一种骨髓单个核细胞新型示踪方法——细胞膜染料DiD标记法

目的检测细胞膜染料DiD对骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BM-MNC)的染色效率和造血功能的影响,并用DiD示踪BM-MNC活体直观观察DiD标记的BM-MNC在小鼠颅骨骨髓内的顺利归巢。方法体外流式细胞术分析方法和激光共聚焦扫描显微镜成像方法检测BM-MNC的DiD染色效率;CCK-8细胞活性-增殖实验和造血集落形成实验,检测DiD染料对BM-MNC的造血功能的影响;单/双光子共聚焦显微镜下活体直观观察DiD标记的BM-MNC在小鼠颅骨骨髓内的归巢。结果 BM-MNC的DiD染色效率高达90%以上,且DiD对BM-MNC的细胞活性-增殖和造血能力均无明显的毒性影响(P>0.05);单/双光子共聚焦显微镜下,在活体小鼠颅骨骨髓内可直观观察到DiD标记的BM-MNC的顺利归巢。结论细胞膜染料DiD对BM-MNC的染色效率高、均一,无明显细胞毒性,荧光不易被淬灭,且受机体自身组织的背景干扰少,用于活体示踪时DiD标记的BM-MNC可顺利归巢到骨髓。

基于主成分分析和反向传播神经网络的肝癌细胞后向散射显微光谱判别

为了实现血液中肝癌细胞的自动识别,本文基于主成分分析(PCA)和反向传播(BP)神经网络算法对三种细胞(小鼠的白细胞、红细胞和人体肝癌细胞Hep G2)进行了识别研究。利用光纤共聚焦后向散射(FCBS)光谱仪获取光谱数据后进行PCA,选取前两个主成分作为光谱的特征,建立一个具有2个输入层节点、11个隐层节点、3个输出节点的神经网络模式识别模型。选取195例对象数据训练该模型,随机抽取150组数据作为训练集,45组数据作为测试集,验证模型给出的细胞是否识别准确。结果显示三种细胞的整体识别准确率在90%以上,平均相对偏差只有4.36%。实验结果预示采用PCA+BP算法能够从红细胞和白细胞中自动识别肝癌细胞,这将为研究肝癌的转移与肝癌的生物代谢特性提供有利的工具。

前列腺癌动物模型中循环肿瘤细胞实时检测

目的建立一种转移性前列腺癌原位动物模型及研究在体实时检测循环肿瘤细胞（CTC）的可行性。方法将绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒载体LV-GFP，转染到人前列腺癌PC3细胞株；利用Puromycin筛选获得稳定转染的PC3-GFP细胞株。将20只雄性裸鼠随机分2组，应用1×10^6个PC3-GFP或普通PC3细胞裸鼠腋下注射获得皮下瘤。分离表达GFP的皮下肿瘤组织，将其切成1mm3大小的组织块，并将组织块种植于10只雄性裸鼠前列腺包膜下；并于种植后5、10、15d分别检测CTC数目，分析CTC数目与时间的相关性。结果成功建立PC3-GFP细胞株，该系生长曲线与未转染细胞一致；裸鼠皮下成瘤率为100％。PC3-GFP原位瘤模型接种10只小鼠，8只成瘤，在5d开始检测时，有6只出现CTCs，平均2．37CTCs／h；10d，8只小鼠均检测到CTCs，平均6．25CTCs／h；15d，CTCs数目平均99．75CTCs／h。结论建立的转移性原位前列腺癌模型能模拟肿瘤转移的过程；在体实时检测CTC，可对肿瘤转移做到早期诊断，对肿瘤治疗效果进行实时监测和评估。