禽流感病毒H5N1血凝素蛋白的重组牛痘病毒表达

目的研究H5 I151F和H5 I151F＋A134V＋E186D两种氨基酸变异对血凝素蛋白（HA）亲人受体结合的影响，并获得该HA。方法构建载体pRB21’，共感染／转染vp37^-牛痘病毒vRB12和pRB21’，基因同源重组牛痘病毒表达HA，Western免疫印迹法鉴定。结果获得了克隆有H5HA全长基因片段的载体pRB21’，构建了2种重组牛痘病毒re-VV H5 I151F和re-VV H5 I151F＋A134V＋E186D，且能在被感染细胞膜表达这两种HA。结论首次通过构建重组牛痘病毒成功表达了禽流感病毒H5N1的H5HA，为进一步研究禽流感病毒人传人的可能性奠定了基础。

高效抗逆转录病毒治疗艾滋病毒感染者和艾滋病患者的6年临床疗效及安全性观察

目的:评估奈韦拉平加两种核苷类反转录酶抑制剂组合对艾滋病毒(human immunodeficien-cy virus,HIV)感染者和艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)患者的长期抗病毒和免疫重建效果以及毒副作用。方法:从2002年10月至2004年5月共有57例HIV-1感染者/AIDS患者陆续接受高效抗反转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART),定期随访截止于2008年12月。HAART方案主要为两种核苷类反转录酶抑制剂加奈韦拉平。随访期间定期监测其病毒载量,T细胞亚群的变化,记录药物的毒副作用并适当处理,追踪血常规和主要生化指标的变化;对治疗出现病毒学失败或严重毒副作用者及时调整用药。结果:57例中,34例持续追踪了4年以上。经过5～6年治疗,63.3%(19/30)的患者病毒载量<50拷贝/mL。CD4+细胞比治疗前平均上升了329个/μL。CD8+细胞平均下降128个/μL,CD4+CD45RA+CD62L童贞细胞和CD4+CD45RO+记忆细胞逐渐上升,CD8+CD38+激活细胞逐渐下降;这些变化均以治疗2年内较明显,2年以上的长期趋势变缓,但6年时均未达到健康者的水平。56%(32/57)的患者先后出现多种可能与药物相关的毒副作用,主要为消化道症状、神经系统症状、皮疹和脱发,多发生于6月内。29.8%(17/57)的病例γ-谷氨酰转肽酶升高,26.3%(15/57)的患者血脂升高,6例出现脂肪分布异常,多见于女性患者;25例发生血象异常、肝功能受损、肾功能变化和淀粉酶升高。3例患者发生3～4级毒副作用(2例为外周神经炎,1例怀疑乳酸酸中毒),1例患者发生3级皮疹。结论:奈韦拉平加两种核苷类反转录酶抑制剂的HAART药物组合长期治疗艾滋病毒感染者和艾滋病患者可持续抑制病毒,增加CD4细胞,其毒副作用可控制,是安全有效的治疗方案。

艾滋病抗病毒治疗中外周血细胞病毒库的动态变化及其意义

目的:观察中国HIV-1感染者和AIDS病(HIV/AIDS)患者在两年高效抗反转录病毒治疗(highly activeantiretroviral therapy,HAART)过程中,外周血NK细胞、T淋巴细胞以及单核细胞3种HIV-1病毒储存库的动态变化及其与治疗效果的关系。方法:40例初次接受HAART的HIV/AIDS患者被纳入本研究并随访2年。在启动治疗0,6,12,18,24个月后,检测其外周血HIV-1 RNA病毒载量,CD4+T细胞数量,NK细胞、单核细胞和T淋巴细胞内的HIV-1 DNA水平,对数据进行统计学处理及相关性分析。结果:40例随访患者随着HAART的进行,患者的CD4+T细胞计数水平逐步上升,血清HIV-1 RNA水平逐步下降;同时3种细胞(外周血T淋巴细胞、NK细胞)中的HIV-1 DNA载量也在逐步下降,与血清RNA载量的下降一致,3种细胞中的平均HIV-1 DNA载量与外周血HIV RNA水平之间呈正相关(P<0.05)。外周血T淋巴细胞、NK细胞中HIV-1 DNA水平在治疗基线及治疗后均与外周血CD4+T细胞计数均呈负相关(P<0.05);而单核细胞内HIV-1 DNA在治疗基线与CD4+T细胞计数无相关性(P>0.05)。结论:中国HIV-1感染者外周血中NK细胞、T淋巴细胞和单核细胞均是HIV-1的病毒储存库之一。T淋巴细胞可能是HIV病毒最主要的细胞储存库。HIV-1前病毒DNA的检测对于抗病毒治疗疗效的判断以及病情进展的预测都有着重要的意义。

HAART治疗1年对HIV/AIDS患者免疫重建效果观察

目的研究高效抗反转录病毒治疗(HAART)1年,对HIV/AIDS患者免疫重建效果的影响。方法确认人免疫缺陷病毒(HIV)感染者35例,检测CD4+T淋巴细胞<350/μL,开始HAART治疗,并于治疗0、6、12个月时分别检测其病毒载量及CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD4+童贞细胞、CD4+记忆细胞、CD8+激活细胞计数。结果治疗前,HIV RNA处于高复制水平,平均(4.62±1.09)×106copies/mL,HAART治疗6个月及12个月时均低于检测下限。患者的CD4+T淋巴细胞、CD4+童贞细胞和CD4+记忆细胞均明显增加,12个月时,各组细胞计数[分别为(312±109.22)/μL、(150±57.34)/μL、(212±48.06)/μL]与基线[分别为(183±83.73)/μL、(73±20.40)/μL、(119±30.42)/μL]比较,差异有统计学意义(P<0.01),但仍低于健康对照组[分别为(768±146.41)/μL、(424±87.06)/μL、(442±61.40)/μL](P<0.05);CD8+T淋巴细胞计数(427±99.79)/μL较基线(597±111.43)/μL明显下降(P<0.05),但仍高于健康对照组(208±37.39)/μL(P<0.05)。结论 HAART能快速抑制HIV复制,治疗1年能部分恢复HIV/AIDS患者免疫功能。

复方黄芪颗粒治疗HIV感染者24周的疗效和安全性评价

目的在中国中医药研究院的新药开发研究工作基础上，对未经抗病毒治疗的人免疫缺陷病毒（HIV）感染者进行24周口服中药复方黄芪颗粒治疗，初步评价其有效性和安全性。方法22例HIV感染者服用复方黄芪颗粒治疗24周，于0、24周检测HIV RNA病毒载量，0、8、24周检测CD4＋、CD8＋细胞及细胞因子，0、8、16、24周记录临床症状积分以及血常规、肝肾功能等实验室指标，同时记录治疗期间发生的不良事件。结果治疗24周，CD4＋细胞数较基线值（0周）平均上升22/μL（t=2．08，P=0．03）；细胞因子白细胞介素（IL）-2和干扰素（IFN）-γ较基线值分别平均上升7．29pg／mL和3．82pg／mL（分别t=3．46，P=0．00；t=5．94，P=0．00），IL-4下降3．71pg／mL（t=8．18，P=0．00）；HIV RNA较基线值平均下降0．401g拷贝／mL（t=2．65，P=0．02）；体重上升〉2kg者6例，增减未超过2kg者10例，患者体重评分有效率72．73％；血常规、肝肾功能等结果均在正常范围内；未观察到不良事件。结论中药复方黄芪颗粒可提高HIV感染者CD4＋细胞数，对HIV复制有一定抑制作用，具有一定免疫调节作用；可以显著改善HIV感染者的临床症状，使患者体重增加，无明显毒副作用。

中国HIV感染者的IL-21水平及其在高效抗反转录病毒治疗中的动态变化(英文)

目的:观察在接受抗HIV治疗的中国HIV感染者队列中血白细胞介素21(IL-21)的动态变化。方法:将符合高效抗反转录病毒治疗(HAART)指南标准的25例慢性HIV成年感染者纳入研究,在启动HAART的0,6,12个月时各抽取感染者的20 mL血液。运用流式细胞仪进行CD4+T细胞和CD8+T细胞计数,以RT-PCR检测HIV的RNA水平,ELISA法测定IL-21的水平。结果:中国HIV感染者的IL-21水平低于正常人,在接受HAART治疗过程中逐渐升高,但未达到正常人水平。IL-21的水平和CD4+T细胞数呈正相关,但与CD8+T细胞数无关;HIV RNA的水平与CD4+T细胞数呈负相关,但与CD8+T细胞数无关。结论:IL-21与HIV免疫致病机制有一定关系,并在抗反转录病毒治疗的免疫重建中起重要作用。

IL-2,IL-7,IL-15和IL-21在艾滋病免疫疗法中的应用前景(英文)

高效抗反转录病毒疗法可以有效地减少HIV的复制,但却不能完全恢复CD4+T细胞的数量。即使病毒血清学指标得到良好控制的病人,CD4+T细胞数也很难达到正常水平。目前研究表明:γ链细胞因子在始动、维持及调节免疫稳态和炎症反应中发挥重要作用。γ链细胞因子具有多重功能,如在健康及疾病中作为调节和效应分子发挥作用,因此,该家族因子、受体及其信号转导通路可成为治疗性干预的潜在靶点。γ链细胞因子IL-2,IL-7,IL-15和IL-21是T细胞稳态的重要调节者,因此成为升高T细胞水平和功能及增强AIDS免疫受累患者疫苗诱发病毒特异性T细胞应答等免疫治疗中的主要可选靶点之一。

人免疫缺陷病毒合并丙型肝炎病毒的调查及相关因素分析

目的对人类免疫缺陷病毒（human immunodificiency virus,HIV）感染者中合并丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）感染的情况进行流行病学调查和统计学分析,评估合并感染的患病率和相关影响因素。方法对各医院在2006—2008年收治的门诊和住院HIV感染病例,用统一的流行病学调查表进行登记;并进行HCV抗体、肝功能和CD4细胞检测;多元回归法分析HIV合并HCV感染风险因素。结果 HIV感染者978例,合并HCV的感染率为33.9%,静脉吸毒途径感染HIV占合并感染者的81.3%,30~45岁年龄组HIV合并感染率为42.6%,无业人员HIV合并感染率为61.9%,均明显高于其他组。结论年龄30~45岁和无正当职业的人群HIV合并HCV感染率较高,静脉吸毒是HIV合并HCV感染的主要传播途径。

新冠肺炎疫情后传染病医院建筑给排水系统的设计与维护

深入讨论传染病医院建筑给排水设计的要点。提出未来传染病医院建筑给排水系统设计的根本是严格遵照清洁区、半污染区以及污染区的医疗功能分区,维持负压病区的安全运转,基于不同的传染病传播途径和院感防控策略设计合理安全的给排水系统,辅以完善的系统巡检与维护,杜绝院内二次传播,为医务人员和患者提供安全可靠的环境。

禽流感病毒H5N1基因突变对神经氨酸酶抑制剂敏感性和神经氨酸酶活性的影响

目的 研究感染人的禽流感病毒H5N1神经氨酸酶突变I117V,I314V,I117V＋I314V对神经氨酸酶抑制剂（NAIs）敏感性和神经氨酸酶（NA）活性的影响.方法 定点突变技术将变异位点引入禽流感病毒株A/Vietnam/1203/04（H5N1）（VN1203）的NA基因中,以A/WSN/33（H1N1）为背景,通过反向遗传学方法构建重组流感病毒,鸡胚传代增殖病毒,荧光定量评估病毒对NAIs的敏感性和NA活性（IC50值和Km,Ki值）.结果 与野生株VN1203相比,I117V使NA对奥司他韦敏感性降低（IC50值升高了17倍,Ki值升高了20倍）,对扎那米韦敏感性无明显影响（IC50值升高了2倍,Ki值升高了3倍）,NA活性降低（Km值升高了23倍）.I314V对NAIs敏感性和NA活性均无明显影响.结论 初步结果认为NA突变I117V和I314V对感染人的禽流感病毒H5N1并不产生NAIs耐药,临床上仍然可以用奥司他韦或扎那米韦抗病毒治疗.

禽流感病毒H5N1血凝素蛋白的细胞膜上提纯和结晶

目的从细胞膜上提纯禽流感病毒H5N1的血凝素蛋白H51151F和H51151F＋A134V＋E186D，并使蛋白结晶。方法细胞内大量增殖重组牛痘病毒，去垢剂提取细胞膜中的HA蛋白，连续蔗糖密度梯度超速离心，Western印迹检测，菠萝蛋白酶等裂解HA，离子交换层析，SDS—PAGE电泳并染色检测蛋白纯度，坐滴气象扩散法结晶。结果从细胞膜中提取了高纯度的血凝素蛋白H51151F和H51151F＋A134V＋E186D，并得到了H51151F蛋白晶体。结论首次获得了禽流感病毒H5N1的I-IS1151F蛋白晶体，为进一步研究禽流感病毒人传人的可能性打下基础。

艾滋病HAART治疗免疫重建炎性综合征的免疫机制初步研究

目的 为探讨我国艾滋病病人（AIDS）启动高效抗反转录病毒治疗（HAART）后,发生免疫重建炎性综合征（IRIS）的免疫学发病机制,在前瞻性研究队列中对启动HAART的AIDS病人部分淋巴细胞亚群、调节性T细胞和部分Th1和Th2细胞因子等进行追踪分析.方法 将接受HAART初始治疗的238例AIDS病人建立前瞻性研究队列,分为在24周内发生IRIS的47例病人（IRIS组）和未发生IRIS的191例病人（非IRIS组）.在HAART的0周、12周和24周采集两组血标本,对47例IRIS病例及随机选择的50例非IRIS病例进行免疫机制的研究分析,检测HIV病毒载量和CD4＋细胞计数;使用流式细胞术检测部分淋巴细胞亚群和调节性T细胞（CD4＋CD25＋Foxp3＋）.在HAART的0周、4周、12周、24周及发生IRIS时分别采集全部238例患者的血标本,使用ELISA法测定血浆细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10以及IL-7水平.结果 两组感染者的CD4＋、CD8＋纯真细胞和记忆细胞比例在0周、12周、24周及发生IRIS时比较差异均无统计学意义,但CD4＋记忆细胞和CD8＋记忆细胞比例在启动HAART后均明显上升.两组感染者CD4＋CD38＋活化细胞和CD8＋CD38＋活化细胞比例在基线时均较正常值明显升高,治疗后均有下降趋势.在0周、12周、24周及发生IRIS时CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞在IRIS组中均较非IRIS组要低.两组IL-2及IFN-γ在HAART后均呈上升趋势,且IRIS组在4周及发生IRIS时更明显高于非IRIS组;两组IL-4及IL-10在HAART后均呈下降趋势,IRIS组中IL-10在4周及发生IRIS时更明显低于非IRIS组.IL-7在两组中基线时均较正常值升高,并随HAART进程逐渐降低,其中IRIS组在各随访点IL-7均要高于非IRIS组.结论 接受HAART治疗者早期即出现记忆T细胞快速上升,在IRIS炎症反应中可能起重要作用.IL-2、IL-10和IFN-γ在发生IRIS时的水平差别,提示IRIS的发生与炎性细胞因子大量增加,炎性抑制因子相对不足有一定关系.IL-7也可能参与到IRIS的发病机制中.

艾滋病HAART治疗免疫重建炎性综合征的好发因素和临床特征

目的 观察我国艾滋病患者（AIDS）启动高效抗反转录病毒治疗（HAART）后,发生免疫重建炎性综合征（IRIS）的发病率、病死率、临床特征及其好发易感影响因素.方法 以2007年10月到2009年9月来自湖南省和江四省的接受HAART治疗的238例AIDS患者建立前瞻性研究队列,在24周内进行定期随访.将此期间发生IRIS的47例患者纳入IRIS组,24周时仍未发生IRIS的191例患者纳入非IRIS组.收集两组患者的一般资料、临床发病表现和诊断治疗的相关资料,在HAART的0、12和24周采集患者的血标本检测HIV病毒载量和CD4＋细胞计数,对所有资料进行统计学处理和对比分析.结果 IRIS发生率为19.7%（47/238）,病死率6.2%（2/47） HAART起动后发生IRIS的平均天数为28（9～36）d.IRIS中以结核感染占多数（61.7%,29/47）,IRIS组与非IRIS组在年龄、性别、传播途径以及抗病毒治疗的方案上差异均无统计学意义.在0、12和24周时两组的病毒载量均逐步明显下降,CD4＋细胞数均逐步明显上升.但是启动HAART时IRIS组的CD4＋细胞数明显低于非IRIS组（48×106个/L比146×106个/L,P＜0.01）,IRIS组的CD4＋细胞数在100×106个/L以内者占85.1%（40/47）.结论 IRIS多发生在HAART治疗启动后的1～3个月内,接受HAART治疗者的年龄、性别、传播途径以及抗病毒治疗的方案均与IRIS的发生无明显相关.在治疗24周内IRIS组与非IRIS组的HIV RNA病毒载量下降幅度和CD4细胞上升数量均无明显差别,但起动HAART前CD4＋细胞计数＜100 × 106个/L的感染者更容易出现IRIS.我国HAART发生IRIS多为结核感染,一般无须停用抗病毒药物,对症处理即可,但对结核病或其他严重的感染仍须抗感染治疗.

24个月抗艾滋病病毒治疗效果的初步评价

目的观察人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者经24个月高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的抗病毒效果、免疫重建效果和毒副反应。方法27例 HIV-1感染者以去羟肌苷、司他夫定和奈韦拉平治疗24个月,分别在治疗前,治疗后3、6、12、18和24个月时采血检测血浆 HIV RNA病毒载量,检测外周血 CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+淋巴细胞数,CD4^+CD45RA^+CD62L^+纯真细胞数,CD4^+CD45RO^+记忆细胞数,CD8^+CD38^+激活淋巴细胞数和 CD8^+CD38^+/CD3^+CD8^+百分比;并观察药物的毒副反应、血常规和主要生化指标的变化,以及发生的不良事件。结果27例 HIV-1感染者在24个月的治疗中,病毒学和各项免疫学指标均有明显改善,其变化以3或6个月时较显著,24个月时上述各项检测指标均未达到正常对照组数值。其中19例感染者先后出现过消化道反应、周围神经炎、皮疹、腹痛、头痛、发热和脱发等毒副反应,有21例感染者发生过血相异常、肝功能或肾功能变化、血脂异常以及γ-谷氨酰转肽酶和淀粉酶升高等。有3例感染者先后因Ⅲ级外周神经炎和疑为乳酸中毒而改药。结论 HIV-1感染者经去羟肌苷、司他夫定和奈韦拉平治疗24个月,显示了较好的抗病毒效果和免疫重建效果。但药物的副反应较多。

不同变异位点的HIV-1 vpr重组真核表达载体对转染细胞凋亡作用的观察

目的观察不同的人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）的vpr基因变异株致宿主细胞凋亡作用的区别，及其可能的机制。方法14个带有不同变异位点的中国感染者HIV-1 vpr基因片断，其PCR产物纯化后经HindⅢ和BamHⅠ双酶切，以pcDNA3．1（＋）真核表达质粒连接转化实验，将重组质粒用脂质体瞬时转染至HeLa细胞，G418筛选后收获细胞。RT-PCR检测目的基因mRNA水平的表达，荧光染色在显微镜下观察Hoeschst凋亡细胞并计算凋亡率，DNA琼脂糖电泳观察各转染细胞凋亡条带，膜联蛋白V-FITC流式细胞检测各株细胞凋亡率，并比较各株细胞的半胱酸蛋白水解酶3活性差别。结果14个vpr基因片段转染HeLa细胞后，发现有第70、85、86或94位变异的vpr转染细胞Hoeschst染色凋亡率和半胱酸蛋白水解酶3活性检测（分别为0．1225，0．1675，0．1975，0．1575和11．356，8．021，14．6875，10．521）较无这些变异的保守序列vpr转染细胞（0．355和182．4875）为低，DNA琼脂糖电泳法和膜联蛋白细胞凋亡检测也提示同样的规律；第1～7号重组质粒（均为vpr AE亚型）的致细胞凋亡能力也明显小于第8～14号重组质粒（vpr B，AB，C和C／BC亚型）。结论首次观察到有第70、85、86或94位变异的HIV-1 vpr序列，其致HeLa细胞凋亡的能力低于无这些位点变异的保守序列，AE亚型诱导宿主细胞凋亡能力低于其他亚型，其机制之一与半胱酸蛋白水解酶3途径激活降低有关。

湖南艾滋病患者Th17和Tr细胞及IL-17在抗病毒治疗过程中的变化

目的观察HIV感染者和AIDS患者血IL-17、CD3±CD4±IL-17±细胞（Th17细胞）和CD4±CD25±Foxp3±T细胞（Tr细胞）的平衡状态及其在1年高效抗反转录病毒治疗（HAART）中的变化。方法选取经HAART治疗的HIV／AIDS患者33例，同时选取33例健康志愿者为对照，分别于治疗0、6、12个月采集静脉血，检测血清IL-17水平、Th17细胞及Tr细胞百分比，并对比分析其相互关系。结果HIV／AIDS在HAART治疗前、治疗6个月、12个月及健康对照外周血的Thl7细胞在CD4±T细胞中的比例分别为（1．20±0．37）％、（2．50±1．03）％、（3．70±1．56）％和（4．70±1．43）％；Tr细胞在CD4’T细胞中的比例分别为（9．16±3．33）％、（7．19±2．91）％、（5．53±1．88）％和（4．43±0．97）％；血清IL—17水平分别为（5．3-±2．5）pg／ml、（7．7±2．4）vg／ml、（10．4±3．1）pg／ml和（17．7±6．6）pg／ml。Th17细胞水平与CD4±T细胞计数正相关，与病毒载量负相关；Tr细胞水平与CD4±T细胞计数负相关，与病毒载量正相关。结论HIV感染导致IL-17、Th17细胞和TT细胞的失平衡，而HAART治疗可能逐渐恢复二者的免疫平衡状态。提示三者可能在艾滋病发病机制中起作用，并有可能成为观察艾滋病进展和HAART治疗效果的有效指标。

表达HIV Vpr细胞株的建立及其促细胞凋亡作用的研究

目的建立稳定表达人免疫缺陷病毒（HIV）Vpr蛋白的细胞株，观察Vpr蛋白促进感染细胞凋亡的特性，以及Vpr变异后对其致凋亡作用的影响。方法以携带野生株HIV vpr基因和突变株HIV vpr—FS基因的质粒分别转染HeLa细胞，建立稳定表达HIV Vpr蛋白的细胞株，以流式细胞仪和细胞内DNA片段分析法检测细胞凋亡效果，观察Vpr蛋白促细胞凋亡的特性，以及两者致凋亡作用的区别。结果重组质粒pcDNA3．1-vpr和pcDNA3．1-vpr-FS经酶切后均可获得342bp产物，DNA测序结果与目的基因已知序列完全一致；上述质粒转染的HeLa细胞，RT-PCR检测到目的基因vpr或vpr-FS的表达，Western blot检测到明显Vpr或Vpr—FS蛋白的表达。流式细胞仪和细胞内DNA片段分析法分别检测细胞凋亡，显示野生株HeLa pcDNA3．1-vpr组的凋亡率明显高于对照组，而变异株HeLa pcDNA3．1-vpr-FS的凋亡率与对照组无明显差别。结论成功建立了表达HIV Vpr和HIV Vpr—FS蛋白的感染细胞株。实验显示HIV Vpr蛋白能促进感染细胞的凋亡，而Vpr蛋白的变异可能使其促进细胞凋亡作用减弱。实验结果为下一步研究提供了基础资料。

高效抗反转录病毒治疗1年对艾滋病患者免疫重建及细胞因子的影响

AIDS是HIV引起的、可使机体CD4＋T淋巴细胞数量减少和功能破坏，最终导致各种机会性感染和肿瘤的一种疾病。高效抗反转录病毒治疗（HAART）通过多种抗反转录病毒药物联合作用，可持久抑制HIV复制，逐步恢复AIDS患者的免疫重建，降低AIDS的发生率和病死率，是目前治疗HIV／AIDS患者的主要方法。HAART实现免疫重建的机制仍不明确，本研究拟观察HIV／AIDS患者在HAART过程中多种细胞因子的变化，以探讨其免疫重建的机制。

HIV-1 Vpr对细胞周期的影响和致凋亡作用的研究

目的研究人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）的vpr基因和不同变异株对宿主细胞周期和凋亡的影响，以及其致细胞周期变化和致细胞凋亡机制的两者间的可能关系。方法将14个带有不同变异位点的中国感染者HIV-1 vpr片段分别连入pcDNA3．1（＋）真核表达载体，构建重组质粒。将这些重组质粒电转染Jurkat细胞，并设立保守株vpr基因转染细胞、突变株vpr—Fs基因转染细胞、空载体转染细胞和未转染细胞作为对照。经G418选择培养及RT—PCR检测目的基因转染成功后，PI染色，流式细胞仪检测被转染细胞的细胞周期分布和细胞凋亡。结果流式细胞仪检测上述14个带有不同变异位点的HIV-1 vpr基因片段的Jurkat细胞，发现转染保守片段HIV-1 vpr的Jurkat细胞，其细胞周期出现G2期阻滞和细胞凋亡率明显升高，但转染vpr C端截断的vpr—Fs片段的细胞、空载体pcD-NA3．1（＋）转染细胞和未转染的Jurkat细胞无此现象。转染了HIV-1 vpr基因序列相对应的Vpr蛋白中含有70V、85P、86G、94G突变的片段，较vpr保守片段其致感染细胞G2期阻滞和凋亡的能力明显下降，且Vpr蛋白的AE亚型致细胞周期阻滞和致凋亡能力较其他亚型普遍为低。初步发现vpr诱导G2期阻滞百分比越高其所致凋亡率越高。结论HIV-1 vpr基因有明显的致感染细胞G2周期阻滞和致细胞凋亡的作用，但vpr C端截断的vpr—Fs片段无此功能。首次发现中国感染者HIV-1 vpr基因表达蛋白的70V、85P、86G、94G位点突变能使其致感染细胞G2期阻滞和凋亡的能力下降，Vpr的AE亚型致细胞周期阻滞和凋亡能力较其他亚型普遍为低。对14个变异片段的分析显示vpr诱导G2期阻滞的程度与其致凋亡水平可能相关，提示两者的发生机制可能有一定的关联。本研究为进一步探讨HIV-1致病机制和探索可能的基因干预措施打下基础。

T淋巴因子变化对免疫重建炎性综合征发生的影响

目的 了解HIV/AIDS启动高效抗逆转录病毒治疗（HAART）后免疫重建炎性综合征（IRIS）发生基本情况,观测代表Th1/Th2平衡间的主要淋巴因子在HAART前及HAART启动后的基础及变化水平,探索IRIS可能的免疫病理机制.方法 采用前瞻性研究,对进行高效抗逆转录病毒治疗（HAART）的HIV/AIDS进行为期6个月跟踪随访观察,确立IRIS组及非IRIS组,并进行代表Th1/Th2平衡关系的主要T淋巴因子：IL-2、INF-γ、IL-4、IL-10的检测,与健康组对照同时并对HAART前、HAART启动后1、3和6个月时变化水平进行比较.结果 一共观察HAART初始启动的病例共212例.HAART启动6个月内共诊断IRIS59例,IRIS中位发生时间在启动HAART后第21天（四分位间距时间为19 d）.发生的疾病谱主要包括结核病、疱疹病毒感染、肺胞子菌肺炎等.不论是在IRIS组还是在非IRIS组,代表Th1/Th2平衡关系的主要淋巴因子IL-2、INF-γ与IL-4、IL-10的水平,其HAART前基础值均较正常人群检测值分别有降低与增加,差异有统计学意义（P＜0.05）,在HAART启动后则分别表现出逐步增高与下降而恢复平衡的趋势,两组HAART6个月后的值较HAART前基础值差异均有统计学意义（P＜0.05）.而IRIS组HAART前上述淋巴因子的基础值与正常对照变化程度较非IRIS组更加明显,在HAART启动后1个月（IRIS高发阶段）,IL-2、INF-γ的增高水平[（11.68±2.89）pg/ml vs（8.52±2.26）pg/ml;（22.19±6.22）pg/ml vs（18.34±5.35）pg/ml]与IL-10的下降水平[（19.21±4.03）pg/mlvs（23.19±5.92）pg/ml]在两组间比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 （1）本研究中HIV/AIDS在启动HAART 6个月内的IRIS发生率为27.8%,多发生于HAART启动后1个月内,最常见疾病谱为结核病、疱疹病毒感染等感染性疾病.（2）IRIS组及非IRIS组在HAART前均存在Th1/Th2的失衡,前者的失衡趋向更明显,在HAART开始后都有恢复平衡的趋势,其中Th1的代表因子IL-2、INF-γ值的显著增高与Th2的代表因子IL-10值的显著下降可能参与IRIS的发生.