥固定可取得更好的骨折固定效果。

膝弥漫型色素绒毛结节性滑膜炎四种治疗比较

[目的]比较四种不同治疗方法治疗膝关节弥漫型色素绒毛结节性滑膜炎(pigmented villonodular synovitis, PVNS)的临床疗效。[方法]回顾性分析2010年1月—2019年12月在本院治疗的52例膝关节弥漫型PVNS患者的临床资料,根据术前医患沟通结果,8例采用关节镜滑膜切除(arthroscopic synovectomy, AS),22例采用关节镜滑膜切除辅助术后放疗(AS+postoperative radiotherapy, ASRT),5例采用关节镜结合后路开放滑膜切除(AS+posterior open synovectomy, ASPO),17例采用关节镜结合后路开放滑膜切除和辅助术后放疗(AS+posterior open synovectomy+postoperative radiotherapy, APRT)。比较四组围手术期情况、随访和影像资料。[结果] AS组与ASRT的手术时间、切口总长度、术后引流量、下地行走时间、住院时间均显著优于ASPO和APRT组(P<0.05)。所有患者均获随访25~118个月,平均(59.8±20.2)个月。AS组和ASRT组恢复完全负重活动早于ASPO组和APRT组(P<0.05)。与术前相比,末次随访时四组患者VAS评分均显著降低(P<0.05),而Ogilvie-Harris评分显著增加(P<0.05)。相应时间点,四组间VAS评分的差异无统计学意义(P>0.05)。末次随访时Ogilvie-Harris评分由高至低依次为:ASRT组>APRT组>AS组>ASPO组,差异有统计学意义(P<0.05)。MRI影像评估方面,与术前相比,末次随访时四组关节积液均显著减少(P<0.05);PVNS复发率,由高至低依次为ASPO组3/5 (60.0%)>AS组3/8 (37.5%)>APRT组1/17 (5.9%)>ASRT组1/22(4.6%),差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]对膝关节弥漫型PVNS,位于关节内,建议行关节镜手术,侵袭至关节外者,建议行关节镜结合后路开放滑膜切除手术。两者通过术后辅助低剂量放疗,均可降低复发率。

关节镜下“人”字缝线固定治疗后交叉韧带胫骨止点撕脱骨折

目的探讨关节镜下“人”字缝线固定治疗后交叉韧带（PCL）胫骨止点撕脱骨折的疗效。方法回顾性分析2013年1月至2014年12月期间收治的17例PCL胫骨止点撕脱骨折患者资料。男11例，女6例；年龄为21～57岁，平均38．7岁。骨折按Meyers—McKeever分型：Ⅲ型11例，Ⅳ型6例。术中将缝线在骨折块腱骨结合部打结后呈“人”字形向骨折块远端经胫骨平台后方的2个骨道穿出，通过在胫骨平台前方骨桥上打结来实现骨折块的复位与加压固定。记录患者的疼痛视觉模拟评分（VAS）、膝关节Lysholm评分、胫骨平台后向移位KT-2000值及术后并发症的发生情况。结果17例患者术后获7～19个月（平均13．5个月）随访。术后1～2个月（平均1．3个月）X线片示骨痂形成，无骨折复位丢失现象发生。末次随访时所有患者骨折均获骨性愈合，膝关节平均活动范围：伸直2．0°±3．5°，屈曲134．2°±12．5°；膝关节Lysholm评分平均为89．3分（83～95分）；屈膝90°时胫骨平台最大力下后向移位KT-2000值平均为1．5mm（0．5～5．3mm）。1例患者术后发生胫后深静脉血栓形成，2例患者胫骨平台后向移位〉5mm。结论关节镜下“人”字缝线复位固定技术能有效复位和固定PCL胫骨止点撕脱骨折，恢复PCL的张力，提高胫骨平台的后向稳定性，减少继发性骨性关节炎的发生，疗效良好。

关节镜下自体阔筋膜补片桥接治疗巨大肩袖撕裂的疗效

目的探讨自体阔筋膜补片桥接技术在巨大肩袖撕裂中的应用及其疗效。方法采用回顾性病例对照研究分析2016年3月至2018年3月武汉市第四医院收治的37例巨大肩袖撕裂患者临床资料,其中男17例,女20例;年龄55~73岁[(65.3±5.6)岁]。左肩15例,右肩22例。病程6~24个月[(8.3±2.1)个月]。18例行关节镜下自体阔筋膜补片桥接肩袖修复手术(补片组),19例行关节镜下肩袖缝合手术(缝合组)。比较两组手术时间、术后3 d疼痛视觉模拟评分(VAS)、切口并发症、术前及术后6,12,24个月肩关节功能Constant评分、美国肩肘外科协会(ASES)评分及术后肩袖愈合与再撕裂情况。结果患者均获随访24~37个月[(28.5±58)个月]。补片组手术时间[(120.9±21.0)min]较缝合组长[(101.8±16.0)min](P<0.01)。术后3 d补片组VAS[(7.1±1.4)分]优于缝合组[(8.2±1.3)分](P<0.05)。均无切口感染、切口疝、神经损伤等并发症。两组术前Constant评分和ASES评分差异均无统计学意义(P>0.05);术后6,12,24个月,补片组肩关节功能Constant评分分别为(64.3±12.4)分、(90.2±7.9)分、(92.1±6.0)分,缝合组分别为(50.3±9.0)分、(84.7±5.6)分、(84.6±5.9)分(P<0.01或0.05);补片组ASES评分分别为(69.6±8.2)分、(89.3±8.5)分、(93.6±5.0)分,缝合组分别为(60.1±8.4)分、(84.9±3.6)分、(90.1±4.3)分(P<0.01或0.05)。复查MRI显示补片可与肌腱、大结节良好愈合,补片组有5例出现再撕裂,包括4例撕裂位于补片与肌腱残端缝合处,1例位于大结节处;缝合组有7例出现缝合部位再撕裂。结论相比于关节镜下直接缝合,采用关节镜下自体阔筋膜补片桥接修复巨大肩袖撕裂,虽手术时间更长,但术后早期疼痛更轻,中远期肩关节功能恢复更好,是一种安全有效的治疗方法。