BMP2具有诱导C3H10T1/2细胞成脂肪分化的能力

探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)诱导鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2成脂肪分化能力,为临床脂肪代谢疾病的治疗提供理论基础.培养多潜能的间充质干细胞C3H10T1/2,用20μg/mlBMP2对其诱导一定时间后,RT-PCR检测是否存在BMP信号通路中关键分子BMP受体BMPRI,BMPRⅡ及Smad1/5/8的表达.Western印迹检测Smad蛋白及MAPK信号通路中p38磷酸化水平变化,QRT-PCR检测成脂肪标志基因aP2以及成脂肪相关转录因子PPARγ,C/EBPα,C/EBPβ表达水平,同时用油红O染色,观测C3H10T1/2细胞成脂肪分化情况.经BMP2诱导后,C3H10T1/2细胞成脂肪分化标志(油红O染色)显著增加,Smad蛋白及p38磷酸化水平有所上升,同时成脂肪标志基因aP2以及成脂肪相关转录因子PPARγ,C/EBPα,C/EBPβ表达水平各有一定程度提高.BMP2具有诱导C3H10T1/2细胞成脂肪分化能力,其成脂肪分化呈现对BMP2作用的时间依赖性.

BMP2诱导C3H10T1/2细胞成软骨分化的分子机制研究

目的:探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)诱导鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2向成软骨分化的可能分子机制。方法:20μg/mL BMP2诱导C3H10T1/2细胞0,4 h,1,3,6,10,13,15 d后,RT-PCR检测BMP信号通路中关键分子BMPRⅠ,BMPRⅡ,Smad1/5/8的表达,Western blot检测smad蛋白及MAPK信号通路中p38磷酸化水平变化,QRT-PCR检测成软骨标志基因aggrecan,Col2a1以及成软骨相关转录因子FGFR3,Sox9表达水平,同时用Alcine Blue染色,观测C3H10T1/2细胞成软骨分化情况。结果:经BMP2诱导后,C3H10T1/2细胞表现出成软骨分化,smad蛋白及p38磷酸化水平有所上升,同时成软骨标志基因Col2a1以及成软骨相关转录因子FGFR3,Sox9表达水平都有增加。与未诱导组相比,Col2a1,FGFR3,Sox9在3 d的表达与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),FGFR3,Sox9在6 d的表达与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在一定培养条件下,BMP2具有诱导C3H10T1/2细胞成软骨分化能力。

骨形态发生蛋白2通过Smad途径上调Osterix的表达

Osterix(Osx)是一种重要的调控成骨细胞分化的具有锌指结构的转录因子.骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP 2)能够上调Osx的表达,但其分子机制并不清楚.采用实时定量RT-PCR方法检测到BMP2诱导成骨相关细胞C3H10T1/2,MC3T3-E1,C2C12中Osx的转录水平显著上调,并且与成骨分化指标Col1a1,osteocalcin具有相似的表达动力学特征.而且,在C3H10T1/2细胞中过表达负显性(dominant negative,DN)Osx基因,能够有效抑制BMP2诱导的成骨分化.过表达BMP/Smad信号通路抑制蛋白Smad6,能够抑制Osx转录水平的上调.但是通过荧光素酶报告载体对Osx的启动子-1254^+85区域进行分析后未发现接受BMP通路调控的启动子区域.上述结果表明,BMP2能够通过Smad途径上调Osx的表达,并对成骨分化的过程具有十分重要的作用.

HBV-DNA定量检测试剂盒性能验证

目的验证和评价一种新采购的HBV-DNA定量检测试剂盒的分析性能。方法依据美国临床和实验室标准化协会颁布的EP系列文件和《医学实验室质量和能力认可准则》相关文件对试剂盒的精密度、正确度、线性范围、检测下限和不同检测试剂的一致性进行性能评价。结果试剂盒的低值和中值的批内精密度CV为3.2%、3.4%,总精密度CV为4.6%、3.7%;正确度符合要求;线性回归方程为Y=0.958 X＋0.355,r2=0.999,P〈0.001,线性范围为（1.48×103～1.48×108）U/mL;检测下限为500 U/mL;与原有检测试剂之间结果无差异。结论新试剂盒的性能符合厂家声明,能够应用于临床工作。

伤口分泌物的病原菌分布及常见菌耐药性分析

目的观察伤口分泌物病原菌的分布、变化趋势及耐药情况,为临床合理用药提供理论依据。方法 11210份伤口分泌物标本用血培养基、麦康凯培养基和沙氏培养基培养,阳性标本进行分离培养,采用Mi-croScanWalkAway40全自动微生物鉴定仪进行鉴定及药敏试验,同时用微量肉汤稀释法对主要病原菌的药敏结果进行分析。结果 11210份标本中共分离出致病菌324株,其中革兰阴性杆菌占57.1%(185/324),革兰阳性球菌占35.5%(115/324),真菌占7.4%(24/324)。检出最多的3种病原菌分别为大肠埃希菌占14.5%(47/324)、金黄色葡萄球菌占14.2%(46/324)、肺炎克雷伯菌占7.7%(25/324)。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)发生率分别为60.0%和36.0%。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对抗生素的耐药率均以亚胺硫霉素最低(0%),金黄色葡萄球菌的耐药率以万古霉素最低(0%)。结论革兰阴性杆菌为化脓性感染的主要病原菌,但葡萄球菌也在逐年增加,多数病原菌为多重耐药菌株,提示化脓性感染治疗时应及时确定病原菌并进行药敏试验,合理使用抗生素有效控制感染。

几种丙肝抗体检测的临床应用评价

目的探讨两种不同孵育时间的酶联免疫吸附试验（ELISA）与化学发光微粒子免疫分析（CMIA）三种方法检测血清中丙肝抗体（抗～HCV）的临床运用。方法分别用两种ELISA和CMIA测定门诊和住院患者抗-HCV样本1281例。不一致的用PCR法进行丙型肝炎病毒核酸（HCV-RNA）定量检测。结果1281例样本ELISAA18例阳性，阳性率为1．41％；ELISAB20例阳性，阳性率为1．56％；CMIA31例阳性，阳性率为2．42％。两种ELISA分别与CMIA阳性率比较矿分别为8．47，6．67；P值分别为0．0036，0．0098（P〈0．05），差异均有统计学意义；两种ELISA法阳性率比较x2为0．50，P=0．4795（P〉0．05），差异无统计学意义。两种ELISA与CMIA结果不一致的标本用PCR测HCV-RNA，结果除1例CMIA为阳性HCV-RNA-PCR为阴性外，其余CMIA与HCV-RNA-PCR定量结果一致。结论CMIA优于ELlSA灵敏、特异度高、结果准确，CMIA更适合于丙型肝炎的临床筛查应用；ELISAB比ELISAA灵敏。

临床分子生物学检验实习带教体会

目的临床实习是检验专业学生极其重要的一个学习环节,是学生把所学的理论知识应用到检验实践中的一个过程,在实习过程中学生的操作技能,以及合理运用理论知识分析问题、解决问题的能力得到培养,为顺利走向社会打下坚实的基础。因此,在有限的实习阶段,如何增强学生的检验综合素质是教学医院的重要课题。分子生物学检验是检验医学的重要分支,由于专业性强、技术要求高,稍有疏忽即可能造成严重后果。笔者结合自身分子生物学检验带教工作总结出了做好岗前培训,建立"无基因,无核酸"的意识;提高带教老师业务素质,落实岗位责任制;采用多种教学方法结合的方式等几点经验,旨在为带教老师提供一些启示。

21基因RS在早期乳腺癌治疗决策中的应用研究

目的探讨雌激素受体(ER)阳性、淋巴结阴性、人表皮生长因子受体(HER)2阴性的早期乳腺癌患者21基因复发评分(RS)与临床病理特征的关系,及其在治疗方案制订中的作用。方法收集120例早期乳腺癌患者肿瘤组织标本,利用分支DNA液相芯片技术检测21基因RS及TUBB3、TYMS、TOP2A mRNA表达水平,比较不同风险分级患者的临床病理特征,并根据RS及TUBB3、TYMS、TOP2A mRNA表达水平制订治疗方案。结果乳腺癌RS风险评分,低风险组(RS<18分)为61.7%;中风险组(RS为18~<31分)为26.7%,高风险组(RS≥31分)为11.7%。RS风险分组例数在不同组织分级、孕激素受体(PR)状态、Ki67状态上差异均有统计学意义(P<0.05)。根据RS分组,51.6%的患者治疗决策发生改变,其中48.3%的患者免于化疗。中位随访时间为22个月,3位患者出现局部复发,未出现远处复发。结论 21基因RS与早期乳腺癌组织分级、PR表达、Ki67表达有关,RS有助于治疗决策制订,降低患者化疗率。

457株肠球菌的分布及其耐药性分析

目的了解肠球菌在临床标本中的分布及对常用抗菌药物的耐药现状,特别是对耐万古霉素肠球菌的耐药分析。方法对临床标本中分离出的细菌进行系统检验,用西门子公司Microscan全自动细菌鉴定仪将细菌鉴定到种。并根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的标准,用美国Microscan全自动细菌鉴定仪的药敏分析系统固有的统计软件进行统计得出结果。结果本院6年内共分出肠球菌数为457株,其中粪肠球菌345株,屎肠球菌71株,其他为41株。主要分布在尿(中段尿)、前列腺液、生殖道分泌物、痰、血等标本中,其中从泌尿系感染患者尿液中分离的肠球菌占第一位(占27.6%)。抗菌药物方面,肠球菌对万古霉素、呋喃妥因、利奈唑烷的敏感性较高,但对临床常用抗菌药物显示高水平耐药,甚至屎肠球菌对首选药物青霉素耐药率近年来高达100%。同时,发现耐万古霉素的粪肠球菌和屎肠球菌各1例,这些都需要引起临床及检验人员的注意。结论肠球菌的感染分布已扩大化,且对临床常用抗菌药物出现高水平耐药,甚至出现了耐万古霉素的肠球菌(VRE),因此临床医师应关注临床常见肠球菌的耐药性,谨慎应用万古霉素,动态监测肠球菌的耐药状况,对指导临床治疗具有重要意义。

获得性单纯巨核细胞减少性血小板减少性紫癜20例临床分析及转归规律探讨

目的结合国内外相关文献,对该院20例获得性单纯巨核细胞减少性血小板减少性紫癜(APATP)病例进行病因、临床特征、转归规律等分析探讨。方法收集整理该院2000年8月至今收治的20例APATP患者的基本信息资料、临床表现及相关实验室检查,与相关文献进行对比分析。结果 20例APATP患者跨越各年龄段,以男性为主,均以不同程度出血为主要临床表现,外周血血象以血小板明显减低为主要表现;骨髓象以巨核细胞数量减少或缺如及血小板减少为主要表现;6例患者于初次骨髓染色体检查,其中1例为46,xY,5q—;1例为46,XX,7—;1例为45,xY,—7。结论 APATP不是独立疾病,而是一种复杂的临床综合征,可向多种疾病(如骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、特发性血小板减少性紫癜等)转变。

甲异靛诱导K562细胞凋亡及对JAK/STAT途径效应基因表达影响的研究

目的探讨甲异靛诱导K562原代细胞凋亡及对效应基因表达影响的作用。方法 K562细胞甲异靛处理12 h、24 h、48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bcl-xL、CyclinD1和C-MYC的改变。结果甲异靛作用K562细胞12 h,24 h,48 h组的凋亡率与对照组比较有显著性差异（P均〈0.05）;K562组24 h、48 h与12 h比较有显著性差异（P均〈0.05）。在甲异靛作用12～48 h,C-MYC蛋白含量逐渐减少,而Bcl-xL、CyclinD1无显著变化。结论甲异靛促进K562细胞凋亡,可能与下调STAT5下游C-MYC的蛋白含量表达减少有关。

NF2基因在丙肝病毒非结构蛋白4B调节细胞周期中的作用

目的在HEPG2细胞内观察丙肝病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)对神经纤维瘤病Ⅱ型(NF2)基因的影响及NF2在NS4B调节细胞周期中的作用。方法将细胞分为多组,其中3组对照,分别为无处理组、pCDNA3.1空质粒组和si-NF2 control组;3组作用组,分别为NS4B质粒组、NF2质粒组和si-NF2沉默基因组。每组经过转染、培养后收获细胞;RT-qPCR和Western blot检测细胞内相应基因转录及表达;流式细胞仪检测细胞周期。结果NS4B可降低NF2转录水平(P<0.01),同时NS4B的高表达和NF2的低表达对细胞周期具有相似的作用,及促进细胞周期向S期的转变;而NF2的高表达则使细胞周期停滞在G 0/G 1。结论NS4B对NF2具有一定的调控作用,NF2可能参与NS4B调控细胞周期机制。

医学分子诊断技术临床带教方法探讨

临床实习是学生学习专业知识的重要途径,鉴于分子诊断技术在临床应用中的普遍性和重要性,本文总结医学分子诊断技术临床带教过程中需重点关注的内容和方法,为临床教学质量提供保障。

结核分枝杆菌常见临床实验室检测方法的临床带教总结

结核病是严重危害人类健康的慢性传染病,本病起病隐匿,临床症状不典型,实验室和影像学检测是诊断该疾病的重要手段。实验室对该病的检测方法较多,在实际临床带教过程中,这些方法往往不是在一个专业组甚至不是一个时间段内学习,并且带教老师在临床带教过程中容易忽视同一项目、不同检测方法间的比较,因此学生在学习过程中并不能够很好掌握不同检测方法的特点。对此,本文根据实验室目前常用的结核分枝杆菌检测方法,对临床带教方法进行探讨,为临床教学质量提供保障。

真核蛋白编码基因核心启动子元件

核心启动子(core promoter,CP)是位于转录起始位点附近由100个左右核苷酸所构成的功能区域,负责与转录因子结合同其它顺式作用元件如增强子、沉默子一起对转录进行调控。目前所发现的真核蛋白编码基因核心启动子元件包括:TATA盒、上游启动子元件BRE、起始子Initiator(Inr)、下游启动子元件DPE以及新发现的位于DPE附近的十基序元件MTE。上述核心启动子元件普遍存在于真核蛋白编码基因之中,对真核生物的生长、发育、适应环境起着重要作用。

三伏天灸对支气管哮喘患者T-bet、GATA-3、Foxp3及STAT-6影响的初步研究

目的:探讨转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3及STAT-6在支气管哮喘患者中的作用,研究三伏天灸治疗支气管哮喘的免疫调节机理。方法:将18例支气管哮喘患者纳入治疗组,选取18例健康志愿者纳入对照组,运用实时荧光定量PCR检测支气管哮喘患者治疗前、治疗6个月后和对照组样本外周血单个核细胞(PBMNC)中T-bet、GATA-3、Foxp3和相关信号通路STAT-6的mRNA表达,采用流式细胞术检测外周血Th1、Th2比例,酶联免疫吸附法(ELISA)检测IFN-γ、IL-4水平。结果:经三伏天灸治疗后,支气管哮喘患者IFN-γ分泌降低,T-bet、GATA-3表达水平升高,STAT-6水平降低;治疗前后Foxp3水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:三伏天灸可下调STAT-6,上调T-bet、GATA-3,从而抑制Th2过度分泌,调节Th1/Th2比例平衡,在哮喘病程中起到免疫调节作用。

甲异靛诱导K562细胞凋亡及对传导信号STAT5表达影响的研究

目的 探讨甲异靛诱导K562原代细胞凋亡及对传导信号分子STAT5表达影响的作用.方法 K562细胞甲异靛处理12h、24 h、48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期等相关指标,Western blot检测STAT5的改变.结果 ①甲异靛作用K562细胞12h、24 h、48 h凋亡率分别为12.5±0.69,19.4±1.07和42.5±3.22,与对照组相同时间段比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.②甲异靛可使K562细胞阻滞于S期,S期细胞比例增加至（70.48±6.34）,G0/G1期、G2/M期细胞减少.③在甲异靛作用12 h后至48 h,STAT5蛋白含量逐渐减少.结论 甲异靛促进K562细胞凋亡,可能与STAT5蛋白含量表达减少有关.