桦木酸在缺氧条件下对PC⁃3细胞干性、侵袭、迁移、黏附及HIF⁃1α表达的影响

目的探讨桦木酸(betulinic acid,BA)在缺氧条件下对人前列腺癌骨转移PC⁃3细胞干性、侵袭、迁移、黏附及缺氧诱导因子⁃1α(hypoxia⁃inducible factor⁃1α,HIF⁃1α)表达的影响。方法采用CCK⁃8检测BA对前列腺癌骨转移细胞株PC⁃3细胞活力半数抑制浓度(IC_(50)),再分为IC_(50)药物浓度BA组和对照组,检测BA对PC⁃3细胞增殖的影响;在常氧、缺氧及缺氧+IC_(50)(10μmol/L)BA条件下处理PC⁃3细胞,采用Transwell实验检测BA对细胞侵袭、迁移能力的影响;采用细胞黏附实验检测BA对细胞黏附能力的影响;采用肿瘤成球实验检测BA对细胞自我更新能力影响;采用PCR实验及Western blot实验检测BA对细胞表达HIF⁃1α、CD31、CD44的影响;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BA对细胞VEGF、IL⁃8、IL⁃1β、IL⁃6和TNF⁃α因子表达的影响。结果BA呈浓度和时间依赖性抑制PC⁃3细胞增殖,其IC_(50)为10μmol/L。PC⁃3细胞在缺氧环境中的干性、侵袭、迁移、黏附能力增加,而加入BA后PC⁃3细胞的干性、侵袭、迁移、黏附能力下降。Western blot实验结果显示,BA能抑制PC⁃3细胞中HIF⁃1α蛋白表达,同时抑制CD31、CD44蛋白表达(P<0.01);PCR实验结果显示,BA下调HIF⁃1α的mRNA表达,同时也下调CD31、CD44的mRNA表达(P<0.01)。ELISA试验结果显示BA可抑制VEGF、IL⁃8、IL⁃1β、IL⁃6和TNF⁃α因子的表达(P<0.01)。结论BA能抑制缺氧条件下PC⁃3细胞的干性、侵袭、迁移及黏附能力,其机制可能与BA下调HIF⁃1α、CD31、CD44表达,及抑制VEGF、IL⁃8、IL⁃1β、IL⁃6和TNF⁃α等因子表达有关。

桦木酸在酸性微环境中对PC-3细胞生物学行为及破骨细胞分化的作用

目的研究桦木酸在酸性微环境中对PC-3细胞增殖、迁移、黏附、成球、干细胞特性及破骨细胞分化的影响。方法使用pH 7.4和pH 6.5的培养基培养PC-3细胞,然后加入浓度为0、1、5、10、15、20、30、40μmol/L的桦木酸继续培养,24 h后采用CCK-8法和Transwell检测桦木酸对PC-3细胞增殖与迁移的影响,通过黏附试验、成球试验检测BA对PC-3细胞干细胞特性的变化,通过破骨细胞分化实验检测桦木酸对破骨细胞分化的影响,利用qPCR和Western blot检测PC-3细胞中CD31和CD44蛋白的表达。结果CCK-8结果表明与中性对照组(pH 7.4)相比,酸性微环境(pH 6.5)能促进PC-3细胞增殖,而桦木酸呈浓度依赖性抑制PC-3细胞在酸性微环境中的增殖(P<0.05)。此外,酸性微环境促进PC-3细胞的迁移、黏附、瘤体形成及CD31和CD44表达,在此基础上加入桦木酸后,PC-3细胞的迁移能力、黏附、瘤体形成、干细胞特征和破骨细胞分化明显下调(P<0.05)。结论桦木酸可抑制酸性微环境中PC-3细胞的增殖、迁移、干细胞特性及破骨细胞分化。