新型冠状病毒混合样品检测研究

目的探究在新型冠状病毒样本混合检测中,稀释混样检测和混采检测的合理样本数量,为大人群样本的核酸筛查提供更为快捷有效的检测方案。方法设计一种利用注射器纯化柱进行大体积样本保存液核酸提取方法,在稀释混样检测和混采检测中,对比使用该方法将全部样本保存液提取核酸和只取200μL样本保存液提取核酸时检测结果的差异。结果稀释混样检测中,对于单独一份阳性样本,取全部保存液样本提取核酸时ORF1ab基因和N基因的Ct值比取200μL保存液样本提取核酸时分别小3.583、2.904;当1份阳性样本与9份、19份阴性样本混合后,将全部样本保存液提取核酸,不同混合人份检测的Ct值差异无统计学意义(P>0.05);当混合样本多于20份时,Ct值明显变大。混采检测中,取所有保存液样本提取核酸检测所得Ct值明显小于只取200μL保存液样本提取核酸所得Ct值(目前通行方案)。结论在新型冠状病毒混合检测中,采用注射器纯化柱法将全部样本的混合保存液提取核酸,稀释混样检测时,可将混合人数上限由20人提高到50人;采用混采检测时,可以明显降低核酸检测的Ct值,从而提高检出率,减少混合检测过程中假阴性现象的发生。

新型冠状病毒核酸检测过程中灵敏度损失的定量分析

目的定量分析新型冠状病毒核酸检测过程中的灵敏度损失,为改进检测流程、解决假阴性问题提供支持。方法以N基因假病毒为样本,对核酸提取方法、保存液pH、保存液体积、提取核酸所用的样本保存液体积中可能影响诊断灵敏度的各种因素进行系统的定量分析和优化,并对优化的检测方法与目前常规检测法进行比较。结果用柱法提取核酸,使用酸性样本保存液可提高检测灵敏度;随着保存液体积增大,假病毒释放得更充分,当保存液体积达到3 mL时假病毒接近完全洗脱;分别取200μL和3 mL保存液样本提取核酸,检测灵敏度相差10倍以上;全部保存液样本用离心柱法提取核酸且PCR体系中加入12μL模板时,检测灵敏度达70 copies/mL;取200μL样本提取核酸且PCR体系中加入4μL模板时,灵敏度为700 copies/mL。结论将新型冠状病毒标本存放于偏酸性样本保存液中,利用尽量多的样本保存液,用离心柱法提取核酸,并在PCR体系中加入最大量的模板,该操作法可较目前常规检测法将最终检测灵敏度提高10倍以上。