羟基红花黄色素A对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用及VEGF表达的影响

目的观察羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)对C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用,并观察其对肿瘤组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法 C57BL/6近交系小鼠30只,造模后,分为5组,每组6只,分别使用生理盐水、环磷酰胺(CTX)及HSYA(分小、中、大3个剂量)作用于动物模型。观察各组肿瘤体积大小,并在造模第22天处死所有小鼠,无菌条件下剥取瘤组织并称重,计算抑瘤率;应用免疫组化法及图像分析技术检测瘤组织VEGF表达的情况。结果 HSYA中、小剂量组,在瘤株接种第10、16、22天肿瘤体积与生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05);在第22天,瘤重与生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05);在肿瘤组织中VEGF表达上,中、小剂量组与生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05),而HSYA大剂量组肿瘤体积、瘤重及VEGF表达上均与生理盐水组比较差异无统计学意义。结论羟基红花黄色素A能抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长,并能降低小鼠Lewis肺癌移植瘤组织中VEGF的表达。

携带人livin α基因腺病毒载体的构建及其在树突状细胞的表达

目的:本研究旨在利用AdMax系统构建携带人抗凋亡基因livinα的重组腺病毒载体(rAd-livinα),并感染树突状细胞(Dendritic cells,DCs),制成DCs疫苗,为下一步用此疫苗抗肿瘤实验奠定基础。方法:以质粒pIRES2-EGFP-livinα为模板,通过PCR扩增出人livinα基因cDNA序列,再将livinα基因cDNA亚克隆于穿梭质粒pDC316-EGFP-cmv,获得重组质粒pDC316-EGFP-cmv-livinα。将鉴定后的重组穿梭质粒pDC316-EGFP-cmv-livinα与腺病毒辅助质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组获得重组腺病毒rAd-livinα。用重组腺病毒rAd-livinα感染人DCs后,Western blot方法分析livinα蛋白表达,流式细胞仪检测DCs的表型变化。结果:在HEK293细胞内能观察到重组腺病毒rAd-livinα绿色荧光蛋白的表达。rAd-livinα经PCR鉴定特异性地扩增出符合预期大小的片段。rAd-livinα感染的DCs中可检测到livinα蛋白的表达,并且感染的DCs与未感染DCs比较,可明显提高了细胞表面分子CD83、CD86和HLA-DR的表达(P<0.05)。结论:通过AdMax系统成功构建了重组腺病毒rAd-livinα,使livinα蛋白有效表达于DCs中,并且重组腺病毒感染的DCs的成熟度得到提高。

体外树突状细胞疫苗策略抗肿瘤免疫治疗研究进展

树突状细胞(DCs)在激活天然的免疫反应和获得性免疫反应中具有独一无二的作用,应用DCs为基础的肿瘤免疫治疗已成为肿瘤治疗的研究焦点。改善DCs疫苗的效能的方法有体外DCs策略和体内DCs策略。本文就体外DCs疫苗策略在肿瘤免疫治疗中的研究进展做一综述。

livin蛋白在肺癌胸腔积液中的表达及其评估晚期肺癌预后的价值

目的检测晚期肺癌患者胸腔积液中livin蛋白水平,并评估其对肺癌伴胸腔积液患者诊断及预后的价值。方法收集肺癌合并胸腔积液患者72例,良性肺部病变伴胸腔积液患者65例,用酶联免疫吸附实验测定胸腔积液中livin蛋白水平。结果肺癌组中胸腔积液livin蛋白水平为(2.58±0.07)ng/mL,显著高于对照组(0.89±0.04)ng/mL,livin蛋白水平对诊断肺癌的最佳切分值为2.43 ng/mL,其敏感性为67.00%,特异性为73.10%。肺癌患者胸腔积液livin蛋白≤2.43 ng/mL者总生存期明显比胸腔积液livin蛋白>2.43 ng/mL者长。Cox比例风险回归分析显示,肺癌患者胸腔积液中高livin蛋白水平是肺癌患者不良预后的独立指标。结论胸腔积液livin蛋白水平可作为肺癌伴胸腔积液诊断及预后评判的独立指标。

二烯丙基二硫化物对小鼠Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)对小鼠Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用。方法取对数生长期的细胞,分别用0、20、50、100、200μmol/L的DADS处理24 h,用CCK-8法测算细胞生长抑制率。结果用20、50、100、200μmol/L的DADS处理24 h后,小鼠Lewis肺癌细胞生长抑制率分别为16.35%±0.40%、28.85%±0.70%、35.09%±0.50%、41.14%±1.10%,不同DADS药物浓度间比较,P均<0.01。结论 DADS呈浓度依赖性抑制Lewis肺癌细胞的增殖。

重组人5型腺病毒对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长的抑制作用

目的探讨重组人5型腺病毒(rAd-5)对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长的影响。方法建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤动物模型,实验组瘤内直接注射rAd-5腺病毒后,测量移植瘤体积;切除肿瘤,再次接种Lewis肺癌细胞,观察肿瘤生长情况。对照组注射相应体积的PBS。结果 Lewis肺癌细胞接种第8天,全部小鼠长出肿瘤。实验组肿瘤的体积在肿瘤细胞接种第11、14天时,都显著小于对照组(P<0.01);再次接种Lewis肺癌细胞后,实验组肿瘤的生长速度也显著小于对照组,在再次接种肿瘤细胞后第14～22天,肿瘤体积都显著小于对照组(P<0.05或0.01)。结论 rAd-5对Lewis肺癌细胞生长具有抑制作用,对肿瘤切除术后再次接种的肿瘤生长也具有抑制作用。

阿司匹林对血管紧张素Ⅱ诱导平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的:观察阿司匹林对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响及其机制。方法:采用组织贴块法培养人脐动脉平滑肌细胞,选3-9代细胞用于实验。①阿司匹林细胞毒性检测:实验分对照组和阿司匹林5 mmol/L组。两组培养24 h后,取上清液,用乳酸脱氢酶活性测定法,观察阿司匹林加入对细胞有无毒性。②阿司匹林抗增殖效果:实验分5组,对照组、AngⅡ组、AngⅡ+阿司匹林0.5 mmol/L组、AngⅡ+阿司匹林1 mmol/L组和AngⅡ+阿司匹林2 mmol/L组。以上各组分别培养1 d、3 d、5 d后,采用四唑盐比色法测各孔的吸光值。③NO含量检测:实验分4组,对照组、阿司匹林2 mmol/L组、AngⅡ组和AngⅡ+阿司匹林2 mmol/L组。以上各组分别培养24 h后,收集细胞培养上清液按试剂盒说明书检测NO含量。④细胞周期检测:实验分3组,对照组、AngⅡ组和AngⅡ+阿司匹林2 mmol/L组。以上各组分别培养24 h后,收集细胞,用流式细胞仪检测细胞周期。结果:①与对照组比较,阿司匹林5 mmol/L组细胞上清液中乳酸脱氢酶活性无明显升高(P>0.05)。②阿司匹林(0.5、1、2 mmol/L)呈剂量依赖性地抑制脐动脉平滑肌细胞的增殖,抑制的最大效果在本实验内显示为2 mmol/L浓度的阿司匹林在培养第5天时,与AngⅡ组比较有极显著性差异(0.27±0.01 vs 0.74±0.03,P<0.01)。③AngⅡ刺激脐动脉平滑肌细胞24 h后,可降低细胞培养上清液中NO的含量,与对照组比较有显著差异[(54.08±5.69)μmol/L vs (70.27±3.99)μmol/L,P<0.05];而加入阿司匹林2 mmol/L干预后,可升高上清液中NO的含量,与AngⅡ组比较有极显著差异[(63.31±5.41)μmol/L vs(54.08±5.69)μmol/L,P<0.01]。④与AngⅡ组比较,阿司匹林(2 mmol/L)可使细胞静止期/DNA合成前期(G0/G1期)的脐动脉平滑肌细胞所占比例显著升高[(62.05±1.55)%vs(48.72±2.31)%,P<0.05],而DNA合成期(S期)细胞所占比例显著降低[(24.77±2.82)%vs(35.77±2.13)%,[<0.05]。结论:阿司匹林能呈剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的脐动脉平滑肌细胞的增殖,抑制细胞在G0/G1期,促进脐动脉平滑肌细胞NO的产生。

重组腺病毒载体Ad5-EGFP感染人树突状细胞的研究

目的探讨重组腺病毒载体AdS—EGFP感染人树突状细胞（dendritic cell，DC）的最佳条件。方法采用密度梯度离心法分离健康成人外周血中的单个核细胞（PBMC），再以黏附法分离出单核细胞，加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM—CSF）、重组人白细胞介素-4（rhIL-4）、重组人肿瘤坏死因子-α（rhTNF-α）等细胞因子诱导培养出DC，动态观察细胞形态，流式细胞仪检测其表面标志。AdS—EGFP以梯度感染复数值（MOI）10、100、200、400、600、800、1000pfu／cell感染人DC，于感染后24、48h，荧光倒置显微镜观察增强的绿色荧光蛋白（EGFP）表达，KS400型图像分析仪测定感染后48h的感染效率。结果MOI从10-800pfu／cell时，EGFP阳性细胞数量逐渐增多，感染效率和病毒滴度呈量效关系，当MOI为800pfu／cell时可获得较佳的感染效率，EGFP阳性细胞数量达到峰值，感染率达到95．25％。结论Ad5-EGFP是感染人DC的较理想载体，通过选择恰当的MOI值能提高细胞对重组腺病毒的摄人，从而提高感染效率。

慢性心力衰竭患者外周血NF-κB、血清TGF-β1与心室重构的相关性

目的探讨慢性心力衰竭(CHF)患者血清转化生长因子(TGF)-β1和外周血核因子(NF)-κB的表达变化及其与心室重构指标的相关性。方法选取CHF患者(CHF组)96例和体检健康者(对照组)30例,应用心脏超声检测结果,计算平均室壁应力(MWS)和左心室心肌质量指数(LVMI);ELISA法检测血清TGF-β1和外周血NF-κB水平;分析上述指标间的相关性。结果CHF组患者MWS和LVMI,以及血清TGF-β1、外周血NF-κB表达水平均明显高于对照组(P<0.01),且伴随心功能分级增大而提高(P<0.01);CHF患者血清TGF-β1、外周血NF-κB表达水平与心室重构指标MWS和LVMI均呈正相关(P<0.01);应用多元回归分析显示,血清TGF-β1和NF-κB水平与LVMI均呈独立正相关(P<0.01)。结论 CHF患者血清TGF-β1、外周血NF-κB表达水平显著增加,与CHF患者心室重构严重程度呈正相关,也是CHF患者心室重构严重程度的独立影响因素。

Livin基因修饰的骨髓间充质干细胞移植治疗对急性心肌梗死大鼠心功能的影响

目的:探讨livin修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植改善急性心肌梗死大鼠心功能的作用及livin和促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7、caspase-9在感染后的表达情况。方法:通过全骨髓培养法分离培养骨髓间充质干细胞,感染携带livin基因的重组腺病毒后用流式检测其对MSCs凋亡的影响。通过Western blot法分别检测livin、caspase-3、caspase-7和caspase-9的蛋白表达情况。采用冠状动脉左前降支结扎法建立心肌梗死模型,然后实验分4组进行:无胎牛血清的DMEM组;单纯干细胞治疗组(MSCs组);空载腺病毒转染干细胞组(r Ad-control/MSCs)组;livin基因转染干细胞组(r Ad-livin/MSCs组)。1个月后采用生理仪记录各组大鼠左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt_(max))和左室内压最大下降速率(-dp/dt_(max))来评价大鼠心功能。结果:r Ad-livin/MSCs组凋亡率较MSCs组和r Ad-control/MSCs组显著降低(P<0.05);r Ad-livin/MSCs组抗凋亡蛋白livin明显上升(P<0.05),促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7及caspase-9表达显著下降(P<0.05);细胞移植后1个月,r Ad-livin/MSCs组心功能比MSCs组改善更明显(P<0.05)。结论:r Ad-livin感染MSCs后可促进抗凋亡蛋白livin的表达,同时降低促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7和caspase-9的表达及细胞凋亡率。r Ad-livin/MSCs移植能进一步改善心肌梗死大鼠心功能。

加替沙星在人体内的药动学和血药浓度测定

目的 :用HPLC 紫外法测定人体内加替沙星的血药浓度和药动学。方法 :用HPLC 紫外法测定加替沙星的血药浓度 ,1 0名男性受试者口服单剂量 4 0 0mg加替沙星片后 ,研究人体内药动学。结果 :HPLC 紫外法测定检测波长 2 93nm ,血浆标准曲线回归方程 :Y =0 .5 90C +0 .0 6 1 ,r =0 .9998。检测浓度范围 :0 .0 5 7～ 5 .2 2mg·L-1 ,相对回收率在 97.1 2 %～1 0 2 .5 6 %之间 ,日内、日间RSD均在 1 5 %以内。 1 0名男性受试者口服单剂量 4 0 0mg加替沙星 ,药时曲线符合二房室模型 ,主要药动学参数Tmax为 1 .97h ,Cmax为 3.0 1mg·L-1 ,t1 / 2 ( β) 为 9.83h ,AUC为 2 8.77mg·h·L-1 ,与国外文献基本一致。结论 :HPLC 紫外法测定加替沙星血药浓度 ,操作简便易行 ,重现性好 ,符合血药浓度监测及人体内药动学研究要求。

以树突状细胞为基础的肿瘤免疫治疗策略研究进展

树突状细胞(DC)是目前发现的功能最强的专职抗原提呈细胞,它具有激活T淋巴细胞和诱导免疫反应的功能,如今DC体外培养的方法日趋成熟,以DC为基础的免疫治疗已成为肿瘤治疗的研究热点,改善DC疫苗效能使它能更好的为临床治疗肿瘤服务尤为重要。改善DC疫苗效能的方法有体外DC疫苗增效策略和体内DC疫苗增效策略。本文主要综述了体内DC疫苗策略在肿瘤免疫治疗中的研究进展。

抑制血管生成在肺癌治疗中的研究进展

新生血管在肿瘤的生成过程中起着重要的作用，对于其发生机制一直在进行研究。血管内皮生长因子（VEGF）是肿瘤血管生成最关键的刺激因子，它不但能够刺激肿瘤血管的生成，而且与肿瘤的转移、浸润有密切的关系。本文就肿瘤血管生成的机制及VEGF与肺癌关系的最新进展做一简要综述。

肺炎支原体感染与冠心病及阿奇霉素抗感染效果

目的探讨肺炎支原体(MP)感染与冠心病(CHD)的关系及阿奇霉素治疗MP感染CHD的效果。方法采用固相酶联免疫吸附(ELISA)方法,对90例冠心病患者和30例健康对照者进行外周血MP抗体IgG检测;90例冠心病患者中血MP抗体IgG阳性的患者,随机分为二组:安慰剂对照组和阿奇霉素治疗组。治疗3个月后复查血清MP抗体lgG。结果冠心病组90例,外周血清MP抗体IgG阳性21例(23.3%),健康对照组30例中MP抗体IgG阳性1例(3.3%),两组比较差异有显著性(P<0.05);阿奇霉素治疗组11例,治疗后MP抗体IgG转阴率为81.8%(9/11),安慰剂对照组10例,治疗后转阴率为50.0%(5/10),两组比较差异有显著性(P<0.01)。结论肺炎支原体感染与冠心病发生发展明显相关;及时、足量的阿奇霉素对MP感染的CHD干预治疗,可提高MP抗体IgG转阴率。

心肺复苏过程中进行早期抗凝和溶栓治疗的疗效分析

目的研究心肺复苏中早期抗凝和溶栓治疗可行性及疗效。方法把心跳骤停后进行心肺复苏(CPR)术的患者61例,随机分为3组:常规CPR组20例、抗凝组21例和溶栓组20例。观察各组自主循环恢复率(ROSC)、24 h存活率、出院率及严重出血率。结果相比常规CPR组和抗凝组,心肺复苏过程中早期溶栓治疗可以显著提高自主循环恢复率(P<0．05)、24 h存活率(P<0．05)及出院率(p<0．01),但溶栓治疗显著增加了严重性出血的发生率(p<0．05)。相比常规CPR组,心肺复苏过程中早期抗凝治疗对自主循环恢复率、24 h存活率、出院率及严重性出血的发生率无显著影响(P>0．05)。结论与非溶栓治疗比较,溶栓治疗增加了的严重性出血的发生率。但从整体而言,CPR过程中进行溶栓治疗可以显著提高患者自主循环恢复率、24 h存活率及出院率。

非小细胞肺癌患者EGFR基因突变

目的了解非小细胞肺癌(NSCLC)患者的肿瘤组织表皮生长因子受体(EGFR)基因突变情况。方法利用突变扩增阻滞系统(ARMS)-聚合酶链反应(PCR)检测EGFR基因18、19、20、21外显子突变状态,并分析各突变类型与临床特征的相关性。结果共收集并匹配到资料完整的NSCLC患者673例,EGFR基因突变率为49.0%(330/673),突变类型以单一敏感型突变19del和L858R为主,占总突变的87.9%(290/330),也检测出8例(2.4%)19del、L858R混合突变及18例(5.5%)包括T790M在内的单一或混合性的耐药型突变。多因素Logistic回归分析显示,EGFR基因突变与性别、吸烟史、病理类型及癌胚抗原(CEA)水平显著相关。结论年龄低于60岁、CEA水平高的女性肺腺癌患者EGFR基因突变率高。

非小细胞肺癌EGFR突变非侵入性检测技术研究进展

在过去的十年里,癌症患者的管理模式已经逐渐转向为基于分子突变检测的个体化模式。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)基因突变是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的重要驱动因素,针对EGFR的靶向治疗和传统化疗相比,显示出显著的安全性和有效性。然而,并不是所有的EGFR突变患者都可接受EGFR靶向治疗,不同的突变类型往往预示着不同的临床结局,如敏感性突变EGFR 19-Del、L858R和耐药性突变20ins。此外,如今已经开发出第三代TKI药物Osimertinib(AZD9291)和Rociletinib(CO-1686)可使因EGFR T790M突变,导致初代TKI耐药的患者进一步获益。因此,治疗前了解患者EGFR突变状态,治疗过程中持续监测耐药基因EGFR T790M突变情况,对NSCLC患者靶向药物的管理有着重要的意义。最近几年来,"液体活检"技术得到快速的发展,让我们看到采用非侵入性方法以实时监测耐药性突变成为现实的可能。在本综述中,我们回顾了NSCLC中检测EGFR突变的多种非侵入性检测技术在不同液体样本的临床应用。

肿瘤微环境内的免疫细胞、PD-1与EGFR-TKIs疗效关系新进展

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFRTKIs)靶向治疗如今成为EGFR基因突变的晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的主导治疗方式,但随着用药时间的延长,大部分患者出现靶向药物的耐药。肿瘤微环境是肿瘤细胞赖以生存和发展的内环境,微环境中调节T(regulatory T,Treg)细胞、树突状细胞、巨噬细胞、成纤维细胞等免疫细胞介导的免疫反应以及程序性死亡受体1(programed cell death protein 1,PD-1)及其配体PD-1L/PD-2L可能参与EGFR-TKIs的耐药形成,现本综述将阐述肿瘤微环境中免疫细胞对EGFR-TKIs靶向治疗疗效相互影响的可能机制,以期寻求新的靶点,进一步提高EGFR-TKIs的抗肿瘤疗效和延长有效时间。