肝癌细胞膜上转铁蛋白受体和去唾液酸糖蛋白受体数量的变化

目的:研究肝癌细胞膜摄取转铁蛋白受体的变化。方法：采用免疫组化及配体受体结合法分别测定正常肝脏、肝癌组织及癌旁肝组织转铁蛋白受体及去唾液酸糖蛋白受体的含量。结果：肝癌组织中转铁蛋白受体的含量高于癌旁及正常肝组织，而去唾液酸糖蛋白受体却明显低于癌旁及正常肝组织。结论：该变化有利于肝癌细胞对转铁蛋白的有效提取，也增加了肝癌细胞对高度唾液酸化的转铁蛋白的相对特异性摄取。

内皮细胞选择素及其配体在肝癌转移中的作用

目的：研究内皮细胞选择素及其配体在肝癌转移中的作用。方法：采用地高辛标记探针原位杂交的方法，检测了正常肝脏、肝癌组织及癌旁肝组织中内皮细胞选择素（Ｅ－Ｓｅｌｅｃｔｉｎ）及其配体合成的关键酶岩藻糖转移酶（Ｆｕｃ－Ｔ）的转录水平。结果：Ｅ－Ｓｅｌｅｃｔｉｎ的转录只局限于内皮细胞，且在肝癌及正常肝组织之间没有差别；但Ｆｕｃ－Ｔ的转录水平在肝癌与正常肝组织之间差别明显，表现为多发肝癌中子瘤的水平明显高于母瘤，母瘤明显高于单发肝癌，单发肝癌明显高于癌旁组织，而癌旁组织又明显高于正常肝组织。结论：Ｅ－Ｓｅｌｅｃｔｉｎ与其配体的相互粘附，在肝癌的转移中起了重要作用。

肝癌组织中神经节苷脂谱改变的机理研究

目的：检测肝癌组织中唾液酸酶的活性，探讨肝癌组织中神经节苷脂谱改变（ＧＤ３含量增加）的机理。方法：以蓖麻凝集素Ⅱ与乳糖基的特异结合为基础，用神经节苷脂ＧＭ３作为水解底物包被于９６孔板，在唾液酸酶的作用下，糖链末端的唾液酸被切除而暴露出乳糖残基，用生物素标记的蓖麻凝集素与后者结合，再用ＡＢＣ法测定结合量即可检测唾液酸酶活性。结果：肝癌组织中不管是可溶性的还是膜结合性的唾液酸酶，其活性都明显低于其癌旁组织。结论：肝癌组织中神经节苷脂ＧＤ３增加的原因不仅与ＧＤ３合成酶活性的增高有关，还与其水解酶唾液酸酶活性的降低相关。

大鼠肝癌组织中GD_3合成酶升高的特异性研究

作者改进了鞘糖脂糖基转移酶的检测方法，用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０Ｆｉｎｅ成功地分离了酶反应的同位素标记产物与底物。从而缩短了酶活性的测定时间，简化了操作步骤，并减少了同位素的污染机会。在此基础上系统检测了二乙基亚硝胺诱发肝癌大鼠及正常大鼠各脏器（肝、脾、肾、心、脑、肺、胃）ＧＤ３合成酶（ＣＭＰ－ＮｅｕＡｃ：ＧＭ３唾液酸转移酶；ＳＴ２）及目前报道的其他４种鞘糖脂唾液酸转移酶（ＳＴ１、３、４、５）的活性，企图从中选择一种ＳＴ２含量高、活性高的组织作为酶分离纯化的材料。结果表明，ＳＴ２在二乙基亚硝胺诱发肝癌大鼠肝癌组织中特异性升高，从而提示此组织可用作ＳＴ２分离纯化的最佳材料。

肝细胞癌变时神经节苷脂对转铁蛋白受体介导的内吞作用的影响

目的：研究肝细胞癌变时神经节苷脂ＧＭ３和ＧＤ３的变化对转铁蛋白受体介导的内吞作用的影响及其在促进肝癌生长中所起的作用。方法：采用放射性核素标记配体受体结合法，及洗脱法测定转铁蛋白与其受体的结合以及转铁蛋白受体介导的内吞作用；用ＭＴＴ比色法测定细胞生长情况。结果：（１）ＧＭ３抑制肝癌细胞的生长，ＧＤ３则促进肝癌细胞的生长；（２）这种影响与转铁蛋白对细胞的作用直接相关；（３）此相关作用不是通过影响转铁蛋白与其受体的结合，而是通过影响转铁蛋白受体介导的内吞作用而实现的。结论：肝细胞癌变时神经节苷脂组成的变化能明显加快转铁蛋白受体介导的内吞作用，增加肝癌细胞对转铁蛋白的摄取，从而促进肝癌细胞的生长与增殖。

维生素A对实验性大鼠肝纤维化的影响

目的：观察中等剂量维生素Ａ对四氯化碳（ＣＣｌ４）诱导的实验性大鼠肝纤维化的影响。方法：在四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的同时，给以１００ｍｇ／ｋｇ体重维生素Ａ皮下注射。检测在早（３周）、中（６周）、晚（１２周）期大鼠肝组织羟脯氨酸含量及血清中透明质酸及谷丙转氨酶水平，并观察肝脏的组织病理改变。结果：治疗组早期血清透明质酸及组织病理学的炎症程度均显著低于ＣＣｌ４对照组（Ｐ＜０．０５），中、晚期肝组织羟脯氨酸含量及晚期肝组织学纤维化程度虽低于ＣＣｌ４对照组，但相差不显著。结论：上述剂量维生素Ａ能减轻ＣＣｌ４所致大鼠的早期肝脏损害，它可能有益于减轻其后的肝纤维化。

缺铜对大鼠自由基防御系统酶组分和血清溶血素的影响

初断孔Wistar大鼠分别饲以缺铜(Cu0.49mg/kg)和含铜(Cu 6.44mg/kg)饲料52至57天。测定大鼠组织中自由基防御系統酶组分[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSIHPx)]活性、脂质过氧化物(LPO)含量和血清溶血素含量等。与对照组相比,缺铜大鼠红细胞及各脏器CuZoSOD活性显著降低,CAT和GSHPx活性无明显变化,亦未观察到自由基引起组织损伤的产物LDO的升高。提示,缺铜时机体自由基防御系统酶组分确实受到了一定程度的影响,但机体对自由基损伤的防御能力,总体上没有明显受损。缺铜大鼠血清溶血素显著下降,说明块铜影响了机体的体液免疫功能。实验结果还提示,作为反映机体铜营养状况的指标,CuZnSOD比血红蛋白更敏感。

应用银染端粒重复序列扩增法检测人肝癌细胞系端粒酶活性的研究

观察人肝癌细胞的端粒酶活性。应用非放射同位素银染的端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ），检测６株人肝癌细胞株（ＢＥＬ－７４０２，ＨｅｐＧ２，ＱＧＹ－７７０１，ＱＧＹ－７７０３，ＳＭＭＣ－７７２１，ＰＬＣ／ＰＲＦ／５）的端粒酶活性，同时检测ＲＮａｓｅ处理的阴性标本。６株人肝癌细胞的端粒酶均为阳性。

大鼠肝脏贮脂细胞的分离培养及免疫细胞化学鉴定

大鼠肝脏贮脂细胞的分离培养及免疫细胞化学鉴定＊许青李石贺平△何金▲李玉莉▲王皓△刘彦君△谢天培△肝脏的贮脂细胞是产生肝脏细胞外基质的主要细胞。由于其在肝脏总体细胞中所占比例小，且在分离过程中易混有其他细胞成分，分离有较大难度［１］。１９８２年Ｋｎｏｏ...

人肝癌细胞与自体激活B淋巴细胞融合制备肿瘤疫苗

目的：观察３例人肝癌组织细胞与其自体激活Ｂ淋巴细胞融合后融合细胞表面分子ＧＰ７５和免疫相关分子ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ和Ｂ７的表达情况，以便为肿瘤疫苗向临床试验过渡提供人体细胞的实验依据。方法：应用聚乙二醇（ＰＥＧ）法将人肝癌细胞与其自体激活Ｂ淋巴细胞融合，利用流式细胞仪观察融合细胞表面分子ＧＰ７５和免疫相关分子ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ和Ｂ７的表达情况。结果：融合细胞表面不仅表达肝癌细胞表面的ＧＰ７５分子，还可表达共刺激分子Ｂ７及ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ。结论：人肝癌细胞与其自体激活的Ｂ淋巴细胞融合后的杂交瘤细胞既能表达肝癌细胞表面分子ＧＰ７５，又可表达共刺激信号分子。

分泌抗人原发性肝癌单克隆抗体杂交瘤的制备及专一性分析

目的：研制抗人原发性肝癌（ＰＨＣ）特异性单抗（ＭｃＡｂ），为肝癌的导向诊断与治疗奠定基础。方法：用人ＰＨＣ细胞系ＨｅｐＧ２免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与同源骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，经间接免疫荧光染色加流式细胞仪筛选及专一性鉴定，单抗经ＰｒｏｔｅｉｎＡ法纯化，用ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度测定。结果：筛选出３株能分泌抗人ＰＨＣ细胞膜单抗的杂交瘤，这些杂交瘤经３次亚克隆后仍能稳定地分泌单克隆抗体。专一性分析显示３株杂交瘤分泌的单抗均可特异性地识别人ＰＨＣ细胞。纯化的单抗属小鼠ＩｇＧｌ亚类。结论：ＭｃＡｂ与肝癌细胞具有较高的亲和力，具有潜在的导向显像和导向治疗的应用价值。

B细胞融合人肝癌细胞疫苗^(60)Co照射后生长及表型的观察

目的：探讨Ｂ细胞与人肝癌细胞的融合细胞经６０Ｃｏ照射后的生长和免疫原性相关表型的变化。方法：体外照射后观察融合细胞生长曲线和软琼脂集落形成；体内采用裸鼠成瘤试验，观察体外生长和动物体内成瘤性，应用流式细胞仪检测照射后融合细胞ＭＨＣ－Ⅰ，ＭＨＣ－Ⅱ，Ｂ７及肝癌抗原（ＧＰ７５）表达，观察其免疫原性相关表型变化。结果：经６０Ｃｏ照射的融合细胞失去增殖能力，４ｄ后可见部分细胞死亡，７ｄ后几乎全部死亡。６０Ｃｏ照射后３ｄ内ＭＨＣ－Ⅰ，ＭＨＣ－Ⅱ，Ｂ７及ＧＰ７５表达无明显变化。结论：经６０Ｃｏ照射后融合细胞失去增殖能力。

细胞融合肝癌疫苗体内抗肿瘤特异性及T细胞作用的初探

目的：观察大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与自体激活Ｂ细胞的融合细胞作为疫苗抗肿瘤作用的特异性，并观察该肝癌疫苗体内抗肿瘤作用与Ｔ细胞亚群的关系。方法：（１）应用聚乙二醇（ＰＥＧ）融合大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与激活Ｂ细胞制备细胞融合大鼠肝癌疫苗；（２）事先经该肝癌疫苗免疫的大鼠分别接种肝癌ＢＥＲＨ－２细胞和大鼠膀胱癌ＮＢＴ－Ⅱ细胞，观察该肝癌疫苗抗肿瘤作用的特异性；（３）该肝癌疫苗免疫大鼠之前或之后，以小鼠抗大鼠ＣＤ４单抗或抗ＣＤ８单抗多次注射，以清除大鼠ＣＤ４＋或ＣＤ８＋Ｔ细胞，随后观察大鼠的成瘤性。结果：ＢＥＲＨ－２细胞不能在经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫的大鼠体内致瘤，而ＮＢＴ－Ⅱ细胞可致瘤；事先清除ＣＤ４＋或ＣＤ８＋Ｔ细胞的大鼠经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫后仍能被肝癌ＢＥＲＨ－２细胞致瘤；而经该肝癌疫苗免疫的大鼠，清除了ＣＤ４＋细胞后不能被ＢＥＲＨ－２细胞致瘤，清除了ＣＤ８＋细胞后则可被ＢＥＲＨ－２细胞致瘤。结论：细胞融合大鼠肝癌疫苗有特异性抗肿瘤作用。

应用双重原位杂交技术定位检测肝细胞癌中乙型、丙型肝炎病毒

探索乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是否可同时感染同一宿主细胞。方法：联合应用地高辛标记探针和生物素标记探针的双标记方法，成功建立起非放射性双重原位杂交技术，并应用这一技术检测了１０例肝细胞性肝癌及癌周组织细胞内乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的感染情况。结果：发现ＨＢＶ、ＨＣＶ可同时感染同一宿主细胞这一独特的生物学现象。结论：认为ＨＢＶ、ＨＣＶ双重病毒感染可能并不遵循＂病毒干扰＂原则，这为了解此两种病毒在肝细胞癌发生中可能存在着的协同作用提供了新的线索。

CD45分子在NK细胞激活中的作用及其分子机制研究

为研究NK细胞表面分子在NK细胞激活及释放细胞因子中的作用及其机制,作者用系列粘附分子单抗、配体及基因转染细胞刺激或共刺激NK细胞,定量检测IFN-γ的分泌。结果表明,CD45分子交联可独立激活NK细胞,CD45分子的信号传递作用对CD16分子无依赖性。随着NK细胞的成熟与分化,其表面CD45分子的表达呈现RA向RO变化的特征,而RO的交联,对NK细胞的刺激显著强于RA的交联。CD22α和CD22β基因转染细胞能显著粘附NK细胞系NK3.3(RO^+),但并不能有效刺激其产生IFN-γ。作者推测,CD45分子,尤其是CD45RO,是NK细胞表面独特的信号传递分子,通过直接激活Src家族的PTK成员,开启独立的、非CD16分子参与的NK细胞内信号传递途径。

化疗药和热休克对人肝癌细胞株SMMC—7721中MDR1基因表达的影响

以人肝癌细胞株ＳＭＭＣ—７７２１为模型，用化疗药丝裂霉素（ＭＭＣ），阿霉素（ＡＤＲ），卡铂（ＣＢＢＣＡ）和热休克处理后，观察其ＭＤＲ１基因的表达情况。结果发现，ＳＭＭＣ—７７２１细胞经ＡＤＲ处理后１周，ＭＤＲ１基因表达即增加，ＭＭＣ和ＣＢＢＣＡ处理后２周，ＭＤＲ１基因开始升高；而热休克处理后０．５ｈＭＤＲ１基因表达即见增高，在去除热休克因素后１ｈ这种增高的ＭＤＲ１基因表达开始降低。说明ＭＤＲ１基因表达不但受化疗药的影响，也可以通过热休克进行调节人肝癌细胞中ＭＤＲ１基因表达增加被认为是由于化疗药和热休克直接激活了ＭＤＲ１基因启动子所致。所以ＭＤＲ１基因也应是机体应激反应的主要基因之一。

重组B7-2腺病毒载体的构建及其诱导小鼠抗肝癌免疫的初步研究

探讨重组腺病毒介导的Ｂ７２基因转染对小鼠肝癌细胞免疫原性的影响。构建Ｂ７２的重组腺病毒载体，通过重组腺病毒介导，将Ｂ７２和ｌａｃＺ基因分别转染小鼠肝癌细胞Ｈｅｐａ１６，并在不同时相检测Ｂ７２和ｌａｃＺ基因的表达水平，建立小鼠肝癌肿瘤模型，在小鼠体内观察Ｂ７２基因转染对小鼠肝癌免疫原性的影响。成功地构建了Ｂ７２的重组腺病毒载体，用Ｂ７２及ｌａｃＺ重组腺病毒分别转染小鼠肝癌细胞，转染后４ｈ开始检测到Ｂ７２或ｌａｃＺ表达，其表达量逐渐升高至４８～７２ｈ达高峰后逐渐降低。经２次／ｗ肿瘤内注射，共５次Ｂ７２治疗后，肝癌体积明显缩小，与对照生理盐水组及ｌａｃＺ组相比，有显著差异。小鼠肝癌组织中Ｂ７２的表达能增强其免疫原性，减少其致瘤性。

核心肌群运动训练对肩袖损伤后肩关节功能及稳定性的研究

目的探讨核心肌群主动运动训练对肩袖损伤术后患者的疼痛、关节活动度、稳定性的改善情况。方法选择2023年1月至2023年8月在我院行关节镜下肩袖修补术的患者82例,随机分为对照组和试验组。对照组进行常规治疗,试验组在常规治疗基础上增加核心肌群运动训练(腹桥、背桥和健侧侧桥训练)。对两组治疗前后的美国肩肘外科协会评分(American shoulder and Elbow surgeons Form,ASES)、关节活动范围(ROM)、Constant评分等进行评价。结果治疗后两组ASES评分、Constant评分及肩关节ROM较治疗前有显著进步(P<0.05),且试验组ASES评分疼痛、功能评分均明显高于对照组,差异具有显著性意义(P<0.05)。结论核心肌群主动运动训练在增强核心肌群力量的同时可以增加肩关节活动范围,改善日常生活能力,增加肩关节稳定性,对肩袖损伤带来的疼痛也有缓解,临床治疗效果显著。

体外膈肌起搏联合四点跪位训练对缺血性脑卒中患者肺功能的影响

目的观察体外膈肌起搏联合四点跪位训练对缺血性脑卒中患者肺功能的影响。方法选择2023年1月1日—6月30日在苏州市独墅湖医院康复科收治的60例缺血性脑卒中患者,按照随机数字表法分为对照组和治疗组,每组30例。2组均接受常规的基础训练,对照组予体外膈肌起搏器治疗,治疗组给予体外膈肌起搏器联合四点跪位训练治疗。连续治疗8周后,评估治疗前后患者健侧及患侧平静呼气末膈肌厚度(CEEDT)、最大吸气末膈肌厚度(MEIDT)、平静呼吸膈肌移动度(QBDM)、深呼吸膈肌移动度(DBDM)、用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV_(1))、FEV_(1)/FVC、最大呼气流量(PEF)、6分钟步行距离(6MWD)和Borg评分。结果2组一般资料及治疗前各项评估结果比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与治疗前相比,对照组治疗8周后健侧CEEDT提高(P<0.05),治疗4、8周后患侧CEEDT均提高(P<0.05),治疗组治疗4、8周后健侧和患侧的CEEDT均提高(P<0.05);与对照组相比,治疗组治疗8周后健侧和患侧的CEEDT均提高(P<0.05)。治疗4、8周后2组健侧和患侧的MEIDT、QBDM和DBDM,以及患者FEV_(1)、FVC、PEF、6MWD均优于治疗前,Borg评分低于治疗前(P<0.05);且治疗组治疗4、8周后健侧和患侧的MEIDT、QB⁃DM、DBDM,以及患者的FEV_(1)、FVC和PEF明显高于对照组(P<0.05);治疗组治疗8周后FEV_(1)/FVC、6MWD均提高,Borg评分降低(P<0.05)。结论体外膈肌起搏联合四点跪位训练能够改善缺血性脑卒中患者的肺功能。

应用双重原位杂交研究myc、ras癌基因在人肝细胞癌中的表达特征

目的：建立非同位素双重原位杂交技术，以便在单细胞水平同时显示两种不同的癌基因杂交信号，验证＂癌变多步骤＂学说。方法：采用地高辛（Ｄｉｇ）和生物素（Ｂｉｏ）标记探针，成功地建立了非同位素双重原位杂交技术，对１０例人肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）及癌周组织细胞内ｍｙｃ、ｒａｓ癌基因家族及ｒａｓ家族内部基因两－两之间（ｍｙｃ与Ｎ－ｒａｓ，ｍｙｃ与Ｋ－ｒａｓ，ｍｙｃ与Ｈ－ｒａｓ，Ｎ－ｒａｓ与Ｋ－ｒａｓ，Ｎ－ｒａｓ与Ｈ－ｒａｓ，Ｋ－ｒａｓ与Ｈ－ｒａｓ）的表达情况进行了检测。结果：仅在个别肿瘤标本中少量肿瘤细胞内发现有两种癌基因杂交信号的共同显示。Ｄｉｇ－ｍｙｃ与Ｂｉｏ－Ｈ－ｒａｓ共同显示２例，Ｄｉｇ－ｍｙｃ与Ｂｉｏ－Ｎ－ｒａｓ共同显示２例，Ｄｉｇ－ｍｙｃ与Ｂｉｏ－Ｋ－ｒａｓ共同显示１例，其分布共同特点是ｍｙｃ阳性细胞呈弥漫性分布，ｒａｓ阳性细胞呈散在或片状分布于ｍｙｃ阳性细胞之间，偶见少量细胞内有两种核酸杂交信号的共同显示；ｒａｓ家族中Ｄｉｇ－Ｎ－ｒａｓ与Ｂｉｏ－Ｈ－ｒａｓ、Ｄｉｇ－Ｎ－ｒａｓ与Ｂｉｏ－Ｋ－ｒａｓ仅各１例共同显示。两种阳性细胞各呈片状、散在性分布，有部分混杂，其中少量细胞内有两种核酸杂交信号的共同显示。结论：?