马钱子碱通过调控PI3K/Akt/mTOR通路对肺腺癌细胞的抑制作用研究

目的:探究马钱子碱对非小细胞肺癌的影响及其作用机制。方法:采用CCK-8法和划痕试验法研究马钱子碱抑制A549细胞的增殖、迁移能力,Western blot法检测各组细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)通路相关的蛋白表达,ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果:CCK-8试验结果显示,给药组对A549细胞增殖有明显抑制作用;划痕试验显示,与空白组比较,给药组细胞迁移率明显下降(P<0.01);Western blot结果显示,给药干预后可显著下调p-Akt、p-mTOR的表达(P<0.001),同时给药组的mTOR、Akt、PI3K蛋白表达下调(P<0.05);ELISA试验结果显示,采用马钱子碱进行干预后,细胞上清IL-6和TNF-α含量均显著升高(P<0.01或P<0.001)。结论:马钱子碱可有效抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移,可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路而起作用,并通过调节TNF-α含量来达到抗肿瘤的作用。

异类叶升麻苷和桔梗皂苷D的体外抗肺癌研究

目的:探讨异类叶升麻苷与桔梗皂苷D单用及配伍对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:采用CCK-8、细胞划痕、Transwell试验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭,Western Blot检测EphA2/AKT/mTOR通路蛋白,ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)含量。结果:异类叶升麻苷和桔梗皂苷D均能抑制细胞增殖,且IC50分别为141、170μg/mL。与对照组比较,桔梗组、配伍组愈合率显著下降(P<0.01),给药各组穿膜细胞数均显著减少(P<0.01),其中配伍组最为明显。与对照组比较,桔梗组、配伍组显著下调EphA2、p-EphA2蛋白表达(P<0.01),桔梗组显著下调p-AKT、mTOR蛋白表达(P<0.01)。与对照组比较,桔梗组IL-6、TNF-α显著升高(P<0.01,P<0.05),而异类叶组TNF-α和配伍组IL-6显著下调(P<0.01)。结论:异类叶升麻苷、桔梗皂苷D通过调控EphA2/AKT/mTOR通路和调节TNF-α、IL-6抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭。且二者配伍显著调控Eph A2因子,并能减轻桔梗诱导IL-6和TNF-α的上调,推测配伍组可能具有增效减毒的作用。

臭牡丹不同提取物的抗肿瘤活性筛选及其对裸鼠移植瘤中EMT相关蛋白的影响

目的:比较臭牡丹不同提取部位的抗肿瘤作用及其作用机制。方法:根据前期研究结果,采用乙酸乙酯、石油醚萃取、大孔树脂纯化方法,将臭牡丹苯乙醇苷类、黄酮类、萜类成分进行分离提取并纯化。建立CCK8、划痕试验、Transwell侵袭小室经典的抗肿瘤药理模型,检测臭牡丹三大活性部位对人肺腺癌A549体外增殖、迁移、侵袭的影响。并通过建立A549裸鼠移植瘤模型,检测各组裸鼠癌组织与癌旁组织中β-连环蛋白(β-catenin)、波形蛋白(Vimentin)、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶-3蛋白(p-GSK-3β)蛋白的表达水平。结果:苯乙醇苷部位以类叶升麻苷和异类叶升麻苷为对照,峰面积归一化法测得苯乙醇含量为88.93%;黄酮类部位以芦丁为对照,紫外分光度法测得黄酮含量均值为60%;萜类以齐墩果酸为对照品,紫外分光光度法测得石油醚部位萜类成分含量为50.99%。CCK8法测得臭牡丹苯乙醇苷、黄酮、萜类成分的IC50平均值分别为0.125、0.46、1.43 mg/ml。划痕试验测得臭牡丹苯乙醇苷、黄酮、萜类成分的24 h愈合率分别为14.6%、16.9%、19.9%;48 h愈合率分别为22.4%、20.4%、29.7%,均明显降低(P<0.01)。与模型对照组相比,Transwell侵袭小室试验显示各药物干预组的穿膜细胞数均显著降低(P<0.01),0.4 mg/ml黄酮组与0.15 mg/ml苯乙醇苷组尤为显著。体内实验中,模型对照组瘤组织中的β-catenin、Vimentin蛋白表达增强(P<0.01),E-cadherin、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。与模型对照组比较,臭牡丹0.2 g/kg组能下调瘤组织中的β-catenin、Vimentin蛋白表达(P<0.05),上调GSK-3β、p-GSK-3β(P<0.05)蛋白表达。结论:臭牡丹苯乙醇苷、黄酮、萜类成分均对人肺腺癌A549细胞的增殖、迁移与侵袭具有一定的抑制作用,其中苯乙醇苷部位、黄酮部位对A549细胞体外抑制作用均明显,且具量效关系。萜类部位显示出的抗肿瘤作用不突出,可能与其纯度有关。臭牡丹提取物的抗肿瘤作用可能是通过调节瘤组织中β-catenin、Vimentin、E-cadherin、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白的表达从而阻断肿瘤局部的上皮间质转化(EMT)而起作用。