本生烟叶盘法转化及高效再生条件的优化

本生烟(Nicotiana benthamiana)是普通烟草(Nicotiana tabacum)的近亲,是“植物-病原物”互作的模式植物之一。叶盘法转化法在植物分子生物学中有着广泛的应用。本研究比较了本生烟叶盘法转化过程中,不同预培养时间、共培养时间、共培养温度及共培养时农杆菌的浓度对转化效率的影响。结果发现,较低的共培养温度(18℃),能更好地平衡转化效率和后期筛选。以此为前提条件,本研究优化了该过程中的其他条件。同时,为进一步提高再生效率,研究了不同硝酸银浓度和植物凝胶浓度对本生烟再生的影响;并在此基础上,设计并进行了双因素响应面的分析实验。结果发现,培养基同时使用4.3 mg/L的硝酸银和8.8 g/L的植物凝胶时,再生效率最高。