基于生物信息分析焦亡在脑出血发病机制中的作用及临床意义

目的:使用生物信息学对脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)患者的血肿周围组织及对照样本的基因芯片数据进行分析,确定与ICH后细胞焦亡相关的关键分子,进一步探讨ICH的病理机制及潜在的治疗靶点。方法:GEO数据库中选取4例ICH患者血肿周围组织和对侧相应部位(白质与灰质)正常脑组织样本中差异表达基因谱数据,对差异表达基因(differentially expressed genes,DRGs)和焦亡相关基因(pyroptosis-related genes,PRGs)进行合并分析,确定差异表达的焦亡相关基因(differentially expressed-PRGs,DE-PRGs)。对筛选出的DE-PRGs进行聚类,并进行GO、KEGG和蛋白相互作用网络分析。结果:与对照组织相比,在血肿周围组织中,共发现44个DE-PRGs。GO和KEGG分析表明,这44个DE-PRGs主要富含在细胞凋亡过程、炎症反应的正调控、核因子κB通路正调控、NOD-样受体信号通路及细胞焦亡过程中。对44个DE-PRGs进行蛋白质网络分析,筛选出10个关键基因:IL-1β、CXCL8、STAT3、TLR2、CASP1、ICAM1、IRF1、PTGS2、NLRP3和IL1RN;GO富集功能分析显示,这些关键基因在炎性反应、焦亡、信号通路等方面显著丰富。结论:本研究采用生物信息学分析发现了与ICH后焦亡相关的DE-PRGs 44个,进一步通过蛋白质网络分析筛选出10个关键基因,功能分析显示均与ICH后焦亡机制相关,可能是ICH的潜在治疗靶点。

中性粒细胞在缺血性脑卒中的作用研究进展

缺血性脑卒中是一种急性中枢神经系统疾病,发病率、致死率、致残率居高不下,给患者家庭和社会带来了极大负担。缺血性脑卒中病理机制复杂,治疗手段有限,亟需进一步探索病理机制及新的治疗靶点。既往中性粒细胞在缺血性脑卒中的作用长期被忽视,但近十年的研究提示中性粒细胞活跃参与了缺血性脑卒中后神经损伤与修复过程。同时,中性粒细胞胞外陷阱(neutrophil extracellular traps,NETs)作为中性粒细胞的一种新的调控机制,在缺血性脑卒中后急性炎症、血栓形成、血管损害等病理过程中发挥重要作用,可能是促进缺血性脑卒中后新生血管和功能恢复的关键。本文重点评述了中性粒细胞特别是NETs在缺血性脑卒中神经损伤与修复中的作用以及靶向中性粒细胞和NETs治疗的相关进展。

β-环糊精键合蚀刻开管毛细管电色谱柱的制备与评价

研究环糊精键合蚀刻毛细管柱的制备方法,考察了电渗流性质及其电色谱性能;其电渗流大小和方向都可调控;有效分离了碱性蛋白和硝基苯酚位置异构体;对安息香和氨基酸衍生物对映异构体能部分分离。

毛细管电泳检测神经细胞凋亡

建立了毛细管电泳检测凋亡细胞DNA片段的方法。以DNA相对分子质量标准品为溶质,考察了分离条件(电压、进样时间、温度、聚合物浓度)对分离的影响。在优化条件下,利用毛细管无胶筛分电泳对缺氧缺血过程中不同时间点神经PC12细胞DNA片段进行了分析,并与流式细胞仪结果比较,研究缺氧缺血时胶质细胞凋亡过程。

毛细管电泳紫外检测分析氨基酸铜配合物

用六甲基二硅胺烷对石英毛细管进行硅烷化处理,在铜离子 庚基磺酸盐 乙酸缓冲体系中,于254nm处紫外检测分析了氨基酸。考察了各种条件对检测灵敏度和溶质迁移的影响。在合适条件下,五种氨基酸得到基线分离。

混合烷基开管电色谱柱的制备和评价

利用溶胶 -凝胶 ( Sol-gel)技术制备了混合烷基开管毛细管电色谱柱 ( C8-C13OT-CEC) ,并考察了其电渗流行为和电色谱性能。研究了流动相中甲醇含量对芳香族中性化合物保留的影响 ,发现 C8-C13 OT-CEC柱体现反相分配机理。5种芳香族化合物和 4种苯同系物在 C8-C13 OT-CEC柱上分离良好。同时还考察了分离电压和柱内径对柱效的影响 。

瑞芬太尼联合异丙酚用于老年腹腔镜胆囊切除术麻醉的效果分析

胆囊良性病变为老年临床中的常见疾病之一.这种疾病的病程较长,同时老年患者会合并多种病症,同时病情发展迅速,这将给临床手术带来了很大的风险.腹腔镜胆囊切除术的的手术时间短,有利于术后的恢复.手术中麻醉药物的选择至关重要.本研究对瑞芬太尼联合异丙酚的麻醉效果进行探讨,取得了满意的效果,现进行如下报道.

使用含离子涂层柱的毛细管电泳和毛细管电色谱的研究进展

毛细管电色谱是近年发展起来的高效、高选择性的微分离技术。与一般的毛细管电泳和使用ODS反相填料的毛细管电色谱相比 ,含离子涂层柱的毛细管电泳和毛细管电色谱能提供较大且可控的电渗流 ,便于拓宽分离对象 ,优化分离条件。对使用含离子涂层柱的毛细管电泳和电色谱的特点。

毛细管电泳检测大鼠大脑皮质中三磷酸腺苷二钠含量的动态变化

本文建立了大鼠大脑皮质中三磷酸腺苷二钠(ATP)检测的毛细管电泳方法.以89 mmol/L Tris,89 mmol/L硼酸,2 mmol/L EDTA组成的缓冲液(1×TBE,pH8.0)为分离电解质,在聚丙烯酰胺涂层毛细管上,ATP能与样品中的其它组分高效分离.ATP的浓度在0.5～10μg/mL范围内其峰面积和浓度有良好的线性关系.方法的检出限为0.04 μg/mL.ATP迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.8%和5.7%(n=5).探讨了脑缺血再灌流后ATP含量的变化规律,结果表明短暂脑缺血再灌流后存在着继发性能量衰竭的现象.

CDK抑制剂olomoucine对星形胶质细胞增殖活化的影响

目的 观察体外培养的星形胶质细胞(astrocyte, AS) 对物理损伤的反应, 探讨细胞周期调控对AS活化及增殖的影响。方法 建立体外培养大鼠纯化的AS机械损伤模型, 利用免疫细胞化学方法观察损伤区的细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、5- 溴脱氧尿苷(BrdU) 的动态变化; 以及周期素依赖的蛋白激酶(CDK) 选择性抑制剂olo moucine干预后PCNA、BrdU表达的变化。结果 物理损伤后24 h, 损伤边缘区AS明显活化, 细胞数目增加、胞体肥大, 且交织成网状; PCNA表达增强, BrdU阳性细胞比率增加, 大量AS进入增殖期。特异性细胞周期抑制剂olo moucine干预后, AS的PCNA表达增强被抑制, 胞体肥大程度减轻, BrdU阳性细胞比率减少。结论 损伤刺激可促使胶质细胞细胞周期(cell cycle) 启动、反应性增殖活化; olomoucine可以通过抑制CDK调控反应性AS的肥大、增殖。

大鼠脑缺血再灌注后神经元和星形胶质细胞凋亡的比较研究

目的比较研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经元和星形胶质细胞的凋亡规律。方法建立大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型,在缺血再灌注后1、3、7、14d断头取脑,应用流式细胞分选技术和原位末端标记法分别检测各组MCAO后不同时期神经元和星形胶质细胞凋亡情况。结果局灶性脑缺血再灌注后,海马区星形胶质细胞凋亡数量超过神经元,其凋亡以再灌注3d最为显著,而神经元则以7d最为显著;而皮层区神经元凋亡数量超过星形胶质细胞,两种细胞凋亡均在再灌注后7d达高峰。结论脑缺血再灌注后,皮层和海马区的神经元及星形胶质细胞均可发生凋亡,海马区星形胶质细胞比皮层区更易凋亡,而皮层区神经元比海马区更易凋亡。

8-羟基喹啉衍生化β-环糊精键合硅胶液相色谱固定相的合成与评价

β－环糊精键合硅胶经对甲苯磺酰化后， 与８－羟基喹啉反应得到８－羟基喹啉衍生化β－环糊精键合硅胶固定相（ＱＣＤＳ）． 采用元素分析、热分析及固体核磁波谱对键合固定相进行表征． 考察了ＱＣＤＳ对位置异构体、丹磺酰化氨基酸异构体、苯丙酸类药物和核苷等的分离性能．

缺血缺氧对星形胶质细胞合成和分泌BDNF的影响

目的:观察缺血缺氧对星形胶质细胞合成和分泌脑源性神经营养因子(BDNF)的影响。方法:培养的星形胶质细胞分别在低氧去血清中培养1h、3h、6h、12h、1d、3d,采用逆转录PCR检测星形胶质细胞BDNF mRNA的表达,ELISA检测培养上清液中BDNF的浓度。结果:低氧去血清培养1h时星形胶质细胞BDNF mRNA表达达峰值,之后逐渐降低,培养12h后BDNF mRNA持续低于正常培养水平。在低氧去血清刺激下培养上清液中BDNF的浓度迅速增加,培养12h时达峰值,之后逐渐降低,保持低水平。结论:缺血缺氧促进星形胶质细胞活化,反应性增加BDNF的合成和分泌,这种变化与缺血后神经营养补给有关。

局灶性脑缺血再灌注缺血脑区和远隔脑区氨基酸的动态变化

目的研究大鼠局灶性大脑中动脉缺血再灌注过程中缺血脑区和远隔脑区氨基酸动态变化的差异。方法颈内动脉插线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,采用微透析技术取样,高效毛细管电泳-激光诱发荧光法检测,分别观察局灶性脑缺血再灌注过程中缺血脑区（纹状体）和远隔脑区（海马）细胞外3种氨基酸含量的动态变化。结果纹状体细胞外谷氨酸、甘氨酸及γ-氨基丁酸3种氨基酸含量在局灶性大脑中动脉缺血20min时即显著升高,再灌注后有所下降,在缺血60min及再灌注60min一直维持在显著高于基线值的水平;海马细胞外3种氨基酸含量缺血20~40min明显升高,以后有所回降,再灌注20-40min又上升,缺血期和再灌注期分别出现一次高峰;假手术组动物纹状体和海马细胞外3种氨基酸含量在相应各时间点与基线值相比无显著变化。结论局灶性大脑中动脉缺血再灌注不仅导致缺血脑区的损伤,在远隔脑区也引起相应的病理生理变化。

短暂脑缺血再灌注后大鼠大脑皮质ATP含量的动态变化

目的 探讨短暂脑缺血再灌注后大鼠大脑皮质ATP含量的动态变化及其与神经功能恢复之间的关系。方法 采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ,缺血 10min后于再灌注后 0h、1h、3h、6h、12h、2 4h和 72h应用毛细血管电泳法分别测定额顶叶皮质的ATP含量 ,观察其变化规律。结果 缺血 10min后额顶叶皮质ATP的含量急剧下降至对照组的 2 0 %。再灌注后ATP的含量逐渐恢复 ,于再灌注后 1h、3h、6h和 12h恢复至对照组的 70 .5 %、6 5 .7%、84 .8%和 86 .9%。再灌注后 2 4hATP含量再次下降 ,再灌注后2 4h和 72hATP含量仅为对照组的 5 0 % ,与对照组相比差异均有显著性 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。缺血 10min再灌注后大鼠肢体功能可逐渐恢复 ,但再灌注后 2 4h起出现不愿活动和进食等表现。结论 短暂脑缺血再灌注后大鼠额顶叶皮质存在细胞能量系统功能恢复滞后的现象。同时 ,随着再灌注的进行还出现了继发性细胞能量系统功能衰竭的现象 。

细胞周期调控对大鼠全脑缺血后海马迟发性神经元死亡的影响EFFECTOFCEL

目的 观察细胞周期调控对大鼠全脑缺血再灌流后海马区迟发性神经元死亡 (delayed neuronal death,DND) 以及星形胶质细胞的活化、增殖的影响。方法 建立大鼠短暂性全脑缺血再灌流模型, 利用尼氏染色、TUNEL、免疫组织化学方法观察再灌流后细胞周期素依赖的蛋白激酶 (cyclin depedent kinase, CDK) 抑制剂 Olomoucine 对海马DND以及星形胶质细胞活化增殖的影响。结果 全脑缺血再灌流后 3d、7d、30d海马神经元明显脱失, 部分 CA1、CA2区神经元凋亡; 星形胶质细胞数目增多, GFAP表达上调, 应用Olomoucine后TUNEL阳性神经元数目明显减少, 幸存神经元数目增加; 星形胶质细胞数目无明显增多, GFAP表达明显下调。结论 CDK抑制剂 Olomoucine可有效抑制大鼠全脑缺血后海马神经元DND以及星形胶质细胞活化增殖。

癫痫和细胞因子

研究表明细胞因子参与癫痫的发病机制。本文通过综述癫痫发作早期,脑内多种细胞因子(白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子-α等)表达增加,外源性及特定细胞因子转基因动物影响癫痫发作,说明细胞因子在癫痫发生过程中起作用。另外,抗炎药物治疗癫痫发作有效,提示抗炎药物可能通过调节与炎症密切相关的细胞因子水平发挥作用。然而,细胞因子参与癫痫发作的具体机制与功能尚待于进一步研究。

GFAP启动子调控的双顺反子真核表达载体pGFAP-IRES2-EGFP-p27的构建及表达分析

目的构建并鉴定带GFAP启动子的Flag-p27和EGFP双顺反子真核表达载体,观察其表达。方法利用IRES和GFAP启动子,通过质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切、连接、转化等多种基因工程技术,经多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的星形胶质细胞特异性真核表达载体pGFAP-IRES2-EGFP-p27。转染体外培养的星形胶质细胞,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27的表达。结果经酶切鉴定和测序鉴定,成功构建真核表达载体pGFAP-IRES2-EGFP-p27。转染星形胶质细胞后可见EGFP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中P27表达水平明显增高。结论GFAP启动子能启动目的基因p27和EGFP在星形胶质细胞的表达,连于Flag-p27的下游EGFP可作为报告基因,指示p27的表达情况。带启动子GFAP的Flag-p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究星形胶质细胞增生与神经系统疾病的关系,并为寻找神经系统疾病的有效基因治疗途径奠定基础。

大鼠海马和大脑皮质TRPA1 mRNA的表达

目的观察TRPA1离子通道(一种瞬间受体电位离子通道)在大鼠海马和大脑皮质的表达情况。方法提取SD成年大鼠大脑皮质、双侧海马和脊髓背根神经节(DRG,dorsalrootganglion)组织mRNA,应用RT-PCR(re-versetranscriptasePCR)技术检测TRPA1离子通道mRNA的表达;同时制作大鼠大脑和脊髓背根神经节冰冻冠状切片,采用原位杂交染色的方法用地高辛标记分子探针,检测TRPA1离子通道mRNA的表达。结果RT-PCR和原位杂交染色的结果均显示在大鼠海马和大脑皮质均存在TRPA1离子通道。结论在大鼠海马和大脑皮质均存在TRPA1离子通道。

TREK-1通道活性改变对大鼠局灶性脑缺血后细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响

目的:观察双孔钾通道TREK-1活性改变对大鼠局灶性脑缺血后细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法:45只大鼠随机分为假手术组(10只)、对照组(10只)和干预组(25只)。建立大鼠光化学脑缺血模型,假手术组不注射玫瑰红,干预组侧脑室注射不同浓度(100μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1 mmol/L)亚麻酸(LIN),对照组注射等量生理盐水。应用免疫荧光双标法观察正常生理情况下TREK-1在大脑神经细胞中的表达,TUNEL及DAPI双标法检测缺血边缘区细胞凋亡,Western blot法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-erk)表达。结果:正常生理情况下,TREK-1在神经元和星形胶质细胞中均有表达。与假手术组相比,对照组大量细胞凋亡,Bcl-2/Bax值下降,p-erk蛋白增加(P<0.05);与对照组比较,干预组细胞凋亡显著减少,Bcl-2/Bax值上升,p-erk蛋白降低(P<0.05)。结论:TREK-1在神经元和星形胶质细胞中均有表达。TREK-1激动剂LIN可显著抑制脑缺血后细胞凋亡,上调Bcl-2与Bax比值,抑制erk磷酸化。