子宫内膜异位症铁死亡相关诊断基因及治疗靶点的遗传分析

目的:通过生物信息学方法分析子宫内膜异位症(EMs)铁死亡相关诊断基因及治疗靶点。方法:从GEO及FerrDb数据库下载EMs相关基因芯片数据和铁死亡相关基因信息;通过LASSO算法及SVM-RFE算法筛选EMs铁死亡相关诊断基因,并分析这些基因的诊断能力;应用R软件对筛选出的诊断基因进行功能、通路、GSEA富集分析及GSVA富集分析;通过DGIdb数据库检索与诊断性基因相关的药物,并基于诊断基因构建ceRNA网络。应用CIBERSORT分析诊断基因与免疫细胞之间的相关性。结果:获得31个EMs铁死亡相关差异基因,通过LASSO算法及SVM-RFE算法筛选出8个EMs铁死亡相关的诊断基因,包括DUOX2、SLC38A1、MAPK1、PANX1、HSPB1、JUN、P4HB及PDK4,并证明了这些基因具有可靠的诊断能力。功能富集分析表明,这些诊断基因可能通过参与自噬、免疫细胞、细胞因子和多种激酶的调节等,在EMs的发病机制中发挥着重要的作用。通过DGIdb数据库检索到245种与8个诊断性基因相关的药物,而基于诊断基因构建的ceRNA网络揭示了这些基因之间存在着复杂的调控关系。CIBERSORT分析表明,EMs免疫微环境的变化可能与SLC38A1及P4HB密切相关。结论:本研究挖掘了EMs的铁死亡相关诊断基因及其治疗靶点,为研究EMs的分子机制、临床诊断和治疗提供了新的研究方向及理论基础。

剖宫产术中子宫肌瘤剔除病例的临床分析

目的探讨剖宫产术同期进行子宫肌瘤剔除的安全性和可行性。方法回顾性分析2019年1—12月在首都医科大学附属北京妇产医院进行剖宫产术分娩的506例单胎妊娠合并子宫肌瘤孕妇的临床资料,将剖宫产术同期剔除子宫肌瘤者纳入子宫肌瘤剔除组(250例),未行子宫肌瘤剔除者纳入剖宫产组(256例),分析两组的临床特征和分娩结局。结果1122例单胎妊娠合并子宫肌瘤的孕妇中,剖宫产率为45.1%,子宫肌瘤剔除组产时中转剖宫产的比例明显低于剖宫产组(P<0.05)。与剖宫产组比较,子宫肌瘤剔除组的手术时间更长,子宫肌瘤更大,且在常规应用缩宫素20U的基础上,额外应用缩宫素的比例明显升高,差异有显著性(P<0.05)。与剖宫产组比较,子宫肌瘤剔除组前壁子宫肌瘤、浆膜下子宫肌瘤、5~<10cm的子宫肌瘤和多发子宫肌瘤的比例明显增高(P<0.05)。结论剖宫产术中同期行子宫肌瘤剔除术安全可行,谨慎筛选子宫肌瘤剔除不会增加产后出血的风险。

妊娠期脂质代谢异常与早产的关系相关研究

目的探讨妊娠期脂质代谢异常与早产之间的关系。方法研究对象为2015年6月～2017年9月在首都医科大学附属北京友谊医院建档、定期产检并分娩146例,其中自发性早产50例、医源性早产47例及足月产49例。分别收集基本临床资料、胎盘组织、母体外周血及脐带血。用油红O染色法检测胎盘组织中脂质含量,用酶标法检测血液中的脂质水平;血脂水平检测包括血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)。结果 3组患者的年龄与体重指数(BMI)比较,差异无统计学意义;自发性早产组胎盘组织中脂质含量明显低于医源性早产及足月产组(P <0. 05),而医源性早产及足月产组之间差异无统计学意义;自发性早产组母体外周血中脂质含量明显低于医源性早产及足月产组(P <0. 05),脐带血中除甘油三酯3组比较差异无统计学意义外,自发性早产组母体脐带血中脂质含量明显高于医源性早产及足月产组(P <0. 05),而医源性早产及足月产组之间无论是外周血还是脐带血血脂水平比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论早产患者母胎之间胆固醇的代谢存在紊乱现象,母胎间脂代谢异常可能是早产发生的一个诱发因素,在早产的发病过程中起到了重要的作用。

人足月胎盘原代巨噬细胞分离与培养

目的:建立一种高效、可靠的人足月胎盘巨噬细胞分离与培养的方法。方法:收取正常足月患者胎盘组织,用胶原酶-胰蛋白酶-DNA酶连续消化、网筛过滤、红细胞裂解、淋巴细胞分离液离心分离。流式细胞术鉴定细胞纯度;对巨噬细胞进行形态学观察;CCK-8增殖实验分析细胞体外增殖活力。结果:利用此法可成功分离并培养胎盘巨噬细胞,并且每次实验可获得超过10~7个细胞。体外培养时,原代巨噬细胞4h开始贴壁。结论:本研究改进了前期足月胎盘巨噬细胞的分离与培养,提高了细胞纯度、活性及稳定性,并且一次性可获得大量的胎盘巨噬细胞。

子宫内膜异位症发病相关基因及通路的生物信息学分析与筛选

目的应用生物信息学方法基于基因表达(gene expression omnibus,GEO)数据库芯片数据进行数据挖掘,探寻子宫内膜异位症发病的关键基因及信号通路。方法从GEO数据库中查询并下载子宫内膜异位症(物种为人类)基因表达谱芯片数据,使用R软件进行差异基因的统计学分析,并对筛选出的差异基因进行验证、基因本体论(gene ontology,GO)及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析,然后进行蛋白相互作用网络分析;最后应用Cytoscape软件进行信号通路可视化。结果从GEO数据库中获得了GSE7305芯片数据集,共筛选出1537个差异基因,其中表达上调的基因为870个,表达下调为667个。GO富集分析显示差异基因主要富集于细胞质膜、细胞黏附、蛋白质同源二聚化活性等方面;KEGG富集分析显示差异基因主要富集于PI3K-Akt信号通路、补体信号通路以及细胞黏附等12条信号通路。收集2019年1月至2020年12月首都医科大学附属北京妇产医院住院手术的子宫内膜异位症患者40例,在位子宫内膜组织在手术切除后立即置于组织液中固定,石蜡包埋,并应用免疫组化验证C7的表达情况,结果与芯片一致。结论子宫内膜异位症的发病是众多基因及信号通路相互作用的结果,补体C7可能依赖补体信号通路促进子宫内膜异位症的发生发展。

子宫肌瘤发病关键基因及信号通路的生物信息学分析与筛选

目的:基于GEO数据库芯片数据应用生物信息学方法进行数据挖掘,探寻子宫肌瘤发病的关键基因及信号通路。方法:从GEO数据库中查询并下载子宫肌瘤(物种为人类)基因表达谱芯片数据,使用R软件进行差异基因的统计学分析,并对筛选出的差异基因进行GO及KEGG富集分析,以及蛋白互作网络分析;应用Cytoscape软件进行信号通路可视化。收集子宫肌瘤及瘤旁组织样本各30例,RT-PCR及Western blot法检测关键基因表达情况,从而对芯片结果进行验证。结果:从GEO数据库中获得了GSE593芯片数据集,筛选出172个差异基因,其中高表达72个,低表达100个。GO富集分析显示,差异基因主要富集于细胞外间隙、细胞外基质、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的负调控、血管生成、促细胞成熟、蛋白质结合等方面;KEGG富集分析显示,差异基因参与的主要信号通路富集于流体剪切应力与动脉粥样硬化信号通路、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、黏着斑激酶信号通路以及EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性信号通路等。RT-PCR及Western blot结果与芯片结果一致。结论:子宫肌瘤的发病是众多基因及信号通路相互作用的结果,PRKCB在子宫肌瘤的发生发展中可能起着重要作用。

ABCA1在卵巢癌中的表达及临床意义

目的探讨ATP结合盒转运体A1(ABCA1)在卵巢癌(ovarian cancer)中的表达及临床意义。方法选择2016-01至2020-12首都医科大学附属北京妇产医院患者212例,其中106例卵巢癌患者为卵巢癌组,另106例良性卵巢上皮性肿瘤患者为对照组。常规收集患者空腹肘静脉血,用酶氧化法分析两组之间血脂含量[三酰甘油(CHO)、总胆固醇(TG)、高密度脂蛋白(HDL)及低密度脂蛋白(LDL)]并进行差异分析;采用免疫组化及Western-blot检测组织中ABCA1的表达情况并进行差异分析;采用Kaplan-Meier生存分析方法估计ABCA1表达情况及卵巢癌患者生存之间的关系,并应用Log-rank方法进一步验证。结果与对照组相比,卵巢癌组患者外周血中血脂水平(CHO、TG、HDL、LDL)显著降低(P<0.01);ABCA1在两组中均存在表达,而卵巢癌组的表达量(0.15±0.02)明显高于对照组(0.06±0.01),差异有统计学意义(P<0.01);生存分析结果显示,ABCA1阳性表达组的中位总生存期为48.0个月(95%CI:45.9~51.5个月),而ABCA1阴性表达组的中位总生存期为57.0个月(95%CI:54.7~58.9个月),ABCA1表达量与卵巢癌患者生存期之间存在负相关(P<0.01)。结论ABCA1与卵巢癌发病密切相关,可能通过调控卵巢癌的脂质代谢从而参与卵巢癌的发生发展,进而影响患者预后。

ABCA1对胎盘脂质代谢的影响

目的:探讨ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)对胎盘脂质代谢的影响。方法:应用酶消化法分离胎盘原代滋养细胞,流式细胞术进行细胞纯度鉴定,免疫荧光检测细胞中ABCA1的表达情况。实验组应用肝X受体激动剂(T0901317)上调(以无菌磷酸缓冲盐溶液代替T0901317作为对照组)或siRNA下调(以mock-siRNA代替siRNA作为模拟转染组)滋养细胞中ABCA1的表达水平并应用RT-PCR及Western-blot进行验证,采用Amplex胆固醇检测试剂盒检测ABCA1表达改变后滋养细胞在实验开始后的2小时、4小时、6小时及8小时胆固醇流出率。结果:从足月胎盘中分离出原代滋养细胞,其纯度在90%以上,ABCA1在滋养细胞中存在表达。加入T0901317后,滋养细胞中ABCA1在蛋白水平的表达量(0.37±0.04)明显高于对照组(0.08±0.02),差异有统计学意义(P<0.05);而在转染siRNA后,滋养细胞中ABCA1在蛋白水平的表达量(0.10±0.01)低于对照组(0.16±0.02),差异有统计学意义(P<0.05)。在ABCA1表达上升后2小时、4小时、6小时、8小时,滋养细胞胆固醇流出率与对照组相比明显升高(4.70±0.03vs3.39±0.00、7.66±0.05vs5.28±0.02、14.73±0.03vs8.66±0.02、20.94±0.07vs13.47±0.03),差异均有统计学意义(P<0.05);而当ABCA1表达量下降后2小时、4小时、6小时、8小时,滋养细胞胆固醇流出率与对照组相比明显降低(2.30±0.03vs3.53±0.02、3.35±0.03vs5.17±0.01、5.37±0.05vs7.01±0.02、7.56±0.06vs11.49±0.03),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:当胎盘中ABCA1表达出现异常时,可通过影响滋养细胞胆固醇的转运而导致母胎界面脂质代谢出现紊乱。

他克莫司诱导移植术后糖尿病发生机制

目的探讨他克莫司诱导移植术后糖尿病发生机制。方法应用免疫组化、酶联免疫吸附实验、原位末端转移酶标记技术及电子显微镜技术研究在他克莫司单因素干预下制作的SD大鼠糖尿病模型血清胰岛素及C肽浓度、胰岛细胞功能、超微结构变化、凋亡及肝细胞胰岛素受体表达情况,分析其与对照组之间的差异。结果酶联免疫吸附实验显示糖尿病组大鼠胰岛素及C肽浓度较对照组明显降低,原位末端转移酶标记技术及电镜观察显示糖尿病组大鼠胰岛细胞凋亡细胞核数、细胞空泡化数较对照组明显增多。免疫组化显示糖尿病组大鼠肝脏中胰岛素受体数较对照组明显减少。所有组间差异都有统计学意义(P<0.05)。结论他克莫司通过诱导胰腺细胞凋亡使胰岛素分泌减少及诱导胰岛素受体表达减少使胰岛素抵抗增加,使血糖浓度升高诱发糖尿病。

Gankyrin在膀胱癌中的表达及临床意义

目的：探讨Gankyrin在膀胱癌中的表达及临床意义。方法：应用免疫组织化学检测2002年9月~2008年10月手术切除的60例膀胱癌组织及癌旁组织中Gankryin的表达水平;应用RT-PCR检测32例新鲜膀胱癌组织中Gankyrin的表达情况,并用统计学方法分析Gankyrin与膀胱癌的TNM分期及分化程度等临床病理资料及预后的关系。结果：Gankyrin在膀胱癌组织中的表达率为73.3%,显著高于癌旁组织的21.7%,且Gankyrin的表达与肿瘤TNM分期及分化程度以及患者预后显著相关（P〈0.05）,而与患者的性别及年龄无关（P〉0.05）。结论：Gankyrin在膀胱癌中普遍表达且与其恶性程度及预后显著相关,可作为判断膀胱癌生物学行为及预后的有效指标。

ABCA1基因在妊娠期疾病中的研究进展

妊娠期疾病一般认为是体内外多种因素共同参与,造成母体及胎儿生理机能出现异常,引起的一系列相关疾病,如早产、妊娠期糖尿病、妊娠期高血压以及子痫前期等。研究发现脂质代谢紊乱与妊娠期疾病的发生密切相关[1-3]。

ABCA1对滋养细胞基因表达谱的影响

该文从基因学角度探讨了ABCA1对人滋养细胞功能的影响。在人滋养细胞中调控ABCA1的表达,通过表达谱芯片检测ABCA1表达改变后滋养细胞中基因及相关信号通路的改变,Western blot及qRT-PCR验证芯片结果。结果显示,上调ABCA1表达时,有197个基因表达升高,有190个基因表达下降;而下调ABCA1表达时,有335个基因表达升高, 459个基因表达下降。GO和KEGG分析表明, ABCA1表达上升或下降后可导致滋养细胞内多个信号通路发生改变。qRT-PCR及Western blot检测发现,与阴性对照组相比, ABCA1上调后细胞中S1PR1的m RNA及蛋白水平明显升高,而CCL8、CXCL10与CXCL11的mRNA及蛋白水平明显降低;下调ABCA1的表达后,细胞中S1PR1的mRNA及蛋白水平明显降低,而CCL8、CXCL10与CXCL11的mRNA及蛋白水平明显升高,与芯片的结果完全一致。这些结果表明, ABCA1可通过调控多个信号通路而影响滋养细胞功能。