绿茶提取物对人卵巢癌SKOV3细胞生长抑制作用及作用途径的探讨

目的探讨绿茶提取物(green tea extract,GTE)对人卵巢癌SKOV3细胞生长抑制作用及其作用途径。方法 SKOV3细胞的培养液内添加GTE,培养后,应用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测SKOV3细胞的生长曲线;免疫细胞化学法检测细胞抗凋亡蛋白酶(Bcl-xl)、细胞凋亡蛋白酶(Caspase-3)等凋亡相关蛋白的表达;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、芳香化酶(aromatase)等蛋白的表达水平。结果 MTT法显示,培养液内添加不同浓度GTE均能明显抑制SKOV3细胞生长(P<0.05),且呈明显的浓度依赖性;免疫细胞化学法显示,培养液内添加GTE 80μg/L作用24 h后,SKOV3细胞中Bcl-xl蛋白的平均吸光度(A)值为(0.228±0.032),与对照组(0.303±0.014)相比显著下调(P<0.01),Caspase-3蛋白平均A值为(0.193±0.043),与对照组(0.1 35±0.030)相比明显上调(P<0.05);Western blotting法显示,经GTE(40、80μg/L)作用24 h后,SKOV3细胞中ERα、aromatase的蛋白表达明显下调,ERα与内参β-肌动蛋白(β-actin)的比值分别为(0.665±0.042)、(0.208±0.020),与对照组(0.846±0.046)相比均显著降低(P<0.01),aromatase与β-actin的比值分别为(0.251±0.030)、(0.129±0.054),与对照组(0.728±0.026)相比亦均显著降低(P<0.01);ERβ蛋白的表达明显上调,其与β-actin的比值为(0.322±0.081)、(0.735±0.032),与对照组(0.098±0.039)相比显著升高(P<0.01)。结论 GTE在体外能有效抑制SKOV3细胞的生长与增值,其作用机制可能与诱导SKOV3细胞凋亡,并可下调ERα、aromatase蛋白的表达水平,上调ERβ蛋白的表达水平有关。

绿茶提取物对人卵巢癌SKOV3细胞生长增殖的影响及其作用途径

目的:探讨绿茶提取物(green tea extract,GTE)对人卵巢癌SKOV3细胞株生长增殖的影响及其作用途径。方法:应用MTT法观察SKOV3细胞生长增殖的情况;光学显微镜观察SKOV3细胞的形态学变化;流式细胞术(FCM)检测SKOV3细胞周期及凋亡的情况;DAPI标记法观察细胞凋亡形态变化;Western blotting检测p-ERK1/2、ERK1/2、Caspase-3及Bcl-xl等相关蛋白的表达水平。结果:随GTE浓度的增加及作用时间的延长,SKOV3细胞存活率逐渐降低(P<0.01),SKOV3细胞数目逐渐减少,细胞受损逐渐增多;经GTE(80μg/L)处理24h、48h、72h的SKOV3,G0/G1期细胞比例与对照组比均显著减少(P<0.01),S期细胞比例及sub-G0期细胞比例与对照组比均显著升高(P<0.01),而添加GTE24h后,G2/M期细胞比例与对照组比明显升高(P<0.05);DAPI标记示有典型的凋亡小体;经GTE(40μg/L、80μg/L)作用24h后与对照组比,SKOV3细胞中p-ERK1/2、Bcl-xl蛋白表达下调,p-ERK1/2分别为0.334±0.030、0.053±0.140(P<0.01);Bcl-xl分别为0.410±0.026、0.267±0.020(P<0.01);Caspase-3蛋白分别为0.128±0.090、0.287±0.028,与对照组相比显著升高(P<0.01),而ERK1/2蛋白则未见明显变化(P>0.05)。结论:GTE在体外能有效地抑制SKOV3细胞的生长,其作用途径可能是通过抑制ERK信号通路的转导,导致细胞周期阻滞,并下调Bcl-xl、上调Caspase-3,最终导致SKOV3细胞凋亡。

表没食子儿茶素没食子酸酯对人宫颈癌细胞生长抑制作用及作用途径的探讨

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人乳头瘤病毒(HPV)呈阳性表达的宫颈癌CaSki细胞与HeLa细胞的生长抑制作用及其作用途径。方法在CaSki细胞与HeLa细胞的培养液中添加EGCG后,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测两种宫颈癌细胞的生长曲线;4',6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)荧光标记法观察细胞凋亡的形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测病毒致癌基因E6(HPV E6)、雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、芳香化酶等蛋白的表达水平。结果 MTT法显示,培养液内添加EGCG能明显抑制CaSki细胞与HeLa细胞的生长,并且呈浓度和时间依赖性;DAPI荧光标记法显示,25μmol/L EGCG作用CaSki细胞和50μmol/L EGCG作用HeLa细胞24h后均呈典型的细胞凋亡形态学改变;Western blot法显示,25μmol/L EGCG作用CaSki细胞和50μmol/L EGCG作用HeLa细胞12、24、48h后,HPVE6、ERα、芳香化酶的蛋白表达量逐渐减低,ERβ的蛋白表达量增加,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。结论 EGCG在体外能有效抑制人宫颈癌CaSki细胞与HeLa细胞的生长与增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调HPVE6、ERα、芳香化酶蛋白的表达量、上调ERβ的蛋白表达量有关。