山西省晋中和晋南肉牛捻转血矛线虫的核酸检测

为了解山西省部分地区肉牛捻转血矛线虫的感染类型和感染率,从山西省晋中(祁县、太谷区)和晋南(稷山县)3个地区采集431份肉牛粪便样本,对捻转血矛线虫ITS-2部分序列进行扩增、测序及鉴定,分析山西省部分地区肉牛捻转血矛线虫的感染情况。结果显示,在431份检测样品中,7份粪便样品中扩增出捻转血矛线虫ITS-2序列,且序列完全一致,总感染率为1.62%;阳性样品均来源于6~12月龄公牛,晋中地区肉牛感染率为2.43%(5/206),晋南地区肉牛感染率为0.89%(2/225);晋中地区阳性样品均来源于祁县,来源于太谷区的样品中无阳性。序列比对结果显示,扩增出的序列与GenBank中来源于羊的捻转血矛线虫序列相似度为99.62%,说明感染牛与羊的捻转血矛线虫为同一种。表明山西两地区均存在捻转血矛线虫感染,感染率较低,感染牛的捻转血矛线虫为羊种捻转血矛线虫。

云南部分地区黑山羊的芽囊原虫分子检测及基因分型

目的芽囊原虫(Blastocystis)是一种重要的人和动物消化道寄生虫。主要引起腹泻、腹痛及消瘦等疾病。其流行呈世界性分布,且发展中国家有更高的感染率。至今已确定的17种芽囊原虫基因亚型(ST1-17),其中ST1-9属于人兽共患型,ST10-17截至目前只在动物体内所检测到。方法本研究就在云南5个地区采集到的907份样品,基于SSU rRNA序列通过分子生物学方法检测,芽囊原虫总体检出率为41. 3%(375/907)。结果共鉴定出3个已知基因亚型(ST5,ST10,ST14)和4个新亚型(ST-novel 1,ST-novel 2,ST-novel 3,ST-novel 4),其中ST5作为该地区的芽囊原虫优势基因亚型。本试验还通过统计学方法分析其在年龄、性别和地区间均存在显著性差异。结论本研究不仅为云南地区黑山羊芽囊原虫防控提供了数据支撑,也进一步评估当地的公共卫生安全风险,具有重要公共卫生意义。

弓形虫弱毒疫苗的研究进展

弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫,可感染包括人在内的几乎所有的温血动物,全球约有1/3的人口感染弓形虫病。宿主感染弓形虫后常呈隐性感染,但对于免疫力低下的人群,如艾滋病患者或者孕妇,可引起严重的临床症状甚至死亡。随着人类生活质量的不断提高,弓形虫给人类健康、畜牧业发展和公共卫生安全带来的隐患与日俱增。目前,尚无针对弓形虫病的特效药,疫苗将是控制弓形虫病最有效的手段。传统的弓形虫疫苗免疫效果较差,自然筛选获得的弱毒苗存在返毒的可能,不适用于免疫缺陷的动物或人群。传统基因编辑技术构建基因敲除株的效率低且过程复杂。随着基因编辑技术CRISPR-Cas9在弓形虫研究中的应用,为研制弓形虫疫苗提供了新的方向,已成功构建了许多弱毒疫苗虫株,这些虫株具有很好的免疫保护作用,是弓形虫疫苗最有希望的候选者。本文综述弓形虫弱毒疫苗的研究进展和发展前景,为弓形虫疫苗的后续研究提供参考。

毒鼠强中毒的临床急救体会

目的探讨毒鼠强中毒的临床表现与救治。方法对我院收治的51例毒鼠强中毒患者的临床资料进行了回顾性分析。结果51例患者50例（98.04%）治愈,死亡1例（1.96%）,疗效满意。结论院前早期明确诊断及胃肠道毒物的清除,及时进行血液灌流配合内科综合治疗,是抢救毒鼠强中毒成功的有效措施。

山西省绵羊捻转血矛线虫的感染现状及遗传变异分析

目的了解山西省绵羊捻转血矛线虫的感染现状及遗传变异情况。方法采集山西省晋北的山阴县、晋中的祁县和晋南的稷山县绵羊粪样,并提取粪样基因组DNA。利用捻转血矛线虫种特异性引物,扩增样品的核糖体内转录间隔区-2(ITS-2)部分序列,经凝胶电泳观察和DNA测序分析鉴定其种属,评估不同地区绵羊捻转血矛线虫的感染现状。取PCR阳性样品,采用扩增捻转血矛线虫ITS全长序列的保守引物,PCR扩增ITS全长序列并测序,在DNAMAN 9.0中与GenBank中已公开的捻转血矛线虫ITS-2和ITS全长序列进行比对,查找碱基变异位点。使用DNAstar 7.1软件计算捻转血矛线虫ITS序列的碱基含量,并对GenBank中已报道的不同地区、不同宿主来源的18条捻转血矛线虫ITS全长序列及本研究获得的2条ITS全长序列进行序列相似性分析,用最大似然法构建基于ITS全长序列的系统进化树,分析捻转血矛线虫的遗传变异情况。结果共采集401份绵羊粪样,其中69份粪样扩增出ITS-2片段(占17.2%);序列分析结果显示,获得的ITS-2部分序列与捻转血矛线虫(GenBank登录号OQ674251)的序列相似性为100%,故鉴定为捻转血矛线虫。其中山阴县、稷山县和祁县的绵羊捻转血矛线虫阳性率分别为47.4%(64/135)、3.0%(5/169)和0(0/97)。69份ITS-2阳性的粪样中,4份样品成功扩增出ITS全长序列,其存在两种基因型,且这两种基因型之间仅在ITS-1序列中226 bp处存在1个碱基差异。基于捻转血矛线虫ITS全长序列的序列相似性分析发现,两种基因型之间的变异率仅为0.1%;18条不同地区和不同宿主来源的捻转血矛线虫的序列间变异率为0~2.6%。系统进化树分析结果显示,本研究中鉴定的序列(GenBank登录号OP518297和OP518298)与来自美国(GenBank登录号EU086378)、老挝(GenBank登录号AB908961)和中国其他地区(GenBank登录号HQ844231)的序列处于同一分支上;捻转血矛线虫的群体遗传结构无明显的地理和宿主相关性。结论山西省调查地区的绵羊捻转血矛线虫感染率较高,捻转血矛线虫的遗传变异率较低,与其他地区、不同宿主来源的捻转血矛线虫之间无明显差异。

莫能菌素钠、磺胺嘧啶和蒿甲醚体内外抗弓形虫RH株速殖子的效果分析

通过弓形虫RH株速殖子在宿主体内和体外的感染试验,比较了莫能菌素钠、磺胺嘧啶和蒿甲醚的抗弓形虫效果。体外试验:用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,评价了3种不同浓度的药物对人包皮成纤维细胞(HFF)毒性及增殖情况;在药物的安全浓度范围内,用5×10^4个弓形虫RH株速殖子感染5×10^5个HFF细胞,每种药物设置5个浓度梯度,培养48 h后观察药物体外抑制虫体在细胞内的增殖效果;以相对抑制率为指标,评估药物的体外抗弓形虫效果。体内试验:用5×10^4个弓形虫RH株速殖子接种小鼠,4 h后,3种药物分高中低剂量组进行灌胃给药,连续给药5 d后停药,观察并记录小鼠每天死亡情况;且每天每组随机抽取1只小鼠,检查腹腔液中速殖子量及停药后是否复发,评价药物体内抗弓形虫效果。体外试验结果表明:莫能菌素钠可显著抑制细胞内弓形虫的增殖,效果优于蒿甲醚,而磺胺嘧啶的效果波动性较大。体内试验结果表明:莫能菌素钠显著延长小鼠平均存活时间,磺胺嘧啶次之,蒿甲醚最次。体内和体外试验结果均显示出莫能菌素钠能显著抑制弓形虫速殖子增殖,延长小鼠存活时间。本研究为后续抗弓形虫药物研究以及临床用药提供了参考依据。

弓形虫Tgcsp2基因敲除株的表型和毒力

为研究弓形虫冷休克蛋白2(cold shock domain protein 2 of T.gondii,Tgcsp2)在弓形虫感染宿主过程中的作用,本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了弓形虫Tgcsp2基因缺失株(ΔTgcsp2)。通过空斑试验和细胞裂解试验探究ΔTgcsp2虫株在体外的生长能力,结果表明ΔTgcsp2虫株的空斑形成能力和细胞裂解能力相对于RH野生株较弱;弓形虫感染细胞要经过入侵、复制和逸出3个过程。为探究Tgcsp2影响体外感染的具体过程,本研究对ΔTgcsp2虫株和RH野生株进行入侵试验、复制试验和逸出试验,结果表明ΔTgcsp2虫株的入侵能力、复制能力和逸出能力都有不同程度的减弱;将ΔTgcsp2虫株和RH野生株感染BALB/c小鼠进行了体内毒力试验;结果表明,与RH野生株相比,ΔTgcsp2虫株对小鼠的毒力减弱。综上所述,Tgcsp2基因对弓形虫体外生长和体内毒力具有重要的作用。