猪流行性腹泻病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立及初步应用

旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV(MK862249.1)M基因序列保守区设计合成特异性引物对和探针;通过对反应体系和反应条件的优化,成功建立了可用于检测PEDV的荧光定量PCR(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR)方法,将自行建立的FQ-PCR方法的引物对/探针用来确定ddPCR方法;对ddPCR方法进行敏感性、特异性、重复性和初步应用试验。结果显示:自行建立的FQ-PCR方法在敏感性、重复性等方面均优于行标FQ-PCR方法;根据自行设计的FQ-PCR方法建立的ddPCR方法最低检测极限为0.15 copies·μL^(-1),敏感性高于行业标准(SN/T 1699—2017)FQ-PCR方法(1.0×10^(1)copies·μL^(-1));模板浓度为1.0×10^(0)~1.0×10^(4)copies·μL^(-1)时,具有良好的线性关系(R 2>0.99);批内、批间变异系数(CV%)为1.52%~7.40%;对猪丁型冠状病毒、猪伪狂犬病毒等11种对照病毒核酸检测结果均为阴性;分别用建立的ddPCR方法、行业标准FQ-PCR方法对150份临床样品进行PEDV核酸检测,ddPCR方法对行业标准FQ-PCR方法检测阳性样品的检测符合率为10^(0)%。本研究成功建立的PEDV ddPCR检测方法可用于临床上PEDV感染的早期检测和定量检测,为PEDV核酸标准物质的研制提供了定量手段。

猪伪狂犬病病毒疑似感染人的实验室诊断及分析

为给人感染伪狂犬病病毒(PRV)来源分析及其感染机理研究提供相关信息,对一例疑似感染PRV患者的血清、脑脊液、拭子及其工作猪场的病猪血清、组织等样品进行病原学、血清学检测及病毒分离,对其工作猪场开展流行病学调查,并采集患者同事血清样品进行PRV抗体检测。结果显示:病人样品经数字PCR检测均为PRV核酸阳性;病人发病后5~90 d内的血清样品均为PRV gB抗体阳性,gE抗体发病后18 d转为阳性并一直持续到发病后90 d;病人同事均未表现临床症状,其血清样品PRV gB抗体阳性率为22.2%,gE抗体均为阴性;从病人工作猪场的病猪样品中分离到PRV,且样品经荧光定量PCR核酸检测及ELISA抗体检测均检出阳性;病人工作猪场为PRV阳性场,病人及PRV gB抗体阳性同事均有直接接触病猪史。结果表明,患者感染的PRV来自其工作猪场猪群的可能性较大,人感染后表现出和动物感染相似的抗体消长规律。PRV对公共卫生的影响及其感染机制需进一步关注和研究。

2020—2021年河南省部分猪场和屠宰场猪伪狂犬病血清学调查

研究用ELISA方法对2020—2021年河南省18个市的猪进行猪伪狂犬病感染抗体检测,检测样品份数为39523份。结果显示,2020—2021年猪伪狂犬病感染抗体个体阳性率分别为20.93%、17.28%;种猪场阳性率分别为14.78%、9.54%,商品代养殖场阳性率分别为21.56%、20.93%;屠宰场阳性率分别为24.45%、19.16%。可见,河南省部分猪场和屠宰场总体猪伪狂犬病感染情况2021年低于2020年,说明该病防控与净化工作取得一定成效。

种羊场动物疫病净化工作的思考

开展种羊场动物疫病净化是消灭重点羊病的科学路径,也是羊病防控的最终目标。该文针对当前我国羊病防控面临的形势,阐述了种羊场开展动物疫病净化的必要性和重要意义,结合动物疫病净化工作新要求和实践经验,从净化工作团队、屏障设施建设、饲养标识和无害化管理、生物安全管理、主要羊病监测净化、记录档案管理等方面提出了详细建议,以期为种羊场开展动物疫病净化工作提供指导和参考。

2017—2020年河南省猪伪狂犬感染抗体和病原检测结果分析

为了解河南省规模猪场猪伪狂犬病感染状况,2017—2020年连续四年对河南省规模养猪场猪伪狂犬病毒gE抗体和病原进行了检测。结果表明,2017—2020年,猪伪狂犬g E抗体平均个体阳性率分别为26.48%、28.88%、25.37%、20.30%,平均场群阳性率分别为55.48%、52.55%、51.14%、52.77%。种猪场猪伪狂犬g E抗体平均个体阳性率分别为25.19%、19.89%、20.94%、14.78%,整体呈逐年下降趋势;平均场群阳性率分别为44.65%、37.89%、40.74%、43.48%。,商品猪场猪伪狂犬gE抗体平均个体阳性率分别为27.27%、35.06%、27.86%、21.56%,平均场群阳性率分别为61.46%、60.77%、55.79%、54.36%,整体呈逐年下降趋势。从季节分布来看,春季、夏季、秋季、冬季规模猪场猪伪狂犬病病原平均个体阳性率分别为4.72%、0.53%、0.92%、1.90%,平均场群阳性率分别为14.53%、5.39%、5.41%、8.87%。可见,全省猪伪狂犬病防控形势复杂严峻,净化任务仍然较重。

甲醛溶液对重组鸡α干扰素工程菌灭活效果的影响

为了优化重组鸡α干扰素工程菌诱导表达后的灭活工艺,对甲醛溶液的使用浓度、灭活时间进行了比较,同时比较了灭活后重组鸡α干扰素蛋白制品的体外抗病毒活性。结果表明,0.4%的甲醛溶液37℃振荡灭活24h,灭活效果较好,同时蛋白制品体外抗病毒活性最高。

A型塞内卡病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用

为建立基于VP2蛋白、VP3蛋白检测猪塞内卡病毒A(SVA)抗体血清学方法。本研究扩增SVA VP2基因和VP3基因(VP23基因),基因全长1569 bp,并与原核表达载体pGEX-6p-1构建重组载体,IPTG诱导表达可溶性rVP23蛋白,经蛋白酶切除标签蛋白得到sVP23蛋白,分子量约为58 kDa。通过矩阵优化、确定临界值、敏感性分析、特异性鉴定,建立了SVA抗体间接ELISA方法。该方法的S/P临界值标准为0.35,批内批间变异系数均小于7%,与中和试验结果符合率为95.49%。上述结果表明,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于塞内卡病毒血清抗体检测和流行病学调查。

鸡白细胞介素-6的原核表达及其对疫苗免疫增强效果的研究

本研究采用PCR技术,扩增、克隆了鸡白细胞介素-6(ChIL-6)成熟肽基因并进行原核表达,对表达的鸡白细胞介素-6组蛋白(rChIL-6)通过尿素变性、复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化,经测定rChIL-6的促小鼠脾脏淋巴母细胞的增殖能力来评估重组蛋白的生物学活性;用4个不同浓度的rChIL-6在不同部位与NDV活疫苗、AIVH5N1灭活疫苗同时肌肉注射来评价其免疫增强作用。研究结果表明,表达rChIL-6为25ku左右,经纯化后的蛋白纯度在95%以上;100pg/mLrChIL-6注射组具有较高的促小鼠脾淋巴母细胞增殖活性;不同浓度的rChIL-6注射组对NDV和AIVH5N1疫苗都具有较好的免疫增强作用,但对其免疫抗体产生时间及抗体滴度峰值出现和维持时间均没有明显的影响,其中0.03μg/mLrChIL-6浓度注射组的对鸡疫苗的免疫增强作用最明显,过高或过低浓度的rChIL-6对疫苗免疫增强作用不显著。这些研究为新型免疫增强佐剂开发以及鸡免疫失败性疫病的预防和治疗奠定了基础。

口蹄疫病毒通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法的建立

为建立一种快速、敏感、特异的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)分型鉴别诊断实时荧光RT-PCR(Fluorescence quantitative,FQ-PCR)检测方法,根据O、A、AsiaⅠ三种血清型FMDV保守基因序列,设计能够检测到FMDV的特异性通用检测引物和A型检测引物,以及不同荧光素标记的MGB探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了FMDV通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法,对123份疑似FMDV感染的临床样品进行了检测。结果显示,建立的FMDV通用型、A型二重实时荧光RT-PCR检测方法在10~1～10~7拷贝/μL模板范围内有很好的线性关系;对pGEM-T/FMDV-T和pGEM-T/FMDV-A重组质粒出现阳性扩增信号,但对正常细胞培养物对照和其他7种病原对照未扩增出特异性曲线;自123份疑似FMDV感染样品中,检出10份FMDV-T阳性,6份FMDV-T/FMDV-A双阳性并且与基因测序结果一致。结果表明,本研究建立的FMDV通用型、A型二重实时荧光RT-PCR检测方法重复性好、敏感性高、特异性强,最低检测模板浓度为10拷贝/μL,可用于FMDV的快速分型检测,为FMDV的早期检测及临床诊断提供了新方法。

酸性氧化电位水用于手消毒效果检测

目的了解酸性氧化电位水对手的消毒效果。方法采用现场消毒试验方法进行。结果酸性氧化电位水消毒手的除菌合格率为100%;肥皂六步洗手法的除菌合格率为86.7%;肥皂外科洗手加酸性氧化电位水消毒手的除菌合格率为100%;肥皂外科洗手加安高特泡沫型皮肤消毒剂消毒手的除菌合格率为96.7%。结论用酸性氧化电位水进行手部消毒,可获得良好的除菌效果。

略谈高校新生的班主任工作

大专新生从规范有序的高中跨入各方面都需要自理的大专,在生活、学习等各方面难免会有不适应的方面。本文从分析大专新生的思想、学习和生活等情况入手,略谈大专新生的班主任应该从新生的思想上、校园文化上、班团干部等方面做好班主任工作。

血塞通配合针刺治疗椎基底动脉供血不足性眩晕的护理体会

目的探讨血塞通配合针刺治疗椎基底动脉供血不足性眩晕的疗效。方法对56例患者采用血塞通配合针刺治疗,结合自我按摩,强化以临床医学护理和自我保健护理相结合的全面护理方式,加强健康宣教以确保患者采取利于康复的生活与工作方式。治疗护理1个月后总结疗效。结果椎基底动脉供血不足性眩晕痊愈率55.3%,治疗总有效率96.4%。结论血塞通配合针刺结合保健护理的治疗方案对椎基底动脉供血不足性眩晕疗效显著。

护理干预对肌内注射时产生晕针的影响

目的了解护理干预对肌内注射的产生晕针的影响。方法通过采取掌握信息、心理介入、改变注射体位、实施无痛注射、改善医疗环境等护理干预措施。结果肌内注射晕针发生率由干预前的0.263%下降到干预后的0.072%,下降幅度为73%;同时未出现症状严重的重度晕针患者。结论对患者在肌内注射时进行护理干预,是临床治疗中预防和控制晕针的一项行之有效的措施。

网络环境下UBD设计模式在大学英语混合式教学中的应用与研究

在大学英语教学中,应用网络化外语混合式教学方法并运用UBD设计模式(Understanding by Design),能更有效地整合网络教学资源,对教学计划实施有效地调控,实现高校英语教学模式信息化的教学改革。

病死猪尸体无害化处理方法的调查及分析

一直以来,病死猪尸体的无害化处理都是困扰我国养猪业的难题。2013年3月,黄浦江死猪漂浮事件引起了全社会特别关注,国家也相继出台了一系列实施方案,制定了具体措施,加强了病死猪尸体无害处理的监督工作。但目前,我国处理病死动物尸体的传统工艺还存在高污染、高成本、操作烦琐等缺点,不便于推广,不利于开展无害化处理工作。因此,评价和筛选理想的无害化处理工艺,提高无害化处理效果,对推动全国病死猪无害化处理工作和保障畜产品安全具有重要意义。

科尔伯格理论与我国的德育教育

科尔伯格道德认知发展理论的精髓是他对道德认知发展提出的三水平六阶段的划分和道德教育的设想,在当代的教育改革中,以借鉴科尔伯格的道德认知发展理论,来完善我国的学校德育教育改革。

大学生英语语用失误研究浅析

一、引言 在大学英语教学中，由于长期受结构主义语言学理论的影响，对语用学没有给予充分重视，把语用失误简单地归咎于语言知识不足。从而使大学生在英语学习过程中，不能根据不同的语境恰当地表达自己的理解和意图，更不能准确理解谈话时对方的话语意义，从而导致语用失误的发生。语用失误会导致使用母语即本族语言的人与外语学习者之间的交际误会。

结果教学法和过程教学法在英语专业基础写作教学中的应用

英语专业基础写作课是一门相当重要的课程,但是一直以来教学效果却差强人意。本文针对英语写作课堂的教学特点,分析了过程写作教学法在实际写作教学中如何与结果教学法结合来提高学生的写作能力及综合运用语言的能力。

毛泽东管理思想在企业管理中的应用

毛泽东管理思想是对国内传统管理思想的继承和发展,也是对马克思主义管理思想的运用和创新。我国企业在决策管理、文化建设、人力资源管理以及运营管理中,都在运用着毛泽东管理思想,并取得了显著成效,因此,我们要学习毛泽东管理思想,并在此基础上进一步探索企业管理方法的创新之路。

56例高血压急症患者的观察与护理

高血压急症是高血压患者在疾病发展过程中或在某些诱因作用下,血压显著的或急骤的升高〔收缩压（SBP）〉20OmmHg,舒张压（DBP）〉130mmHg〕,常同时伴有心、脑、肾及视网膜等靶器官功能损害的一种严重危及生命的临床综合征[1];