柚皮素下调RhoA/ROCK信号通路改善糖尿病小鼠心肌纤维化机制探讨

目的探讨柚皮素对糖尿病小鼠心肌纤维化的影响及其机制。方法将32只C57BL/6小鼠随机分为正常组(NS组)、糖尿病组(DM组)、柚皮素低剂量组(D+LN组)、柚皮素高剂量组(D+HN组)。采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)连续腹腔注射建立1型糖尿病小鼠模型。给药8周后,处死前记录末次小鼠体质量及血糖,观察柚皮素对小鼠体质量及血糖的影响;HE及Masson染色观察心脏形态改变,并测量心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);免疫组化法观察心脏组织RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白的水平;Western Blot测定心脏组织RhoA、ROCK1、ROCK2、IV型胶原蛋白、纤连蛋白(Fibronectin,FN)的水平。结果与NS组比较,DM组小鼠成模后体质量下降,血糖升高(P<0.05);与DM组比较,各柚皮素处理组血糖、体质量差异无统计学意义(P>0.05)。与NS组比较,DM组CVF增大,RhoA、ROCK1、ROCK2、IV型胶原蛋白、FN的水平升高(P<0.05);与DM组比较,各柚皮素处理组CVF减小,RhoA、ROCK1、ROCK2、IV型胶原蛋白、FN的水平下降(P<0.05)。结论柚皮素具有改善糖尿病小鼠心肌纤维化作用,其机制之一可能是下调了RhoA/ROCK信号通路。

法舒地尔调控巨噬细胞极化改善糖尿病小鼠心肌纤维化

目的:探讨盐酸法舒地尔(HF)对糖尿病(D)小鼠心肌纤维化及巨噬细胞极化的影响。方法:将60只C57BL/6小鼠随机分为正常组(NS组)、正常+法舒地尔组(N+HF组)、糖尿病组(D+NS组)、低剂量法舒地尔组(D+LHF组)、中剂量法舒地尔组(D+MHF组)及高剂量法舒地尔组(D+HHF组)。采用链脲佐菌素(STZ)连续腹腔注射建立1型糖尿病小鼠模型。干预8周后处死小鼠,观察法舒地尔对小鼠体重及血糖的影响;HE及Masson染色观察心脏组织形态改变,测量心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);免疫组化观察心脏组织中巨噬细胞极化及白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-10的蛋白水平;Western blot测定心脏组织中p-MYPT1 Thr853、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg-1)的蛋白水平。结果:与NS组相比,D+NS组小鼠成模后体重下降,血糖升高(P<0.05);与D+NS组相比,各治疗组血糖和体重差异无统计学显著性。与NS组相比,D+NS组CVF增大,M1型巨噬细胞数量增加,M2型巨噬细胞数量减少,IL-6、TNF-α、p-MYPT1 Thr853和iNOS的蛋白水平升高,IL-10和Arg-1的蛋白水平降低(P<0.05);与D+NS组相比,各治疗组CVF下降,M1型巨噬细胞数量减少,M2型巨噬细胞数量增加,IL-6和TNF-α的蛋白水平降低,IL-10的蛋白水平升高;与D+NS组相比,D+MHF和D+HHF组的p-MYPT1 Thr853和iNOS的蛋白水平下降,Arg-1的蛋白水平升高(P<0.05)。与NS组相比,N+HF组各检测指标差异无统计学显著性。结论:法舒地尔能改善糖尿病心肌病小鼠心肌纤维化,其可能的机制与诱导M2型巨噬细胞极化,减少M1型巨噬细胞极化和炎症反应有关。

柚皮素通过下调RhoA/ROCK信号通路改善糖尿病肾病小鼠肾纤维化

为探讨柚皮素对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾纤维化的影响及其机制。将32只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、柚皮素组、法舒地尔组。DN模型复制成功后分别予柚皮素及法舒地尔处理,正常组、模型组予生理盐水对照,连续12周,处死小鼠,观察血肌酐(serum creatinine,Scr)、24 h尿蛋白定量(24-hour urinary protein quantity,24 h Upro)、血糖、体重的变化;HE及Masson染色观察肾脏形态学改变;免疫组化观察肾脏RhoA、ROCK1、ROCK2、I型胶原蛋白(type-I collagen,Col1)、III型胶原蛋白(type-III collagen,Col3)的水平;Western blot测定肾脏RhoA、ROCK1、ROCK2、p-MYPT1、层粘连蛋白(laminin,LN)、纤连蛋白(fibronectin,FN)的水平。结果显示肾脏形态学观察可见正常组间质少许胶原纤维,模型组间质大量胶原纤维,处理组间质少量胶原纤维。与正常组相比,模型组24 h Upro、Scr升高(P<0.05);与模型组相比,处理组24 h Upro、Scr降低(P<0.05),血糖、体重差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组相比,模型组RhoA、ROCK1、ROCK2、Col1、Col3、p-MYPT1 Thr853、LN、FN的水平升高(P<0.05);与模型组比较,处理组RhoA、ROCK1、ROCK2、Col1、Col3、p-MYPT1 Thr853、LN、FN的水平降低(P<0.05)。与柚皮素组相比,法舒地尔组各指标差异无统计学显著性(P>0.05)。柚皮素具有改善DN小鼠肾纤维化的作用,其机制可能与下调RhoA/ROCK信号通路有关。

柚皮素通过调控AMPK/Nrf2/HO-1信号通路减轻糖尿病小鼠心肌损伤

目的:探讨柚皮素(naringenin,NAR)对糖尿病小鼠心肌的保护作用及对腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)信号通路的影响。方法:将50只C57BL/6小鼠随机分为正常组(N组)和模型组。模型组采用连续腹腔注射链脲佐菌素的方法建立1型糖尿病小鼠模型,成模后将其分为糖尿病组(D组)、低剂量NAR干预组(D+L-NAR组)、中等剂量NAR干预组(D+M-NAR组)和高剂量NAR干预组(D+H-NAR组),对干预组小鼠分别给予低、中、高剂量NAR灌胃,N组和D组给予与D+M-NAR组等体积的生理盐水灌胃。6周后处死小鼠,观察NAR对小鼠体重及血糖的影响;HE和Masson染色观察心脏形态学改变,测量心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);免疫组化观察心脏组织中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和IL-10的蛋白水平;TUNEL染色检测心肌组织凋亡情况;荧光探针DHE测定心肌细胞中活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)的生成;超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)及丙二醛(malondialdehyde, MDA)试剂盒测定心肌细胞中SOD活性及MDA的含量;Western blot测定心脏组织p-AMPKα、AMPKα、Nrf2、HO-1、NAD(P)H:醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1, NQO1]和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:与N组相比,D组成模后血糖明显升高,体重明显下降;与D组相比较,NAR干预组的血糖有所下降,体重有所增高。与N组相比,D组CVF明显增大,凋亡率明显增加,IL-6和cleaved caspase-3蛋白水平升高,IL-10、p-AMPKα、Nrf2、HO-1和NQO1蛋白水平降低,ROS生成率和MDA含量升高,SOD活性降低(P<0.05);与D组相比较,NAR干预组CVF明显降低,IL-6和cleaved caspase-3蛋白水平降低,IL-10、p-AMPKα、Nrf2、HO-1和NQO1蛋白水平升高(P<0.05);与D组比较,D+L-NAR组ROS成率、MDA含量及SOD活性的差异无统计学显著性,D+M-NAR组及D+H-NAR组的ROS生成率降低、MDA含量降低,SOD活性升高。结论:NAR能减轻糖尿病小鼠心肌损伤,其机制可能与激活AMPK/Nrf2/HO-1信号通路,增强抗氧化反应,减轻心肌纤维化、凋亡及炎症反应有关。

柚皮素通过抑制NLRP3炎症小体激活改善糖尿病小鼠心肌重构

目的:研究柚皮素(naringenin,NAR)对糖尿病小鼠心肌重构的作用及对NLRP3炎症小体的影响。方法:将雄性C57BL/6小鼠35只随机分为正常(N)组(7只)和糖尿病模型组(28只),糖尿病模型组连续腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)3 d,正常组腹腔注射相应溶剂,1周后断尾取血测随机血糖,以随机血糖大于16.7 mmol/L作为1型糖尿病小鼠成模标准。最终28只模型组小鼠均造模成功,并随机分为糖尿病(DM)组、柚皮素低剂量(DM+LN)组、柚皮素中剂量(DM+MN)组、柚皮素高剂量(DM+HN)组,每组7只。各组连续灌胃给药8周后处死小鼠,观察柚皮素对小鼠体质量及血糖的影响;HE及Masson染色观察心脏形态改变,并测量心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);TUNEL荧光染色观察心肌细胞凋亡;Western blot测定心肌组织NLRP3、ASC、Caspase-1、白介素(interleukin,IL)-1β、Ⅰ型胶原蛋白、纤连蛋白(fibronectin,FN)水平;PCR检测NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1βmRNA表达。结果:Masson染色结果分析显示,DM组[(37.68±1.14)%]的CVF较DM+LN组[(13.58±0.86)%]、DM+MN组[(9.50±0.59)%]、DM+HN组[(6.38±1.41)%]明显增加(P=0.000);TUNEL荧光染色结果分析显示,DM组[(64.94±5.25)%]心肌细胞凋亡较DM+LN组[(48.80±6.11)%]、DM+MN组[(31.85±4.44)%]、DM+HN组[(13.64±1.79)%]明显增加(P=0.000);Western blot结果显示,DM组(0.52±0.03)心肌NLRP3蛋白表达量较DM+LN组(0.33±0.07)、DM+MN组(0.23±0.06)、DM+HN组(0.15±0.04)增加(P=0.000);同时DM组(0.69±0.09)心肌IL-1β蛋白表达也较DM+LN组(0.42±0.09)、DM+MN组(0.25±0.04)、DM+HN组(0.09±0.03)增加(P=0.000)。结论:NAR可以改善糖尿病小鼠心肌纤维化、减少心肌细胞凋亡,从而抑制心肌重构,其机制之一可能是抑制了NLRP3炎症小体激活,降低了炎症水平。

沙库巴曲/缬沙坦对心肌肥厚兔半乳糖凝集素-3以及基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:研究沙库巴曲/缬沙坦对压力负荷诱导的心肌肥厚新西兰兔半乳糖凝集素-3(Gal-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法:24只健康雄性8周龄新西兰兔随机分为假手术组(Sham)、模型组(Model)、沙库巴曲/缬沙坦组(Sacu/Vals),每组8只,后两组行腹主动脉缩窄术构建心肌肥厚模型,8周建模成功后沙库巴曲/缬沙坦组予以药物灌胃,其余两组予以等体积生理盐水。16周末取所有兔心,测左心室质量指数和全心质量指数以及取左心室心肌组织行HE染色评估心肌肥厚水平,western blot检测心肌组织Gal-3、MMP-9的表达。结果:⑴与假手术组相比,模型组、沙库巴曲/缬沙坦组HMI、LVMI增加(P<0.05);与模型组相比,沙库巴曲/缬沙坦组HMI、LVMI降低(P<0.05)。⑵假手术组心肌纤维排列整齐,呈束状排列,形态完整,未见明显纤维组织。模型组心肌纤维排列紊乱,大部分断裂,细胞水肿,心肌间质可见纤维结缔组织。沙库巴曲/缬沙坦组与模型组相比,心肌纤维排列基本整齐,细胞水肿明显减轻。⑶与假手术相比,模型组、沙库巴曲/缬沙坦组Gal-3、MMP-9蛋白表达量增加(P<0.05);与模型组相比,沙库巴曲/缬沙坦组Gal-3、MMP-9蛋白表达量降低(P<0.05)。结论:沙库巴曲/缬沙坦能减轻兔心肌肥厚,其机制可能跟下调Gal-3、 MMP-9蛋白表达相关。

ω-3多不饱和脂肪酸对心肌肥厚大鼠心肌细胞外基质重塑的影响

目的:探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 polyunsaturated fatty acids,n-3PUFAs)对腹主动脉缩窄(abdominal aorta coarctation,AAC)术后心肌肥厚大鼠心肌细胞外基质重塑的影响。方法:雄性SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型组。模型组大鼠行AAC术。术后1周,再随机将模型组分成AAC组、AAC+n-3PUFAs低剂量组、AAC+n-3PUFAs高剂量组,每组8只,后两组分别予以400 mg/(kg·d)及1 000 mg/(kg·d)的n-3PUFAs灌胃,假手术组和AAC组给予等体积生理盐水灌胃。8周后处死大鼠,留取心肌组织测定左心室质量指数(LVW/BW)和心脏质量指数(HW/BW),取心肌组织行HE染色及Masson染色,取血清用碱水解法测定羟脯氨酸含量,用免疫蛋白印迹(Western blot)法分析心肌组织基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)及纤连蛋白(fibronectin,FN)的表达。结果:与假手术组相比,模型组LVW/BW、HW/BW、羟脯氨酸含量明显升高(P <0.05),病理染色示心肌细胞肥大,胶原纤维增加,MMP-9表达增加,TIMP-1含量减少,FN表达增加,差异有统计学意义(P <0.05)。与AAC组相比,AAC+n-3PUFAs低剂量组、AAC+n-3PUFAs高剂量组LVW/BW、HW/BW、羟脯氨酸含量降低,病理染色示心肌细胞肥大减轻、胶原含量减少,MMP-9、FN表达减少,TIMP-1表达增加(P <0.05)。且AAC+n-3PUFAs高剂量组较AAC+n-3PUFAs低剂量组各项指标变化更为明显,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论:n-3PUFAs对心肌肥厚有保护作用,其机制可能与抑制MMP-9、FN的过度表达,上调TIMP-1的表达,影响心肌细胞外基质重塑相关。

柚皮素通过RhoA/ROCK信号通路调控高糖诱导的RAW264.7巨噬细胞极化

目的探讨柚皮素对高糖刺激的RAW264.7巨噬细胞极化的影响及其相关机制。方法用二甲基亚砜(dimethyl sulphoxide, DMSO)配制柚皮素(naringenin, NAR)母液,取对数生长期RAW264.7细胞预实验,不同葡萄糖质量浓度(1、2、4、5、6 g/L)DMEM培养基中培养24 h,实验前用DMEM稀释成不同终浓度的NAR混合液, CCK-8法检测NAR对RAW264.7细胞活力的影响,一氧化氮合酶(NOS)分型测试盒测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性,筛选获得对照和高糖刺激的糖浓度。对照组分为正常对照(NG)和渗透压对照(NG+M),高糖组分为正常高糖(HG)、高糖+NAR(HG+NAR)、高糖+法舒地尔(HG+F)、高糖+C3转移酶(HG+C3)。各组RAW264.7培养24 h,ELISA检测上清白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10水平;Western blotting测定RhoA/ROCK通路相关蛋白、iNOS、精蛋白-1(Arg-1)蛋白表达;流式细胞术分选巨噬细胞分型(M1、M2)及比例(M1/M2)。结果与NG组比较,HG组RhoA/ROCK通路相关蛋白、iNOS表达增加,Arg-1表达减少,IL-6、TNF-α分泌增加,IL-10减少,M1型巨噬细胞增多,M1/M2升高(P<0.05);与HG组比较,HG+NAR组、HG+F组、HG+C3组RhoA/ROCK通路相关蛋白、iNOS表达减少,Arg-1表达增加,IL-6、TNF-α分泌减少,IL-10增加,M2型巨噬细胞增多,M1/M2降低(P<0.05)。结论 NAR可能通过下调RhoA/ROCK信号通路,促进高糖刺激的巨噬细胞向M2型分化。

姜黄素通过NF-κB/miR33a通路对ox-LDL刺激THP-1巨噬细胞分泌的影响及机制

为研究姜黄素对ox-LDL刺激的THP-1巨噬细胞炎症因子IL-6、TNF-α的分泌及相关机制。本实验分别予姜黄素、miR33a inhibitor、吡咯烷二硫代甲酸铵(ammonium pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)处理氧化型低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL)刺激的人单核细胞白血病细胞(human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)型巨噬细胞,RT-qPCR测定微型RNA33a(MicroRNA33a,miR33a)的表达,Western blot检测胞核内NF-κB p65的表达、IκBα和p-IκBα的表达,ELISA测定IL-6、TNF-α的浓度。结果显示与空白对照组相比,ox-LDL组miR33a、NF-κB p65、p-IκBα的表达及p-IκBα/IκBα的比值及IL-6、TNF-α的浓度增加(P<0.05),IκBα的表达减少(P<0.05);而与ox-LDL组相比,ox-LDL+姜黄素组miR33a、NF-κB p65、p-IκBα的表达及p-IκBα/IκBα的比值及IL-6、TNF-α的浓度减少(P<0.05),IκBα的表达增加(P<0.05)。姜黄素可能抑制ox-LDL刺激的THP-1巨噬细胞IL-6、TNF-α的分泌,其机制可能是通过下调NF-κB/miR33a信号通路。

初中数学教学中学生创造性思维的培养

新课改实行以后,教学的方式和教学的内容都发生了改变,为了国家的发展,在培养人才的同时,要注意培养孩子的创造性思 维,这有利于我国实行可持续发展战略,从而提升我国在国际上的地位。数学作为一门实践与理论相结合的学科,在学习的过程中能够开 阔学生的思维能力,尤其是在初中数学教学中,学生通过学习数学知识,有利于养成创造性思维,所以,在初中阶段,教师一定要注意对 学生创造性思维的培养。本篇文章主要分析了创造性思维能力对于初中数学教学的重要性并提出了培养初中数学教学中学生创造性思维能 力的有效措施。

RhoA/ROCK信号通路在糖尿病心肌病发病机制中的研究进展

糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)是糖尿病常见并发症之一,其发病机制仍未完全阐明。RhoA/ROCK信号通路介导胰岛素抵抗、氧化应激、炎症、细胞凋亡、心肌纤维化、心脏舒缩功能等途径参与DCM发病,且ROCK抑制剂——法舒地尔在DCM中显示了一定治疗作用。本文就RhoA/ROCK信号通路在DCM发病机制中的研究进展作一综述。