为进一步研究刺参甘露糖结合凝集素(AJ-MBL)的功能及提高刺参自身免疫力,对AJ-MBL基因的CDS区进行原核表达、纯化并初步鉴定其生物学活性。采用RT-PCR法扩增AJ-MBL基因编码区,经酶切鉴定、序列分析后,将其CDS区498 bp片段克隆至原核表...为进一步研究刺参甘露糖结合凝集素(AJ-MBL)的功能及提高刺参自身免疫力,对AJ-MBL基因的CDS区进行原核表达、纯化并初步鉴定其生物学活性。采用RT-PCR法扩增AJ-MBL基因编码区,经酶切鉴定、序列分析后,将其CDS区498 bp片段克隆至原核表达载体pET28a中,得到重组质粒pET-AJ-MBL。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并经IPTG诱导表达出分子量约17 ku的融合蛋白。该蛋白以包涵体形式存在,用Ni2+离子亲和柱纯化。结果显示,获得高表达量的重组纯化蛋白。纯化的17 ku AJ-MBL进行红细胞凝集试验检测其生物学活性。凝集试验结果显示,AJ-MBL凝集最小浓度为10μg/mL。本实验成功构建了AJ-MBL原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达了17 ku AJ-MBL蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性。展开更多
目的:研究旋毛虫肌幼虫虫体蛋白诱导小细胞肺癌H446细胞的凋亡作用以及与C-kit表达的相关性。方法:将H446细胞进行分组,旋毛虫肌幼虫虫体蛋白为实验组、顺铂(DDP)为阳性对照组和不加处理的细胞为阴性对照组,通过MTT比色法检测虫体蛋白和...目的:研究旋毛虫肌幼虫虫体蛋白诱导小细胞肺癌H446细胞的凋亡作用以及与C-kit表达的相关性。方法:将H446细胞进行分组,旋毛虫肌幼虫虫体蛋白为实验组、顺铂(DDP)为阳性对照组和不加处理的细胞为阴性对照组,通过MTT比色法检测虫体蛋白和DDP对H446细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测虫体蛋白和DDP诱导H446细胞凋亡率的变化;Real time PCR及Western Blot法分别检测C-kit mRNA转录水平和蛋白表达情况。结果:MTT检测结果显示,随着虫体蛋白浓度的增加及作用于H446细胞时间的延长,H446细胞的增殖活力逐渐减弱,虫体蛋白对H446细胞具有明显的抑制作用,呈剂量-时间效应;流式细胞仪检测显示,虫体蛋白和DDP均能诱导H446细胞发生凋亡;Real time PCR和Western Blot表明,与阴性对照组相比,虫体蛋白组和DDP组C-kit表达水平下降。结论:旋毛虫肌幼虫虫体蛋白对H446细胞的生长具有抑制作用,并诱导H446细胞凋亡,C-kit基因可能是小细胞肺癌治疗的分子靶点之一。展开更多
文摘为进一步研究刺参甘露糖结合凝集素(AJ-MBL)的功能及提高刺参自身免疫力,对AJ-MBL基因的CDS区进行原核表达、纯化并初步鉴定其生物学活性。采用RT-PCR法扩增AJ-MBL基因编码区,经酶切鉴定、序列分析后,将其CDS区498 bp片段克隆至原核表达载体pET28a中,得到重组质粒pET-AJ-MBL。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并经IPTG诱导表达出分子量约17 ku的融合蛋白。该蛋白以包涵体形式存在,用Ni2+离子亲和柱纯化。结果显示,获得高表达量的重组纯化蛋白。纯化的17 ku AJ-MBL进行红细胞凝集试验检测其生物学活性。凝集试验结果显示,AJ-MBL凝集最小浓度为10μg/mL。本实验成功构建了AJ-MBL原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达了17 ku AJ-MBL蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性。
文摘目的:研究旋毛虫肌幼虫虫体蛋白诱导小细胞肺癌H446细胞的凋亡作用以及与C-kit表达的相关性。方法:将H446细胞进行分组,旋毛虫肌幼虫虫体蛋白为实验组、顺铂(DDP)为阳性对照组和不加处理的细胞为阴性对照组,通过MTT比色法检测虫体蛋白和DDP对H446细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测虫体蛋白和DDP诱导H446细胞凋亡率的变化;Real time PCR及Western Blot法分别检测C-kit mRNA转录水平和蛋白表达情况。结果:MTT检测结果显示,随着虫体蛋白浓度的增加及作用于H446细胞时间的延长,H446细胞的增殖活力逐渐减弱,虫体蛋白对H446细胞具有明显的抑制作用,呈剂量-时间效应;流式细胞仪检测显示,虫体蛋白和DDP均能诱导H446细胞发生凋亡;Real time PCR和Western Blot表明,与阴性对照组相比,虫体蛋白组和DDP组C-kit表达水平下降。结论:旋毛虫肌幼虫虫体蛋白对H446细胞的生长具有抑制作用,并诱导H446细胞凋亡,C-kit基因可能是小细胞肺癌治疗的分子靶点之一。