金属有机框架荧光传感器在食品中抗生素类兽药残留检测的研究进展

金属-有机框架材料(metal-organic frameworks,MOFs),是一类由金属离子或者是次级构筑单元与有机配体通过配位键自组装形成的材料,是近年快速发展的一种新型功能性检测材料。MOFs具有比表面积大、孔道尺寸可调和结构可控等优势,在构建高选择性和高灵敏度的发光传感器领域有着广阔的应用前景。该文对发光MOFs的不同荧光发光机理进行阐明和详细分类,总结了发光MOFs作为荧光传感器在抗生素类兽药残留检测中的应用实例,最后就目前存在的问题提出建议,并对未来的发展前景进行了展望。

传染性造血器官坏死病病毒糖蛋白杆状病毒表达系统的构建及其抗原性分析

为研究传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)主要结构蛋白糖蛋白(G),本研究采用RT-PCR方法从IHNV中提取RNA并进行反转录,经PCR方法扩增获得1 380bp的G蛋白基因片段,将其克隆到pFB-LIC-Bse杆状病毒载体中,成功构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-G,转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,获得了重组杆粒rBacmid-G。将重组杆粒转染至Sf9昆虫细胞,获得了重组杆状病毒。间接免疫荧光(IFA)和Western blotting分析显示,重组G蛋白可与抗组氨酸单抗(Anti-His)、抗IHNV鼠血清发生特异性反应,表明本研究克隆的IHNV G蛋白在真核表达系统中得到正确表达,且该蛋白具有良好的抗原性。本试验结果为研究G蛋白的功能及开发IHNV新型疫苗奠定了基础。

IHNV核衣壳蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定

采用RT-PCR方法从传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)中扩增RNA获得1 176 bp的核衣壳蛋白(N)基因,将其插入于pFB-LIC-Bse杆状病毒载体中,构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-N,转化至感受态细胞DH10Bac中,获得重组杆粒rBacmid-N。再将其转染至Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。IFA和Western Blot分析表明,重组N蛋白可以被辣根过氧化物酶(HRP)标记的组氨酸单抗(anti-His)识别,表明,IHNV N基因在昆虫细胞Sf9中获得了正确表达。为深入研究N蛋白的功能和免疫学特性奠定了基础。

黑羽鹌鹑ESRβ基因外显子多态性及其与产蛋性状的相关性分析

试验旨在研究鹌鹑雌激素受体β亚基(ESRβ)基因外显子多态性及其与产蛋性能的关联性,为鹌鹑产蛋性能候选基因的确立及分子标记辅助选育提供理论依据。选取健康蛋用黑羽鹌鹑为研究对象,开产后进行生产性能的持续统计(60d),采用PCR-SSCP法对鹌鹑ESRβ基因多态性进行检测,并运用SPSS 13.0统计软件进行ESRβ基因多态性与生产性能的相关性分析。PCR-SSCP检测结果发现,ESRβ基因外显子1、3、4、5、6、7和8均存在单核苷酸多态性。相关性分析结果表明,在开产蛋质量上,外显子3CD基因型与CC和DD基因型有显著性差异(P<0.05);在开产日龄上,外显子5DD基因型与CD和CC基因型有显著性差异(P<0.05);在平均蛋质量上,外显子7CD基因型与CC和DD基因型有显著性差异(P<0.05)。表明ESRβ基因与蛋用黑羽鹌鹑产蛋性状有一定关联性。

蛋白质杂化荧光金纳米簇的制备及在汞离子快速检测中的应用

以牛血清白蛋白为稳定剂和还原剂,采用一步法合成荧光金纳米簇,并对其进行了表征。制备的荧光金纳米簇呈较规则的球形,粒径均一,约为(2.00±0.05)nm,在紫外灯下发出明显的红色荧光,最大激发波长和发射波长分别为360和635 nm。Hg^(2+)可与制备的荧光金纳米簇特异性结合而使其荧光猝灭,基于此建立了"turn-off"型的荧光光谱法快速检测Hg^(2+)含量。优化了荧光金纳米簇的用量、p H值、检测体系等条件。荧光强度与Hg^(2+)浓度有良好的线性关系,在0.5~75.0μg/L范围内的线性方程为y=-26.76lgx+803.1(R2=0.9951),在75~900μg/L浓度范围内的线性方程为y=-0.27x+762.02(R2=0.9959),检出限为0.14μg/L(3σ)。在最优条件下,本方法可在3 min内完成检测。可快速、灵敏、简便地检测自来水中的Hg^(2+),自来水样品加标回收率在86.8%~113.4%之间(n=3),相对标准偏差小于15%。

多黏芽孢杆菌Dw-6抗革兰氏阳性菌多肽的分离纯化及抑菌活性机理

多黏芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)Dw-6是1株具广谱抗菌活性的拮抗菌株。该菌株发酵液经热处理、固相萃取及柱层析得到了1个单峰化合物DwGPB。该化合物对蛋白酶K较为敏感,但对胰蛋白酶不敏感。对供试革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和苏云金杆菌均具有强烈的抑制活性。苏云金杆菌经DwGPB处理后,细胞膜局部破损,内含物泄露,推测是在细胞膜上形成孔洞而导致细胞裂解。

副鸡禽杆菌3个血清型参考菌株生长曲线的测定和比较

为探索副鸡禽杆菌生长特性,比较不同血清型菌株生长特性的差异,采用分光光度法和菌落计数法分别测定副鸡禽杆菌血清A型(221株)、血清B型(0222株)、血清C型(Modesto株)3个参考菌株的生长曲线,对两种方法测定的生长曲线进行比较。结果表明,两种方法绘制的生长曲线差异较大,对数生长期和稳定期菌液OD 600nm值与活菌数对数之间呈现一元二次多项式回归关系。另外,3个血清型菌株的生长稳定期都比较短暂,各型菌株达到生长高峰的时间和活菌数都有差异。该试验为副鸡禽杆菌生物学特性的比较研究及疫苗的研制奠定了基础。

伪狂犬病病毒感染抗体监测及伪狂犬病流行状况分析

在北京大兴和顺义区2个使用伪狂犬病病毒(porcine pseudorabies virus,PRV)Bartha株基因缺失疫苗的规模化猪场进行为期3年的猪伪狂犬病野毒感染抗体跟踪监测,并进行猪场的临床状况和组织样品的PCR检测,结果显示,北京市2011—2012年间在猪伪狂犬病基因缺失疫苗免疫猪场发生了猪伪狂犬病的流行。提示,应对该状况加以重视,对其发病原因需进行进一步的病毒分离和毒株分子遗传学分析。

高效液相色谱串联质谱法测定鸡肉组织中氨苯砜残留的研究

研究建立了检测鸡肉组织中氨苯砜的高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）定量确证方法。样品采用1%乙酸-乙腈（v/v）提取,乙腈饱和正己烷脱脂,采用C18反相色谱柱分离,以乙腈和5 mmol/L乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸）为流动相,梯度洗脱,电喷雾电离,正离子-多反应监测扫描模式,氨苯砜的定量、定性离子分别为249.1〉156.0,249.1〉108.0。建立的方法在0.05-10μg/kg范围内线性良好,检测限为0.015μg/kg,定量限为0.05μg/kg,在0.05-5μg/kg的添加范围内,回收率在76.2%-94.5%之间,日内、日间变异系数均小于19.4%。

鹌鹑ESRα基因外显子的SNPs分析及其与产蛋性能相关性研究

旨在明确鹌鹑ESRα基因外显子多态性与其产蛋性能的关联性,为鹌鹑产蛋性能候选基因的确立及分子标记辅助选育提供依据。选取健康蛋用黑羽鹌鹑为研究对象,开产后进行生产性能的持续统计(60d)。PCR-SSCP法对鹌鹑雌激素受体α亚基(ESRα)基因多态性进行检测,结果表明,在ESRα基因Exon 1、3、4、6和8中均存在多态性。Exon 1在开产日龄上,CD基因型与CC和DD基因型差异达到显著性水平;Exon 8在开产蛋质量中,CD与DD和CC基因型差异显著。表明ESRα基因对蛋用黑羽鹌鹑产蛋性状有一定关联性。

荧光微球免疫层析法快速检测鸡饲料中喹乙醇的含量

为更灵敏地进行全价鸡饲料中喹乙醇（OLA）含量的快速检测,本研究将新型标记物荧光微球与喹乙醇单克隆抗体偶联,以该复合物为检测试剂制备荧光微球免疫层析试纸条,在肉眼检测的同时,将该装置与荧光微球定量侧向层析读数仪联合使用,可进行全价鸡饲料中喹乙醇含量的定量快速检测。研究结果证明,饲料中喹乙醇的定性和定量检测限分别为100μg/kg和0.51μg/kg,IC_（50）值为1.89 ng/m L,定量检测回收率为78.71%-90.83%。该试纸条特异性强、准确性高,保存期长。定量检测只需18 min左右,肉眼检测需38 min左右,与相同抗原和抗体制备的胶体金试纸条相比,该方法可大大提高灵敏度。

课程思政理念下的兽医药物分析课程教学改革与实践

动物药学专业人才已经逐渐成为各大兽药GMP企业急需的人力资源,而兽医药物分析课程是该专业的核心主干课程。充分汲取动物药学专业课中蕴含的思政资源,引导学生树立正确的世界观、乐观进取的人生观和积极向上的价值观。梳理药物分析理论与实验实训教学中蕴含的思政元素,将其融入药物分析课程教学中,并对融入的措施与实践进行了简要总结,旨在提高动物药学专业兽医药物分析课程课堂教学的育人效果,并为其他专业课程的思政教育提供参考。

“小班化模式”下动物药学专业学生创新能力的提升与评价

随着教育部《关于实施基础学科拔尖学生培养计划2.0的意见》等文件的出台,国家和社会对高等学校本科学生培养质量提出了更高的要求,结合国内动物保健品产业结构性调整及新产品研发能力正逐步成为企业核心竞争能力的行业发展趋势,动物药学专业人才的培养体系应更加侧重本专业学生创新能力的培养与提升。以我校动物药学专业“小班化”教学模式为依托,建立并优化了“互联网+线上教学+课堂教学+课外科研训练+校企联合实践教学”的学生创新能力培养体系,开展了以提升学生创新能力为目标的教学改革探索和实践,并形成了相应的质量考核体系与评价标准,为如何在动物药学专业本科教学中提升学生的专业创新能力进行了有益的探索。

山羊γ-干扰素的生物信息学分析及其在羊肾细胞中的瞬时表达

利用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中获得山羊γ-干扰素全长基因,进行基因序列分析后,将其克隆pCDNA3.1,构建重组表达质粒pCDNA3.1-CapIFN-γ,经脂质体转染至羊肾细胞中,并进行目的蛋白的SDS-PAGE和Western blot鉴定,分析CapIFN-γ重组蛋白的表达情况。利用细胞病变抑制法测定CapIFN-γ重组蛋白对羊痘病毒的抗病毒活性。结果显示,扩增的CapIFN-γ基因序列全长为501 bp,共编码166个氨基酸,其中前23位氨基酸为信号肽序列,CapIFN-γ的α-螺旋和无规则卷曲含量较高,羊肾细胞表达的目的蛋白约为25 kD,通过对CapIFN-γ的抗病毒活性检测,发现其对羊痘病毒的增殖具有一定抑制作用,其抗病毒活性为2.2×10^(3)U/mL。本研究利用羊肾细胞成功表达了CapIFN-γ重组蛋白,并对其活性进行了初步分析,为真核表达系统获取的CapIFN-γ抗病毒作用机制的深入研究和抗山羊病毒病产品研发奠定了基础。

柔嫩艾美耳球虫感染鸡盲肠内容物非靶向代谢组学分析

【目的】基于非靶向代谢组学探究感染柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)后鸡盲肠内容物中代谢物的变化差异,为识别和鉴定鸡球虫病潜在的生物标志物及治疗靶点提供参考依据。【方法】将60羽健康罗曼粉鸡随机分为正常组和模型组,每组30羽,模型组经口灌服柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊(1×104个/羽),正常组经口灌服等体积生理盐水,连续灌服5 d,然后解剖试验鸡,无菌采集鸡盲肠内容物,基于非靶向代谢组学分析正常组和模型组鸡盲肠内容物,筛选出显著差异代谢物进行KEEG代谢通路富集分析。【结果】从模型组与正常组的鸡盲肠内容物中共筛选到253种显著差异代谢物,其中,上调表达的显著差异代谢物有184种,包含L-酪氨酸、L-蛋氨酸、L-谷氨酰胺、牛磺酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸乙酯、胆碱和磷酸胆碱等;下调表达的显著差异代谢物有69种,包括脱氧腺苷、L-缬氨酸、N-(5-氨基戊基)乙酰胺和N-乙酰-L-谷氨酸等。正离子模式下,主要有牛磺酸、磷酸胆碱、甜菜碱、L-亮氨酸、L-谷氨酰胺、胆碱、神经鞘氨醇和L-色氨酸等20种代谢物上调表达;负离子模式下,主要有花生四烯酸、牛磺酸、L-苯丙氨酸、L-亮氨酸、琥珀酸、黄嘌呤、尿嘧啶和L-谷氨酰胺等20种代谢物上调表达。鸡盲肠内容物显著差异代谢物主要被富集到ABC转运蛋白、氨酰tRNA生物合成、赖氨酸降解、嘧啶代谢、嘌呤代谢、不饱和脂肪酸生物合成等20条KEEG代谢通路上。【结论】柔嫩艾美耳球虫感染后鸡盲肠代谢物发生显著变化,主要影响ABC转运蛋白、氨酰tRNA生物合成、氨基酸代谢、嘧啶代谢和嘌呤代谢等代谢通路。因此,牛磺酸、磷酸胆碱、L-谷氨酰胺、花生四烯酸等显著差异代谢物可作为潜在的生物标志物,用于鸡球虫病诊断检测。