纳米免疫磁颗粒检测大肠埃希菌O157：H7

目的制备一种表面包被有大肠埃希菌O157：H7多克隆抗体的纳米级葡聚糖免疫磁颗粒,在检测大肠埃希菌O157：H7的同时,对磁颗粒的应用条件进行优化。方法FeCl3和FeCl2在氨水条件下与葡聚糖反应生成纳米葡聚糖磁颗粒,利用高碘酸钠将其氧化后,在表面包被上大肠埃希菌O157：H7多克隆抗体,制成纳米免疫磁颗粒进行检测。结果该方法可在15 min内完成对样品的分离,检测限为101CFU/ml甚至更少,当样品中含有108CFU/ml的杂菌时,检测限为101-102CFU/ml,杂菌对检测结果影响甚微。结论利用纳米级葡聚糖免疫磁颗粒分离目的菌是一种灵敏度高、特异性强、操作简便的有效方法。

葡聚糖纳米磁颗粒的制备及表征

目的制备一种性能良好的葡聚糖纳米磁颗粒，为磁颗粒的进一步应用奠定基础。方法采取化学沉降法制备6种磁颗粒，利用透射电镜和扫描电镜、光子相关光谱法、Benedict实验及红外吸收光谱法等仪器和方法对磁颗粒的理化性质进行了检测。结果制备出一种粒径约为50nm，磁性核心为5nm，大小均一，具有核壳结构和超顺磁性颗粒（剩磁Br=0．375emu·g^-1）；在pH4—10范围内颗粒结构都能保持稳定，保存1年检测结果无明显变化。结论成功制备出葡聚糖纳米磁颗粒，该磁颗粒具有很好的悬浮稳定性和磁响应性。

快速检测大肠埃希菌O157∶H7免疫层析试纸条的研制

目的建立一种快速、特异性强、方法简便和经济实用的检测大肠埃希菌O157：H7的免疫学方法。方法微波炉法制备胶体金，自制的大肠埃希菌O157：H7多克隆抗体包被胶体金制备探针，通过免疫渗滤法检测大肠埃希菌O157：H7。结果制备的胶体金颗粒均一、稳定性好，此法检测的灵敏度为3．1×10^6CFU／ml，特异性强，假阳性革为2．5％，检测时间只需3，5min。结论该方法简单、快速，无需特殊的仪器设备，适合现场检测之用。

压电石英晶体生物传感器在微生物检测中的应用

压电石英晶体生物传感器是利用压电石英晶体振荡频率对表面质量负载的高敏感性与生物敏感元件特异选择性相结合的一种新型装置。其工作原理可分为:通过测量晶体振荡频率变化来测量晶体表面质量变化的质量效应传感理论;通过测量晶体振荡频率变化来测量晶体所处体系的密度、黏度、电导率等的变化以实现待测物检测的非质量效应传感理论。另外着重介绍了压电传感器在细菌、病毒、寄生虫等微生物检测中的应用。

高速公路车速与交通安全

从运行车速、超速行驶、速度差以及限速等与车速有关的方面分析了车速与交通安全的关系,得出了相关的结论。

好氧异养硝化菌Acinetobacter sp. YY-5的分离鉴定及脱氮机理

通过异养硝化培养基获得一株高效脱氮细菌,并通过形态学特征、生理生化反应及16S rDNA同源性比较对筛得菌株进行了鉴定;分别以NO3--N和NO2--N为唯一氮源,通过对脱氮过程中各种含氮代谢物的定量及对脱氮相关基因氨单加氧酶基因(amoA)、羟胺氧化酶基因(hao)、周质硝酸盐还原酶亚基基因(napA)的扩增及测序比较,对该菌株的生理途径及脱氮机理进行了研究.结果表明,高效脱氮细菌YY-5不能发生好氧反硝化,但能在3d内将氨氮由95.23mg/L降解至1.29mg/L,降解率达到98.6%,同时未发现亚硝酸盐氮、硝酸盐氮积累;对该菌主要代谢气体产物进行检测,发现CO2和N2明显增多,无N2O生成;经鉴定,初步判定该菌为不动杆菌属,命名为Acinetobacter sp. YY-5;从该菌基因组中均能扩增出amoA、hao、napA等基因,其中napA与hao基因与已报道的napA与hao基因进行Blast比较,发现具有较大差别.

1994-2003年我国766起细菌性食物中毒分析

目的探讨我国细菌性食物中毒的发生规律和流行特点,为预防细菌性食物中毒的发生提供参考。方法将检索的1994-2003年766起细菌性食物中毒个案按照中毒种类、中毒人数、死亡人数、中毒时间、地域分布、中毒场所、中毒食物、中毒原因等方面从其中提取信息,然后将相关内容逐一归类详细分析。结果766起细菌性食物中毒以副溶血性弧菌发生的起数最多,占20.2%;中毒人数以沙门菌所占比例最大,占20.4%;肉毒梭菌引起的死亡人数最多,占70.5%,引起的死亡率也最高,达16.5%;大多数细菌性食物中毒发生在5月至10月,但肉毒梭菌引起的食物中毒主要发生在1月和2月;766起细菌性食物中毒有31.2%发生在餐饮服务场所,但每种细菌的多发场所有着显著的不同;沿海省份以副溶血性弧菌为主,占24.4%,内陆省份以沙门菌最多,占22.4%。食物载体难以确定。结论细菌性食物中毒有其规律性,根据其内在的特点,采取相应的预防措施,将有助于预防其发生。

鸡血藤提取物抗柯萨奇B3病毒活性组分研究

目的研究鸡血藤提取物不同组分的抗柯萨奇B3病毒活性和性质。方法通过不同溶剂提取鸡血藤活性成分,细胞病变效应法和四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定不同提取组分的体外抗柯萨奇B3病毒活性。结果通过初步分离纯化得到有效成分具有抗柯萨奇B3病毒活性。用MTT法研究了鸡血藤水提物和有效成分的细胞毒性和抗柯萨奇B3病毒活性,CC50分别为725.88,179.17μg/ml,IC50分别为87.17,9.14μg/ml,TI分别为8.32,19.60。阳性对照为利巴韦林(Ribavirin)的CC50为4 900μg/ml,IC50为156.2μg/ml,其TI为31.4。结论鸡血藤有效成分在体外能明显抑制柯萨奇B3病毒的致细胞病变作用。

肝癌患者单个核细胞线粒体DNA拷贝数与抗氧化能力的变化

目的:探讨肝癌患者单个核细胞(PBMC)线粒体DNA(mt DNA)拷贝数的变化及其与机体抗氧化能力的关系。方法:用Ficoll Hypaque离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),采用实时荧光定量PCR反应,检测线粒体NADH脱氢酶亚基1(ND1)基因的拷贝数,并以核基因组的β-actin作为内参基因,比较25例肝癌患者与30例健康人外周血单个核细胞中mt DNA拷贝数的差异。流式细胞术检测单个核细胞活性氧(ROS)含量的变化。生化检测法检测血浆中总抗氧化能力(T-AOC)的变化。结果:肝癌组外周血单个核细胞ND1基因拷贝数是健康对照组的73%,表明肝癌患者外周血单个核细胞mt DNA拷贝数明显下降。肝癌组单个核细胞活性氧含量的平均荧光强度为(417.82±110.62),健康对照组为(301.82±75.54),肝癌组单个核细胞活性氧含量显著高于健康对照组(P<0.01)。肝癌组血浆总抗氧化能力(单位/毫升血浆)吸光度为(1.30±0.85),健康对照组为(3.20±1.62),肝癌组血浆总抗氧化能力显著低于健康对照组(P<0.01)。结论:肝癌患者的外周血单个核细胞线粒体DNA拷贝数减少可能与机体抗氧化水平下降有关。

昆明系小鼠被动吸烟肺肿瘤模型的建立

目的参照国外采用吸烟导致小鼠肺肿瘤的实验模型程序和方法,应用昆明系小鼠,探索建立吸烟导致肺肿瘤模型的可行性以及应用此模型评价抗氧化剂对其干预效果。方法将200只小鼠随机分为正常对照组、烟草暴露组、槲皮素干预组和维生素E干预组,除正常对照组外,余3组均在染毒柜中被动吸烟染毒5个月,恢复4个月后处死,进行病理学和抗氧化指标的检测。槲皮素(80 mg.kg-1.d-1)和维生素E(1 00 mg.kg-1.d-1)分别加入饲料中摄入体内,连续喂养9个月。结果烟草暴露组小鼠肺肿瘤发病率为43.5%,每只肺表面的平均肿瘤结节数为1.00±0.29,明显高于对照组(11.8%,0.18±0.09)和维生素E干预组(17.9%,0.32±0.16),差异有显著性(P<0.05);维生素E干预效果最好。维生素E干预组血清中维生素E浓度明显高于其它各组,维生素E干预组活性氧(ROS)活性明显低于其它各组,差异均有显著性(P<0.05)。结论此次应用国产昆明系小鼠成功地建立了烟草暴露导致肺肿瘤模型,但其稳定性需进一步实验验证。应用昆明系小鼠所建立的肺肿瘤模型将为肺肿瘤发生过程及防治措施的研究提供了基础。

微生物制剂强化膜生物反应器处理生活污水

根据生活污水组成成份的特点,特异的选择产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶的菌株和硝酸细菌及亚硝酸细菌组成强化微生物制剂,与中空纤维膜生物反应器结合处理生活污水并同时与普通活性污泥膜生物反应器进行启动时间和出水水质比较。当进水COD、氨氮、色度、浊度分别为230～580mg/L、80～130mg/L、60～80倍4、0-80NTU,反应器有效体积为36L,水力停留时间为5～10h时,膜生物反应器启动时间仅为24～48h,且稳定期出水COD平均为40mg/L(去除率90.0%);氨氮平均为0.66mg/L(去除率99.4%);色度为0～50倍;浊度为0～1NTU,连续运行3个月,出水水质稳定,达到《生活杂用水水质标准》(GB/T18920-2002),与普通活性污泥膜生物反应器处理生活污水相比,启动时间快、出水水质稳定而优质且氨氮去除率高。

活性污泥宏基因组芯片DNA的制备方法

宏基因组芯片的探针是通过构建环境DNA的宏基因组文库而获得的,为了获得理想的活性污泥宏基因组文库和宏基因组芯片探针,必须获得高质量的活性污泥DNA.本文作者采用8种不同的DNA提取方法提取活性污泥的总DNA,并通过比较DNA总量、纯度、完整性、是否含有PCR酶抑制剂、能否进行限制性内切酶酶切等指标来评价不同提取方法对活性污泥总DNA提取效果的影响.结果表明,溶菌酶–SDS–蛋白酶K–酚氯仿抽提处理活性污泥所提取的总DNA效果最好,提取的DNA总量多、纯度高,DNA片段大于23kb,无需进一步纯化就可直接进行PCR扩增反应或SauAⅠ限制性内切酶酶切,但DNA如果需要EcoRⅠ、HindⅢ等限制性内切酶酶切,则需采用Roche公司琼脂糖凝胶回收试剂盒将DNA进一步回收纯化.

高速公路改建工程施工段大型车分流控制措施

高速公路改建施工中,大型车辆的进入会使道路通行能力下降。可以通过在改建段之前设置交通标志、建立可变信息板系统和广播通信系统等措施将大型车辆进行分流,以保证施工期间高速公路的畅通。

荧光定量RT-PCR检测诺如病毒基因Ⅱ型方法的建立和评估

目的建立灵敏、特异的诺如病毒基因Ⅱ型的荧光定量RT-PCR方法,用于临床腹泻粪便样本病毒的定量检测。方法构建质粒DNA,并转录合成RNA作为标准品,建立和优化诺如病毒基因Ⅱ型荧光定量RT-PCR方法和反应体系,评价该方法的灵敏度、特异性、重复性,并进行临床粪便样本的检测。结果此方法最低可以检出102拷贝数/μl,能特异地检出诺如病毒基因Ⅱ型,与诺如病毒基因Ⅰ型无交叉反应,与柯萨奇病毒B组、脊髓灰质炎病毒、肠道病毒、星状病毒、甲肝病毒、埃可病毒和轮状病毒无交叉反应。针对标准品,2次批内试验的荧光信号循阈值(Ct值)变异系数(CV)分别为1.60%、0.70%,2次批间试验的变异系数(CV)分别为0.40%、0.40%,均在5%以下。结论本研究建立的实时定量RT-PCR检测诺如病毒基因Ⅱ型的方法,其灵敏度、特异性和重复性良好,可用于该病毒的快速检测。

量子点标记的基因芯片在食源性致病细菌检测中的应用

目的基于链霉亲和素修饰的CdSe/ZnS量子点标记的基因芯片技术,建立快速、准确、高通量的检测食源性致病细菌的方法。方法以16s rDNA为靶基因,针对待检的食源性致病细菌合成一系列寡核苷酸探针,制成寡核苷酸芯片,生物素化标记的PCR产物与芯片杂交,然后用链霉亲和素修饰的CdSe/ZnS量子点进行标记,应用激光共聚焦扫描仪进行信号的检测。对量子点标记的基因芯片技术平台的特异性、敏感性和重复性进行评估。结果链霉亲和素修饰的CdSe/ZnS量子点标记的基因芯片可有效区分常见致病细菌,检测灵敏度为10 cfu/ml,变异系数<10%。结论链霉亲和素修饰的CdSe/ZnS量子点标记的基因芯片可对致病细菌进行快速检测鉴定,其敏感性和重复性良好。

鸡血藤提取物的抗肠道病毒作用

目的揭示鸡血藤提取物(aqueous extracts,AE)抑制肠道病毒的作用,以开发抗肠道病毒新药。方法采用细胞病变CPE和MTT比色法,测定鸡血藤提取物在Vero细胞的抗肠道病毒(EVenterovirus)的活性,其中肠道病毒包括对Coxsackie B3病毒、Coxsackie B5病毒、Echo9病毒、Echo29病毒和Polio I病毒的抑制作用。同时采用BALB/c小鼠经腹腔注射感染Coxsackie B3病毒造成小鼠心肌炎模型,观察心指数、死亡率。最后,通过RT-PCR比较鸡血藤提取物体内外抑制Coxsackie B3病毒的mRNA表达的效果。结果不同质量比鸡血藤提取物对上述5种病毒均呈现不同程度的抗病毒作用。鸡血藤提取物在Vero细胞中抑制Coxsackie B3病毒、Coxsackie B5病毒、Echo9病毒、Echo29病毒和Polio I病毒的半数抑制浓度(IC50)分别为60.8、47.1、14.8、65.5、29.1μg/mL。,鸡血藤提取物的药物治疗指数(Therapeutic index,TI=CC50/IC50)分别为4.1、5.3、16.9、3.8和8.6。鸡血藤提取物对Coxsackie B3病毒的mRNA的表达有抑制作用,同时该提取物对于由Coxsackie B3病毒引发的病毒心肌炎有明显的抑制作用,并可降低小鼠的死亡率。结论鸡血藤提取物对肠道病毒具有抑制作用。

维生素E对苯并(a)芘所致小鼠肺癌的干预作用

目的研究维生素E对苯并(a)芘所致小鼠肺癌的干预作用。方法将清洁级昆明种小鼠随机分为9组,每组25只。雌性和雄性B(a)P组灌胃1.8μg/kgB(a)P,每周1次,连续8周。雌性和雄性B(a)P+高剂量VE组和雌性B(a)P+低剂量VE组,在染毒的同时通过食物定量摄入VE,分别为100和50mg/(kg·d)。雌性、雄性对照组和VE组通过灌胃给予橄榄油。计算肺癌发病率和肿瘤数。测定小鼠血清中氧化和抗氧化指标。结果雌性和雄性B(a)P组的肺癌发病率和肿瘤结节数分别明显高于相应的雌性、雄性对照组和VE组,差异有统计学意义(P<0.05)。雌性B(a)P+高剂量VE组和B(a)P+低剂量VE组肺癌发病率和肿瘤数明显高于对照组、VE组和雌性B(a)P组,差异有统计学意义(P<0.05)。雄性B(a)P+高剂量VE组肺癌发病率和肿瘤数高于对照组和VE组,差异有统计学意义(P<0.05);与雄性B(a)P组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与雌性B(a)P组比较,雌性B(a)P+低剂量VE组和雌性B(a)P+高剂量VE组SOD活力明显上升,MDA含量明显减少,ROS明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);雌性B(a)P+高剂量VE组GSH-Px升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论VE对B(a)P所致肺癌的影响机制与抗氧化作用无关。VE对B(a)P所致小鼠肺癌没有预防作用,对雌性小鼠可能具有促癌作用。