90例HBV基因型与拉米夫定疗效的研究

目的 :探讨乙肝病毒 (HBV)基因型与拉米夫定疗效的关系。方法 :选用 90例慢性乙肝病人 ,采用口服拉米夫定 10 0mg/d治疗 2 4个月。根据HBV前C区保守序列作为通用包被探针 ,HBV不同基因型的序列作为基因分型显色探针 ;另外拉米夫定YMDD及耐药突变的两种形式 (YIDD/YVDD)分别作为显色探针。采用PCR微板双探针杂交ELISA技术进行HBVDNA定量、HBV基因分型、YMDD及突变耐药株 (YIDD/YVDD)的检测。结果 :90例乙肝病人C基因型占 4 3% ,B基因型 30 % ,D基因型 16 % ,混合基因型为 10 %。其中有 1例出现YIDD耐药株(称为先天性耐药 )。口服拉米夫定 12个月后 ,5 14 6 /90 )的病人HBVDNA转阴 (<0 .1pg/ml血清 ) ;YMDD耐药株发生率为 16 % (14 /90 ) ,其中C基因型 6例 ,D基因型 6例 ,混合基因型 2例 ,先天性耐药株对拉米夫定无反应。口服拉米夫定 2 4个月后 ,HBVDNA转阴率为 5 2 % (47/90 ) ,YMDD耐药株的发生率为 2 7% (2 4 /90 ) ,其中D基因型 10例 ,C基因型 9例 ,B基因型 1例 ,混合基因型 4例。结论 :本研究中乙肝病人HBV基因型主要为C型 ,其次为B型及D型。口服拉米夫定后大多数病人可以明显降低DNA水平 ;其YMDD突变耐药株的发生与HBV基因型有关 ,以D型及C型YMDD突变耐药株发生率较高。PCR微板双探针杂交技术不但?

鸡呼吸道病毒性疾病的发生及防治

近年来鸡的饲养量、存栏量显著增加,而鸡的饲养技术水平普遍偏差。小型种鸡场数量猛增,制定的商品代鸡苗防疫程序普遍存在混乱和不够科学的现象;外界环境因素如气候异常、干燥、多风、天气多变，空气污染严重，氨味和臭味比较重等；发展水平不一致，许多地区的鸡群饲养环境受到病原微生物的污染；一些养禽业盲目的引种，忽视养禽生产的防疫工作，流通域的疫病管理疏漏。

微板核酸杂交技术对江西地区HCV基因分型的观察

目的 采用微板核酸杂交 ELISA技术对HCVRNA进行基因分型。方法 采用PCR、核酸杂交和酶联显色技术 ,首先将HCVRNA进行RT PCR扩增 ,并将扩增产物加入预先包被对HCV通用探针的微孔板 ,再加入HCV各基因型显色探针 ,同时进行微板核酸杂交 ELISA显色 ,对江西地区 12 9例临床诊断为丙肝RNA阳性患者血清中的HCVRNA进行基因分型研究。结果 江西地区HCV基因型可分为 1b、2a、2b、3a、3b、6a、1a/2a、1b/2a、1b/3a、1b/6a、3a/5a、2a/3a共 12种单一基因型和混合基因型 ,其中以 1b基因型为主 ,占 5 0 .39%;慢性丙肝患者的基因型较为复杂 ,存在较高比例的混合基因型。结论 江西地区HCV感染者以 1b基因型为主。PCR微板核酸杂交 ELISA方法可以准确、快速、简便进行HCV基因分型 ,在探讨HCV的流行病学及观察药物对各基因型的疗效方面具有重大的意义。

慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗前后CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞的变化

目的研究慢性乙型肝炎(以下简称乙肝)患者干扰素抗病毒治疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)频率的变化情况。方法慢性乙肝患者30例(干扰素组),经干扰素α1b(50μg)治疗6个月;肝炎病毒标志物阴性,肝功能正常的健康志愿者10例(正常对照组);尸检正常肝组织10例(尸检组)。采集干扰素组和正常对照组6个月前后的抗凝外周血,收集干扰素组抗病毒前和尸检组的肝组织。流式细胞术检测外周血Treg的频率(Treg/淋巴细胞的百分比);免疫组化检测肝组织中Foxp3的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血Foxp3 mRNA的表达;并分析其与血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、HBV DNA的相关性。结果干扰素组治疗前Treg的频率为(1.18±0.45)%,明显高于正常对照组的(0.55±0.13)%(P<0.01),Treg的频率与ALT、AST的变化均呈正相关(r=0.69、0.72,均P<0.01),而与HBV DNA无明显的相关性(r=-0.06,P>0.05);干扰素组治疗6个月后Treg的频率为(0.74±0.19)%,明显低于治疗前。免疫组化和RT-PCR可以对该结果鉴定和印证。结论慢性乙肝患者外周血中Treg的频率升高,干扰素α1b治疗能改善患者的免疫功能,降低Treg的频率。

化学发光法检测血清肝纤维化指标评价

血清肝纤维化指标（透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原等），广泛应用于肝纤维化的临床诊断、病情监测及疗效判断；肝纤维化指标检测多采用放射免疫法．其标记物有放射污染且报告时间长。化学发光法．性能稳定、灵敏、操作简便、报告时间短。显示出较好的应用前景．我们对其应用于肝纤维化指标检测进行了方法学评价．现报告如下。

Ang-2和Tie-2在肝癌中表达及血管生成关系的研究

目的流式细胞术检测血管生成素2(Ang-2)及酪氨酸激酶受体2(Tie-2)在肝癌中的表达,探讨其与CD105标记的血管表达量的关系,以期为研究肝癌发生、发展及血管生成提供理论支持。方法以112例肝细胞癌标本为研究对象,60例癌旁组织、60例正常肝组织作为对照,应用流式细胞术分别检测Ang-2、Tie-2和CD105的表达,分析其在不同临床病理特征之间的意义及相互关系。结果 Ang-2、Tie-2和CD105在肝癌中的表达均明显高于癌旁组织和正常肝组织,Ang-2、Tie-2和CD105在不同肿瘤直径、不同临床分期、不同甲胎蛋白(AFP)值及有无转移患者中比较,差异有统计学意义,肝癌中Ang-2、Tie-2和CD105的表达呈正相关。结论 Ang-2和Tie-2与肝癌的发生、发展有密切关系,Ang-2和Tie-2参与CD105表达的血管生成,联合检测Ang-2、Tie-2和CD105可能有助于肝癌患者预后判断。

庚型肝炎病毒NS3蛋白在杆状病毒载体中的表达及其抗原性研究

目的 :利用 Bac- to- Bac HT杆状病毒系统在 Sf9昆虫细胞中表达庚型肝炎病毒 (HGV) NS3蛋白 ,并对表达产物的免疫原性进行研究。 方法 :将 HGV NS3基因片段定向克隆至转座载体 p Fast Bac HTa,转化 DH10 Bac感受态细胞 ,37℃振荡培养 4h使发生转座 ,用抗生素平皿筛选重组 bacmid。脂质体介导转染 Sf9昆虫细胞 ,待细胞形态明显改变后收获细胞和培养上清液 ,将上清液再次感染 Sf9细胞以大量表达 HGV NS3重组蛋白。利用 SDS- PAGE和 Western- blotting方法分析重组蛋白。结果 :SDS- PAGE分析发现表达产物在 Mr43810处有一条明显的蛋白带 ,占细胞总蛋白量的 30 %以上 ;应用 Ni- NTA亲和层析柱获得了纯化的重组蛋白 ;Western- blotting显示该抗原可与 HGV RNA阳性血清发生特异反应。 结论 :获得了昆虫细胞内表达的 HGV NS3重组蛋白 ,并证明该蛋白有可能用于 HGV感染的抗体检测。

临床艾滋病患者合并病原微生物感染的分析

自1981年首次确认艾滋病以来．全球累计有6500万人感染艾滋病．其中2500万人死亡。我国累计报告艾滋病病毒感染者和病人43．4万人．其中死亡8．8万人。艾滋病人由于免疫功能严重缺损．常合并严重的机会感染．由合并感染引起的死亡是HIV患者死亡的主要因素之一．不容忽视。由于艾滋、乙肝、丙肝、梅毒等病毒感染途径大致相同圈．尤其是艾滋、乙肝、丙肝在我国三者的合并感染率很高。

阿德福韦酯联用拉米夫定对慢性乙肝的病毒复制和T细胞亚群的影响

目的探讨阿德福韦酯联合拉米夫定治疗YMDD变异CHB(慢性乙型肝炎)的效果,并关注其对外周血T细胞亚群的影响,以期为临床工作提供理论支持。方法收集来我院治疗的134例YMDD变异的CHB患者,按患者的入院顺序分为观察组与对照组,观察组(67例)应用阿德福韦酯和拉米夫定联合治疗,对照组(67例)单用阿德福韦酯治疗,应用流式细胞术检测T细胞亚群的指标变化,并检测HBV-DNA。结果观察组治疗6、9、12个月HBV-DNA转阴率明显高于对照组,观察组治疗6个月后外周血CD4+T细胞百分比、CD4+/CD8+比值较治疗前明显升高,而CD8+T细胞百分比较治疗前明显下降,对照组变化不明显。结论阿德福韦酯联合拉米夫定治疗YMDD变异慢性乙型肝炎,HBV-DNA转阴率较高,并能有效调节机体的免疫功能,临床治疗中可积极应用。

基因芯片法检测乙肝病毒多位点变异的临床应用

目的应用基因芯片技术检测临床乙肝患者血清中的乙型肝炎病毒(HBV)相关的耐药位点,评测该方法在监测HBV耐药中的作用。方法在258例使用不同核苷类药物的乙肝患者血清中,采用寡核苷酸探针芯片检测其携带的HBV相关耐药基因变异情况,并结合DNA序列分析进行比较。结果在160例使用拉米呋啶组血清中检测到拉米呋啶耐药30%(48/160),替比呋啶耐药8.75%(14/160),恩替卡韦耐药0.6%(1/160),98例使用阿德福韦组检测到阿德福韦耐药12.2%(12/98)。它和基因测序法比较,符合率100%。结论基因芯片法可同时检测针对拉米呋啶、阿德福韦、恩替卡韦、替比呋啶的多重耐药基因位点,是一种可靠的检测方法,可为临床确立HBV患者治疗方案提供重要参考。

异甘草酸镁联合丹参对慢性乙型肝炎患者临床检验指标的影响

目的探讨异甘草酸镁注射液联合丹参对慢性乙型肝炎患者肝功能和肝纤维化的影响。方法随机选取120例慢性乙型肝炎患者,治疗组60例给予异甘草酸镁针剂加丹参治疗;对照组60例,仅给予还原性谷胱甘肽注射液,2组疗程均为30d,观察治疗前后其肝功能及肝纤维化的改变。结果治疗组治疗后各项临床检验指标差异有统计学意义(P<0.01);治疗组对肝功能及肝纤维化指标的影响明显优于对照组(P均<0.05)。结论异甘草酸镁注射液联合丹参治疗慢性乙型肝炎疗效好,可明显改善其肝功能和肝纤维化指标。

基于变论域模糊控制的大豆种植灌溉控制算法

在大豆种植过程中,人工控制方式仍占据主导地位,全自动化普及程度较低,现有的自动化灌溉多以将采集的土壤墒情与给定阈值进行对比灌溉的方式为主。传统模糊控制技术虽然可以解决由大田环境非线性、大惯性延时所带来的难以建立精准灌溉模型的难题,但因其结构参数相对固定不适用于高精度灌溉。针对上述问题,结合大豆各生长时期的需水特性和降雨量,基于变论域模糊控制理论提出了一种符合大豆各生长时期需水规律的智能灌溉控制算法。仿真实验表明,相比PID控制方案,在超调量与响应时间方面,方法有55.17%以及62.57%的提升,相比传统模糊控制方案,在超调量与响应时间方面,方法有30.36%以及46.44%的提升,很大程度上提高了灌溉的精度;与人工控制灌溉方式相比可以节约20%的水资源,为大豆的自动化节水灌溉提供了一条新的途径。

浅析注册会计师职业道德

注册会计师职业道德规范内容 （1）社会利益高于一切。注册会计师不仅要向客户，更要向社会公众承担审计责任，要把维护市场经济秩序、维护社会公众利益摆在第一位；不能因为担心失去某项业务或因受到外界压力而损害社会公众利益；要有揭短的勇气，在不违背原则的前提下要把自己过去的过错或失误和盘托出，以维护社会公众的利益。

HCV 1a/1b型嵌合体能在HepG2细胞内复制与表达

采用HCV 1a/1b嵌合体cDNA构建表达质粒转染HepG2细胞,以免疫组化和Western blotting检测HCV蛋白表达,RT-PCR检测HCV正、负链RNA,研究丙型肝炎病毒(HCV)1a和1b型嵌合体全长cDNA在HepG2细胞中的复制和表达。结果证明,转染细胞中检测到分子量约70kDa的HCVNS3蛋白,转染细胞连续传20代,仍能检测到HCV正、负链RNA。表明该HCV嵌合体可以在细胞中复制和表达,HCV 1b型的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)可以起始含1a型非编码区的病毒复制。HCV 5′端非翻译区第11、12、13、34和35位核苷酸改变可不影响其与核糖体结合。3′非翻译区9400,9403和9407位核苷酸改变,9435位缺失“A”,9409,9410位及9495,9496,9497位分别插入“TT”和“AAT”可不影响RORp的生物活性。本研究对阐明HCV复制和翻译机制有重要意义。

基于模糊控制理论的温室葡萄种植灌溉算法

结合温室环境下葡萄的需水特点提出上限灌溉和下限灌溉2种灌溉方式,同时结合葡萄生长周期及环境因素,给出一种运用模糊控制理论动态调节灌溉量并预测下次灌溉时间的智能控制算法,在不影响产量的基础上保证水资源的最大利用率。结果表明,该方法最大超调量为20%,响应时间为22 s,具有较高的稳定性与响应速度,与人工控制方式相比,在产量基本不变的条件下可达到节约17%水资源的效果,为葡萄自动化灌溉开辟了一条新途径。

中草药饲料添加剂的应用现状

中草药在我国的历史悠久，不仅作为药物应用在中兽医中，还作为饲料添加剂在我国畜牧行业中有着广泛的应用。本文结合国内外的研究文献，介绍了中草药饲料添加剂的特点及在各种养殖业中的应用现状。

抗-HBs抗体阳性血清中和确认HBsAg方法的建立

1 材料与方法 1．1 仪器、试剂及材料 1．1．1 WELLSCAN K3酶标仪、BHP9504化学发光仪、anthos fluido洗板机，分别是芬兰雷勃公司、北京滨松光子技术股份有限公司和郑州安图生物工程公司产品。

脂蛋白(a)、腺苷脱氨酶在肝硬化诊断中的意义和临床评价

目的探讨脂蛋白(a)[Lp(a)]、腺苷脱氨酶(ADA)与肝硬化的关系,为临床诊断治疗和预后提供参考。方法选取我院2007年以来门诊和住院肝硬化患者258例和50例健康体检者,应用OLYMPUSAU640全自动生化仪检测Lp(a)和ADA的含量,并对其结果进行回顾性分析。结果肝硬化患者血清Lp(a)含量显著低于对照组P<0.01,而ADA含量显著高于对照组P<0.01。结论Lp(a)和ADA测定可分别从肝脏的脂代谢和核酸代谢两方面辅助诊断肝硬化,同时,上述两项指标具有快速、可靠、敏感的特点,可作为肝硬化患者病情监测的有效指标。联合检测Lp(a)和ADA的含量有助于肝硬化的诊断、疗效观察和预后判断。